纈沙坦對不穩定型心絞痛患者CD4+CD28－T淋巴細胞及預后的影響

楊 斌 譚麗娟 鄭春燕 苑海濤(青島大學醫學院附屬醫院心內科，山東 青島 266003)

纈沙坦對不穩定型心絞痛患者CD4+CD28－T淋巴細胞及預后的影響

楊 斌 譚麗娟 鄭春燕 苑海濤1(青島大學醫學院附屬醫院心內科，山東 青島 266003)

目的研究纈沙坦對不穩定型心絞痛患者外周血中CD4+CD28－T淋巴細胞的比例及其相關細胞因子IFN-γ的影響。方法將85例經冠狀動脈造影證實的不穩定型心絞痛患者隨機分為常規治療組和纈沙坦治療組。采用流式細胞儀檢測42例常規治療組和43例纈沙坦治療組患者治療前及治療6個月后外周血中CD4+CD28－T淋巴細胞的數量，以酶聯免疫吸附試驗(ELISA法)測定治療前后血漿中干擾素-γ(IFN-γ)水平，并同時觀察兩組患者出院后6個月內因不穩定型心絞痛再次入院、急性心肌梗死、血運重建及死亡等主要心血管事件(MACE)情況。結果兩組患者在治療6個月后CD4+CD28－T淋巴細胞的比例及血漿中IFN-γ水平均較治療前下降(P＜0.05)，纈沙坦治療組下降較常規治療組更為明顯(P＜0.05)。纈沙坦治療組6個月內的主要心血管事件顯著減少(P＜0.05)。結論纈沙坦可能通過降低不穩定型心絞痛患者外周血中CD4+CD28－T淋巴細胞的比例及血漿中IFN-γ的水平，從而達到穩定斑塊，改善預后的作用。

不穩定型心絞痛;T淋巴細胞;纈沙坦;干擾素-γ

不穩定型心絞痛(UAP)的發病機制是冠狀動脈粥樣斑塊的破裂、出血，繼而血栓形成，引起冠狀動脈不完全阻塞，而動脈粥樣斑塊的破裂與炎癥和免疫反應有密切的關系〔1，2〕，新近研究表明 CD4+CD28－T淋巴細胞在VAP患者外周血中出現異常擴增(增加10%)而在穩定型心絞痛和正常人中這種T淋巴細胞的表達小于1%，表明CD4+CD28－T淋巴細胞異常增殖可能是其發病機制之一〔3〕。調節CD4+CD28－T淋巴細胞的比例有可能穩定斑塊，減少臨床缺血事件的發生。已有研究證明血管緊張素Ⅱ受體拮抗劑(ARB)能夠調節T細胞亞群的失衡〔4〕，而本研究目的是觀察纈沙坦能否降低UAP患者外周血CD4+CD28－T淋巴細胞的比例及其對UAP患者預后的影響。

1 資料與方法

1.1 研究對象 2009年10月至2011年2月，本院心內科收治的85例UAP患者，其中男63例，女22例，年齡(61±7.5)歲，符合Braunwald分級Ⅱ或Ⅲ級，入院前1個月內出現過靜止性胸痛，有一過性的ST段壓低或T波倒置，CK-MB和CTnT升高小于正常上限的2倍。排除合并嚴重心力衰竭(LVEF＜40%)、高血壓、風心病、心肌病、嚴重的肝腎功能不全、風濕系統疾病、嚴重感染、惡性腫瘤及應用炎癥抑制物如非甾體類抗炎藥或類固醇等的患者。將上述85例患者隨機分為兩組:常規治療組42例(男30例，女12例)和纈沙坦(代文)組43例(男33例，女10例)，所有患者均行冠狀動脈造影檢查顯示至少有1支血管直徑狹窄超過50%。兩組患者的年齡、性別和冠心病危險因素均無顯著性差異。見表1。

1.2 給藥方法 常規治療組給予常規藥物治療(阿司匹林、低分子肝素、β-受體阻滯劑、他汀類、硝酸酯類和鈣離子拮抗劑等藥物)，纈沙坦治療組在常規治療基礎上加用纈沙坦(valsartan，代文，諾華公司產品)80 mg，1次/d，連續服藥6個月，用藥期間注意觀察腎功能和血鉀及血壓的變化。

1.3 主要試劑和儀器 所有流式試劑均購于法國Immunotech公司，抗體均為鼠抗人單克隆抗體，主要試劑及產品編號如下:PE－CD4+:Im0499，FITC－CD28－:Im1236，同型對照 PE/FITCIgG1:Im 0670/Im 0639，溶血素Optilyse:PNA11894;BECKMAN COULTER公司的流式細胞儀 EPICS XL-4。ELISA試劑盒(IFN-γ)購于北京中杉金橋生物技術有限公司，IFN-γ最低檢測濃度為8 pg/m l。

表1 兩組患者一般臨床資料的比較(±s)

表1 兩組患者一般臨床資料的比較(±s)

指標 常規治療組(n=42)纈沙坦組(n=43)59±6 61±5性別(男/女) 30/12 33/10吸煙史(吸/不吸) 25/17 30/13糖尿病(有/無) 26/16 28/15家族史(有/無) 27/15 29/14總膽固醇(mmol/L) 4.75±0.62 4.92±0.57低密度脂蛋白膽固醇(mmol/L) 3.53±0.42 3.35±0.86高密度脂蛋白膽固醇(mmol/L) 1.12±0.28 0.97±0.35甘油三酯(mmol/L)年齡(歲)1.47±0.59 1.62±0.43

1.4 標本制備 所有患者于服藥前及服藥6個月后于清晨空腹抽取肘靜脈血5 m l(EDTA抗凝)，其中2 ml用于流式細胞檢測，3 ml用于細胞因子(ELISA法)測定。

1.5 流式細胞儀檢測 應用BECKMAN COULTER公司的EPICSXL-4流式細胞儀，通過前向角散射光(FSC)和側向角散射光(SSC)設門選定分析的目的群體淋巴細胞，每個測定管分析10 000個淋巴細胞，數據處理應用SystemⅡ3.0分析軟件。以散點圖顯示細胞表達，以百分比表示細胞數量。

1.6 血漿細胞因子的測定 嚴格按照ELISA試劑盒說明操作進行，具體步驟如下:取待測血漿100μl加入已被IFN-γ單克隆抗體包被的96孔板，置37℃溫箱孵育120 min，用洗滌液洗板6次，再加入生物素化的抗人IFN-γ的抗體50μl，將反應板充分混勻后置37℃溫箱孵育60 min后用洗滌液洗板6次。每孔中再加入辣根過氧化物酶標記的Strepavidin 100μl置37℃溫箱孵育60 min后洗板6次，加OPD底物工作液100μl，置37℃暗室反應10 min，最后每孔加 50μl終止液混勻。在492 nm處測OD值，并根據標準曲線求出IFN-γ的濃度。

1.7 兩組患者出院后6個月內主要心血管事件的情況 記錄治療后兩組UAP患者在6個月內主要心臟不良事件(MACE)的發生情況，主要包括不穩定型心絞痛再次入院、急性心肌梗死、血運重建及死亡等。

1.8 統計學處理 采用SPSS11.5軟件，計量資料以±s表示，計數資料以百分率表示，分別行t檢驗和χ2檢驗。

2 結果

2.1 兩組患者治療前后外周血中CD4+CD28－T淋巴細胞的比較 兩組患者治療前外周血中CD4+CD28－T淋巴細胞的比例無顯著性差異(10.1%vs 9.01%，P＞0.05)。兩組患者治療后外周血中CD4+CD28－T淋巴細胞的比例較治療前降低(P＜0.05)，但纈沙坦組改變較常規治療組更為明顯(4.84%vs 1.51%，P＜0.05)。

2.2 兩組患者治療前后血漿中IFN-γ水平的比較 常規治療組和纈沙坦組患者治療前血漿中IFN-γ水平無顯著性差異〔(148±11)vs(112±7)pg/ml，P ＞0.05〕。兩組患者治療后血漿中IFN-γ水平較治療前降低〔(146±9)vs(93±6)pg/m l，P＜0.05〕，但纈沙坦組改變較常規治療組更為明顯(P＜0.05)。

2.3 兩組患者治療6個月后MACE事件發生率的比較 6個月后常規治療組發生MACE事件10例(23.8%)，但纈沙坦組僅有4例(9.3%)差異有顯著性(P＜0.05)。

2.4 兩組患者血壓的比較 兩組UAP患者血壓在治療前無明顯差異(P＞0.05)，在治療后均有所下降(P＜0.05)，但兩者相比差異無顯著性(P＞0.05)。見表2。

表2 兩組患者血壓的變化(±s，mmHg)

表2 兩組患者血壓的變化(±s，mmHg)

與治療前比較:1)P＜0.05

組別 n SBP治療前 治療后常規治療組 42 125±13 117±921) 82±7 76±521)治療后DBP治療前纈沙坦組 43 127±111 119±1 0231) 83±61 75±8231)

3 討論

許多證據表明不穩定斑塊炎癥的發生發展和T淋巴細胞活化及促炎癥細胞因子的作用有關〔5，6〕。Liuzzo等〔7〕在 UAP患者外周血中發現了CD4+CD28－表型的單克隆T淋巴細胞的異常增殖，并且與患者的發病、再發及預后有密切的關系〔3，7〕，提示CD4+CD28－T淋巴細胞亞群的增多可能是獨立于傳統心血管危險因子以外的危險因素。

CD4+CD28－T淋巴細胞能產生高水平的IFN-γ從而活化單核巨噬細胞，加速單核巨噬細胞對動脈粥樣斑塊的浸潤;活化的單核巨噬細胞也大量分泌TNF-α等促炎癥細胞因子以及基質金屬蛋白酶等，從而損傷血管內皮細胞降低斑塊的穩定性〔8〕;另一方面，UAP患者的CD4+CD28－T淋巴細胞有溶細胞毒作用，能夠在體內殺傷內皮細胞〔6〕;CD4+CD28－T淋巴細胞也可通過表達腫瘤壞死因子相關凋亡誘導配體(TRAIL)與病變中表達CCR5(又稱CD195，為一種趨化因子受體)的血管平滑肌細胞結合誘導血管平滑肌的凋亡〔9〕，從而導致動脈粥樣硬化斑塊的不穩定性。最近的研究證實應用細胞因子抗體(抗TNF-α)在體外能夠降低CD4+CD28－T淋巴細胞的比例，但是能否給不穩定型心絞痛患者帶來臨床益處尚無定論〔10〕。

本實驗表明UAP的常規治療包括他汀類等藥物可抑制UAP患者體內的炎癥和免疫反應。纈沙坦具有降壓以外的抗炎和免疫抑制作用，能夠降低CD4+CD28－T淋巴細胞的比例，減少IFN-γ的產生。纈沙坦通過抗炎和免疫調節作用，有穩定UAP患者粥樣斑塊，改善其臨床癥狀和預后的作用。CD4+CD28－T淋巴細胞活化、增殖以及向動脈粥樣硬化斑塊的遷徙導致動脈粥樣硬化斑塊的不穩定是一個復雜的免疫反應過程，多種細胞因子及效應分子參與其中。我們僅通過臨床觀察到血管緊張素Ⅱ受體拮抗劑確實可以降低UAP患者外周血中CD4+CD28－T淋巴細胞的比例，其具體機制有待深入研究。

1 Hansson GK.Inflammation，atherosclerosis and coronary artery disease〔J〕.N Engl JMed，2005;352(16):1685-95.

2 Ikonomidis I，Stamatelopoulos K，Lekakis J，et al.Inflammatory and noninvasive vascularmarkers:themultimarker approach for risk stratification in coronary artery disease〔J〕.Atherosclerosis，2008;199(1):3-11.

3 Liuzzo G，Goronzy JJ，Yang H，et al.Monoclonal T cell proliferation and plaque instability in acute coronary syndromes〔J〕.Circulation，2000;101(25):2883-8.

4 Sagawa K，Nagatani K，Komagata Y，et al.Angiotensin receptor blockers suppress antigen-specific T cell responses and ameliorate collagen-induced arthritis in mice〔J〕.Arthritis Rheum，2005;52(6):1920-8.

5 Weyand CM，Goronzy JJ，Liuzzo G，et al.T-cell immunity in acute coronary syndromes〔J〕.Mayo Clin Proc，2001;76:1011-20.

6 Nakajima T，Schulte S，Warrington KJ，et al.T-cell-mediated lysis of endothelial cells in acute coronary syndromes〔J〕.Circulation，2002;105:570-8.

7 Liuzzo G，Biasucci LM，Trotta G，et al.Unusual CD4+CD28 null T lymphocytes and recurrence of acute coronary events〔J〕.Am Coll Cardiol，2007;50:1450-8.

8 Zal B，Kaski JC，Akiyu JP，et al.Differential pathways govern CD4+CD28－T cell proinflammatory and effector responses in patients with coronary artery disease〔J〕.Immunology，2008;181(8):5233-41.

9 Sato K，Niessner A，Kopecky SL，et al.TRAIL-expressing T cells induce apoptosis of vascular smooth muscle cells in the atherosclerotic plaque〔J〕.JExp Med，2006;203:239-50.

10 Rizzello V，Liuzzo G，Brugaletta S，etal.Modulation of CD4+CD28 null T lymphocytes by tumor necrosis factor-alpha blockade in patients with unstable angina〔J〕.Circulation，2006;113:2272-7.

Effects of valsartan on CD4+CD28－T lymphocyte and IFN-γ in patients w ith unstable angina pectoris

YANG Bin，TAN Li-Juan，ZHENG Chun-Yan，et al.
Department of Cardiology，the Affiliated Hospital of M edical College Qingdao University，Qingdao 266003，Shandong，China

Ob jective To investigate the effects of valsartan on CD4+CD28－T lymphocytes and its cytokine in patients with unstable angina pectoris(UAP).Methods85 UAP patientswere recruited and divided into two groups randomly:conventional group(n=42)and valsartan group(n=43).The quantity of CD4+CD28－T lymphocytes of two groupswas detected by flow cytometry and the level of IFN-γwasmeasured by ELISA atbaseline and 6 months later.Major adverse cardiovascular events(MACE)in two groupswere observed after6 months.ResultsThe frequency of CD4+CD28－T lymphocytes and the levels of IFN-γ in two groups were all lower than those of baseline level(P﹤0.05)and more reduced in valsartan group compared with those of conventional group(P﹤0.05).MACE in valsartan group was significantly improved in 6months(P﹤0.05).ConclusionsValsartan could reduce frequency of CD4+CD28－T lymphocytes and the levels of IFN-γin patients with UAP.Thismay contribute to the stability of atherosclerotic plaque and improvement ofmyocardial ischemia.

Unstable angina;T lymphocyte;Valsartan;Interferon-γ

R541.4

A

1005-9202(2013)05-0993-03;

10.3969/j.issn.1005-9202.2013.05.001

國家自然基金資助(81070188);山東省優秀中青年科學家科研獎勵基金(BS2009YY027)

1 山東省立醫院心內科

苑海濤(1971-)，男，主任醫師，碩士生導師，主要從事心血管免疫學研究。

楊 斌(1979-)，男，主治醫師，碩士，主要從事心血管免疫學研究。

〔2011-10-21收稿 2012-05-20修回〕

(編輯 曹夢園)