硬毛地筍化學(xué)成分研究

彭 濤，王 微，張前軍，康文藝*

1河南大學(xué)中藥研究所，開(kāi)封475004;2貴州大學(xué)化學(xué)化工學(xué)院，貴陽(yáng)550025

硬毛地筍(Lycopus lucidus var.Hirtus)為唇形科地筍屬多年生草本植物，又名硬毛地瓜兒苗，廣泛分布于我國(guó)大部分地區(qū)。地筍屬全世界約有14 種，廣布于東半球溫帶及北美，我國(guó)產(chǎn)4 種4 變種(地筍、硬毛地筍、異葉地筍、小葉地筍、西南小葉地筍、歐地筍、深裂歐地筍和小花地筍)。其味甘、辛、性平，全草入藥，是用于活血化瘀的傳統(tǒng)草藥，根莖可食。它也可用于婦女閉經(jīng)，痛經(jīng)，產(chǎn)后瘀滯腹痛，身面浮腫等的治療［1，2］。

作者持續(xù)對(duì)硬毛地筍進(jìn)行系統(tǒng)性的研究［3，4］，從硬毛地筍甲醇提取物中分離鑒定了9 個(gè)化合物。其中，化合物4，7 和9 為首次從該科植物中分離得到，1～9 為首次從該植物中分離得到。

1 材料

旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀(日本東京理化);Bruker Am-400超導(dǎo)核磁共振儀;HPMS5973 質(zhì)譜儀(美國(guó)HP 公司);中壓制備柱色譜(上海利穗科技有限公司);X-4 數(shù)字顯示顯微熔點(diǎn)測(cè)定儀(溫度未校正，北京泰克儀器有限公司);GF254硅膠板(煙臺(tái)匯友硅膠開(kāi)發(fā)有限公司);200～300 目硅膠及硅膠H(青島海洋化工廠出品);Sephadex LH-20(瑞典Pharmacia 公司);ODS(日本Daiso 公司);RP-18(德國(guó)Merck 公司)。柱色譜用氯仿、乙酸乙酯、甲醇和丙酮等試劑均為分析純。

硬毛地筍于2010 年7 月采集于湖北大別山地區(qū)，經(jīng)河南大學(xué)藥學(xué)院中藥研究所生藥教研室李昌勤鑒定為唇形科地筍屬植物硬毛地筍Lycopus lucidus var.hirtus Regel，標(biāo)本存放于河南大學(xué)中藥研究所。

2 提取和分離

硬毛地筍全草陰干粉碎(18 kg)，室溫下甲醇下冷浸提取3 次，每次3 d。減壓回收甲醇，得甲醇提取物1370 g。將提取物混懸于水后，依次用石油醚、醋酸乙酯、正丁醇萃取，減壓回收溶劑，得石油醚部位、醋酸乙酯部位和正丁醇部位。石油醚部位(200 g)硅膠(200～300 目)常壓柱色譜，石油醚:醋酸乙酯(100∶0～0∶100)梯度洗脫，以TLC 檢測(cè)合并。各部分再經(jīng)過(guò)反復(fù)硅膠H，Sephadex LH-20 柱色譜和中壓制備柱色譜分離得到化合物1 (8 mg)，2(11 mg)，3(20 g)，4(15 mg)，5(9 mg)，6(30 mg)。醋酸乙酯部位(110 g)硅膠(200～300 目)常壓柱色譜。氯仿:丙酮(100∶1～7∶3)梯度洗脫，以TLC 檢測(cè)合并。各部分再經(jīng)過(guò)反復(fù)硅膠H，Sephadex LH-20 柱色譜和中壓制備柱色譜分離得到化合物7(7 mg)，8(14 mg)和9(45 mg)，

3 結(jié)構(gòu)鑒定

化合物1 紫紅色片晶(石油醚);mp:176～178 ℃;EI-MS m/z:536 ［M］+，444，430，397，378，333，281，268，209，195，173，159，145，132，119，105，91，69，56，43。與β-胡蘿卜素標(biāo)準(zhǔn)品在三種不同溶劑系統(tǒng)中Rf值及斑點(diǎn)顏色一致，相互混合熔點(diǎn)不下降，故鑒定為β-胡蘿卜素。

化合物2 淡黃色針晶(石油醚-醋酸乙酯);mp:324～326 ℃;EI-MS m/z:272 ［M］+，161，178，133.1H NMR (CDCl3，400 MHz)δ:8.01 (1H，d，J=8.6 Hz，H-5)，7.48 (1H，br s，H-2')，7.45 (1H，d，J=8.6 Hz，H-6')，6.96 (1H，br d，J=8.6 Hz，H-5')，6.58 (1H，br s，H-6)，6.39 (1H，br s，H-8);13C NMR (CDCl3，100 MHz)δ:180.4 (C = O)，165.7(C-2)，103.8(C-3)，127.8(C-5)，114.2(C-6)，165.3(C-7)，105.2(C-8)，157.8(C-9)，116.6(C-10)，124.1 (C-1')，116.5 (C-2')，147.2 (C-3')，151.0(C-4')，116.9(C-5')，120.2(C-6')。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)［5］報(bào)道基本一致，故鑒定為7，3'，4'-三羥基黃酮。

化合物3 白色片晶(石油醚-醋酸乙酯);mp:137～138 ℃;EI-MS m/z:414［M］+，396，381，329，303，255，213，145，55。與文獻(xiàn)報(bào)道的β-谷甾醇EIMS 一致［6］，與β-谷甾醇標(biāo)準(zhǔn)品在三種不同溶劑系統(tǒng)中Rf值及斑點(diǎn)顏色一致，相互混合熔點(diǎn)不下降，故鑒定為β-谷甾醇。

化合物4 黃色粉末(氯仿-丙酮);mp:234～236 ℃;EI-MS m/z:330［M］+，301，287;1H NMR(CDCl3，400 MHz)δ:7.75(1H，d，J = 2.4 Hz，H-2')，7.66(1H，dd，J=2.4，9.0 Hz，H-6')，6.96(1H，d，J=9.0 Hz，H-5')，6.86(1H，d，J =2.2 Hz，H-8)，6.33 (1H，d，J = 1.5 Hz，H-6)，3.96(3H，s，7-OCH3)，3.87(3H，s，3-OCH3);13C NMR (CDCl3，100 MHz)δ:56.0(7-OCH3)，59.6(3-OCH3)，155.9(C-2)，137.8(C-3)，177.9(C-4)，156.2(C-5)，97.6(C-6)，165.0(C-7)，92.1(C-8)，160.9(C-9)，105.1(C-10)，120.6(C-1')，115.4(C-2')，145.3(C-3')，149.0(C-4')，115.6(C-5')，120.4(C-6')。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)［7］報(bào)道基本一致，故鑒定為3'，4'，5-三羥基-3，7-二甲氧基黃酮。

化合物5 白色針晶(石油醚-醋酸乙酯);mp:154～156 ℃;EI-MS m/z:426［M］+;1H NMR(CDCl3，400 MHz)δ:5.13(1 H，t，J = 3.5 Hz ，H-12)，4.78(1H，br s，H-30b)，3.23 (1H，dd ，J =5.0，10.5 Hz ，H-3)，0.91(3H，d，J = 6.0 Hz)，0.86(3H，d，J =6.0Hz)，1.33，1.28，1.20，1.11，1.06，1.03(each 3H，s，6 × CH3);13C NMR (CDCl3，100 MHz)δ:38.7(C-1)，27.2(C-2)，79.0(C-3)，38.7(C-4)，55.1(C-5)，18.3(C-6)，32.9(C-7)，39.9(C-8)，47.7(C-9)，36.9(C-10)，23.3(C-11)，124.4(C-12)，139.5(C-13)，42.1(C-14)，28.7(C-15)，26.6(C-16)，33.7(C-17)，59.0(C-18)，39.6(C-19)，39.6(C-20)，31.2(C-21)，41.5(C-22)，28.1(C-23)， 15.7(C-24)，15.6(C-25)，16.9(C-26)，23.2(C-27)，29.7(C-28)，17.5(C-29)，21.3(C-30)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)［8］報(bào)道基本一致，故鑒定為α-香樹脂醇。

化合物6 白色針晶(石油醚-醋酸乙酯);mp:197～199 ℃;EI-MS m/z:426［M］+，411，218，203，189;1H NMR (CDCl3，400 MHz)δ:5.18(1H，t，J =4.8Hz，H-12)，3.22(1H，t ，J = 6.9 Hz，H-3)，1.13(3H，s，H-27)，1.07(3H，s，H-23)，1.00(3H，s，H-25)，0.97(3H，s，H-24)，0.94(3H，s，H-29)，0.87(3H，s，H-30)，0.83(3H，s，H-28)，0.79 (3H，s，H-26);13C NMR (CDCl3，100 MHz)δ:38.2(C-1)，28.3(C-2)，78.6(C-3)，38.6(C-4)，51.1(C-5)，19.2(C-6)，31.3(C-7)，39.8(C-8)，46.7(C-9)，38.5(C-10)，24.8(C-11)，123.6(C-12)，141.7(C-13)，43.6(C-14)，28.3(C-15)，28.0(C-16)，32.3(C-17)，37.0(C-18)，36.5(C-19)，32.2(C-20)，35.7(C-21)，36.2(C-22)，27.1(C-23)，16.5(C-24)，16.5(C-25)，17.7(C-26)，28.9(C-27)，28.7(C-28)，33.4(C-29)，24.6(C-30)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)［9］報(bào)道基本一致，故鑒定為β-香樹脂醇。

化合物7 白色粉末(氯仿-甲醇);mp:276～278 ℃;EI-MS m/z:442 ［M］+，436，426，408，393，300，248，223，203，189，175，133;1H NMR (Pyridined5，400 MHz)δ:5.12(1H，m，H-12)，3.83(1H，d，J=10.91 Hz，H-24)，3.17(1H，br d，J =9.76 Hz，H-24)，2.11(1H，d，J =11.20 Hz，H-18)，1.46(H，br s，Ha-3)，1.24(H，br s，Hb-3)，1.06(3H，s，H-27)，10.4(3H，s，H-23)，1.03(3H，s，H-26)，0.86(3H，d，J = 5.37 Hz，H-30)，0.81(3H，d，J = 6.30 Hz，H-29)，0.72(3H，s，H-25);13C NMR (Pyridine-d5，100 MHz)δ:39.1(C-1)，27.9(C-2)，39.5(C-3)，43.1(C-4)，48.7(C-5)，18.7(C-6)，33.4(C-7)，40.1(C-8)，48.2(C-9)，37.3(C-10)，23.8(C-11)，125.8(C-12)，139.5(C-13)，42.6(C-14)，28.9(C-15)，25.1(C-16)，48.4(C-17)，53.9(C-18)，39.4(C-19)，39.6(C-20)，31.8(C-21)，37.5(C-22)，14.3(C-23)，68.7(C-24)，16.7(C-25)，17.3(C-26)24.9(C-27)，181.3(C-28)，17.1(C-29)，21.5(C-30)。綜合各數(shù)據(jù)及與文獻(xiàn)［10］對(duì)比鑒定化合物為24-羥基-烏蘇-12-烯-28-酸。

化合物8 白色無(wú)定形粉末(氯仿-甲醇);mp:297～299 ℃;與β-胡蘿卜苷標(biāo)準(zhǔn)品在三種不同溶劑系統(tǒng)中Rf值及斑點(diǎn)顏色一致，相互混合熔點(diǎn)不下降，故鑒定為β-胡蘿卜苷。

化合物9 白色粉末(氯仿-甲醇);mp:317～319 ℃;EI-MS m/z:576 ［M］+，526，481，414，396，382，329，303，288，275，255，231，199，159，145，105，83，57，43;1H NMR (Pyridine-d5，400 MHz)δ:6.47(1H，br s，-OH)，5.35(1H，s，H-7)，5.22(1H，dd，J=11.6 Hz，H-22)，5.09(1H，dd，J =10.8，11.6 Hz，H-23)，4.60(1H，dd，J = 2.0，2.4 Hz，Glc-H-1)，4.43(1H，dd，J=7.2，6.8 Hz，Glc-H-5)，4.34～4.26(2H，m，Glc-H-6)，4.07(1H，t，J =12.0 Hz，Glc-H-4)，3.96-3.92(2H，m，Glc-H-2，3)，2.76(1H，dd，J =3.6，4.0 Hz，H-3)，2.48(1H，t，J =15.6 Hz，H-21 or 24)，2.13(1H，b d，J =13.2 Hz，H-14)，2.00-1.07(18H，m，H-1～26)，1.01(3H，s，H-20)，0.95(3H，s，H-27)，0.91(3H，s，H-28)，0.88(3H，s，H-19)，0.67(3H，s，H-18);13C NMR (Pyridine-d5，100 MHz)δ:40.3(C-1)，39.7(C-2)，72.0(C-3)，37.3(C-4)，50.7(C-5)，63.2(C-6)，122.3(C-7)，141.2(C-8)，46.4(C-9)，42.8(C-10)，30.6(C-11)，41.1(C-12)，36.7(C-13)，51.8(C-14)，34.6(C-15)，32.6(C-16)，56.4(C-17)，26.7(C-18)，24.9(C-19)，20.3(C-20)，33.0(C-21)，129.8(C-22)，139.2(C-23)，37.8(C-24)，28.9(C-25)，23.7(C-26)，21.7(C-27)，19.4(C-28)，102.9(C-1')，78.9(C-5')，78.8(C-3')，78.4(C-2')，75.7(C-4')，57.2(C-6')。綜合各數(shù)據(jù)及與文獻(xiàn)［11，12］對(duì)比鑒定化合物為24-甲基-5α-膽甾-7，22-二烯-6α-醇-3β-O-葡萄糖苷。

1 Editorial Committee of Flora of China.Flora of China(中國(guó)植物志).Beijing:Science Press，1995，66:274-278.

2 Editorial Committee of Chinese Herb(中華本草).第七冊(cè)十九.Shanghai:Science Press，1999，19:6091-6095.

3 Peng T(彭濤)，Yin ZH(尹震花)，Kang WY(康文藝)，et al.Analysis of fat-soluble components in Lycopus lucidus by GC-MS.Chin J Experimental Tradit Med Formulae(中國(guó)實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志)，2011，17:100-102.

4 Peng T(彭濤)，Wang JM(王金梅)，Zhang QJ(張前軍)，et al. Volatile oils constituents of Lycopus lucidus var. hirtus.Nat Prod Res Dev(天然產(chǎn)物研究與開(kāi)發(fā))，2012，24:342-344.

5 Frederique Van Acker AA，Hageman Jos A，Haenen Guidor MM et al. Synthesis of novel 3，7-substituted-2-(3'，4'-dihydroxyphenyl)flavones with improved antioxidant activity.J Med Chem，2000，43:3752-3760.

6 Cong PZ(叢浦珠)，Li SY(李筍玉).Natural Organic Mass Spectral.Beijing:Chinses Medical Science Publishing Press，2003.1136.

7 Li Q(李欽)，Shen YM(沈月毛)，Li P(李萍). Study on flavanoids in the leaves of Premnaszem aoensis Pei. Chin Pharm J(中國(guó)藥學(xué)雜志)，2008，43:417-419.

8 Li WW(李薇薇)，Shi MH(史海明)，Wang MY(王夢(mèng)月)，et al.Chemical constituents of Viburnum erosum var.erosum and Viburnum odoratissimum var.awabuki.Chin Pharm J(中國(guó)藥學(xué)雜志)，2011，46:1234-1237.

9 Li CK(李傳寬)，Zhang QJ(張前軍)，Huang ZB(黃鐘碧)，et al. Chemical constituents of Desmodium sambuense.China J Chin Mater Med(中國(guó)中藥雜志)，2010，35:2420-2423.

10 Hou WL，Li YF，Zhang Q，et al. Triterpene acids isolated from Lagerstroemia speciosa leaves as α-Glucosidase inhibitors.Phytotherapy Reseach，2009，23:614-618.

11 Madaio A，Piccialli V，Sica D，et al. New polyhydroxysterols from the dictyoceratid sponges Hippospongia Communis，Spongia Officinalis，Ircinia Variabilis，and Spongionella Gracilis.J Nat Prod，1989，52:952-961.

12 Yoshihisa Takaishi，Minoru Uda，Takashi Ohashi，et al. Glycosides of ergosterol derivatives from Hericum Erinacens.Phytochemistry，1991，30:4117-4120.