CyclinD1、p27及PTEN蛋白在口腔鱗狀細胞癌中的表達

楊麗麗 徐佳瑛 吳 偉 祝桂祥 陳啟林

鱗狀細胞癌是臨床上較為常見的惡性腫瘤之一，其中口腔黏膜部位發生的鱗狀細胞癌較為多見，與其他部位發生的鱗狀細胞癌相比，OSCC更易發生轉移，明顯降低了患者的生活質量。據相關研究顯示，與OSCC發生密切相關的基因是PTEN，PTEN是1種抑癌基因，主要位于10號染色體上，具有磷酸激酶活性［1］。PTEN基因的缺失及表達異常會促進腫瘤的發生，此外，細胞周期中CyclinD1、p27蛋白對細胞的生長也具有一定的調控作用。目前，臨床上對OSCC患者CyclinD1、p27及 PTEN蛋白表達情況的研究較少［2］。本研究分析OSCC及正常口腔黏膜患者 CyclinD1、p27及PTEN蛋白的表達情況，旨在探究三者表達的相關性及與組織分化程度的關系，現將結果報告如下。

1 材料與方法

1.1 一般資料

選取2011年10月-2012年10月我院收治的口腔鱗狀細胞癌患者50例作為觀察組;另選取正常口腔黏膜患者50例作為對照組。對照組男性27例，女性23例，年齡17～66歲，平均為(40.5±1.9)歲。觀察組男性26例，女性24例，年齡18～65歲，平均為(43.6±1.2)歲。其中口腔鱗癌患者高分化22例、中分化18例、低分化10例。兩組患者在年齡、性別等方面比較無顯著性差異(P＞0.05)，具有可比性。

1.2 方法

采取免疫組織化學SP法，檢測正常口腔黏膜及口腔鱗癌組織中CyclinD1、p27及PTEN蛋白的表達情況。主要試劑有鼠抗人PTEN，由北京中杉金橋生物技術有限公司生產的工作型;鼠抗人PIP3，是由武漢博士德生物技術有限公司生產的濃縮型;鼠抗人CyclinD1是由福州邁新生物技術開發公司生產的濃縮型;3種試劑的工作濃度均為1∶100。將標本進行常規石蠟包埋，4 μm切片，經脫蠟、水化、微波修復、SP法免疫組織染色、DAB顯色等處理。SP法檢測試劑盒為鏈霉素抗生物素蛋白一過氧化物酶(SP)試劑盒，顯色液為DAB顯色液。

1.3 觀察指標

觀察并比較兩組患者CyclinD1、p27及PTEN蛋白的表達情況，并觀察口腔鱗狀細胞癌中CyclinD1、p27及PTEN蛋白表達與組織分化程度的關系。胞質內若出現明顯的黃色或棕褐色顆粒即為CyclinD1、p27及PTEN蛋白表達陽性細胞。隨機選擇10個高倍視野，計數1 000個細胞，計算陽性細胞百分率。＜10%為“-”，10% ～50% 為“+”，51% ～75%為“++”，＞75%為“+++”。“-”為陰性表達;“+”、“++”、“+++”均為陽性表達［3-5］。

1.4 統計學方法

應用SPSS 15.0軟件進行統計學分析，計數資料采用χ2檢驗，P＜0.05為有統計學意義。

2 結果

2.1 正常口腔黏膜及口腔鱗癌組織中CyclinD1蛋白表達情況

正常口腔黏膜組織中CyclinD1蛋白主要呈陰性表達，陰性表達率明顯高于觀察組;而口腔鱗狀細胞癌組織中CyclinD1蛋白以弱陽性表達為主，陽性表達率明顯高于正常口腔黏膜組織，P＜0.05，具有統計學意義，見表1。

表1 兩組CyclinD1蛋白表達情況(例，%)

2.2 兩組p27蛋白表達情況

與對照組相比，觀察組p27蛋白陽性表達率明顯較高，P ＜0.05，具有統計學意義，見表 2。

表2 兩組p27蛋白表達情況(例，%)

2.3 兩組PTEN蛋白表達情況

對照組PTEN蛋白以弱陽性表達為主，陽性表達率明顯高于觀察組，P＜0.05，有統計學意義，見表3。

2.4 口腔鱗狀細胞癌組織中CyclinD1、p27及PTEN蛋白表達與其組織分化程度的關系

低分化者p27、PTEN蛋白表達陽性率較高分化者低，而低分化者CyclinD1蛋白表達陽性率較高分化者高，P ＜0.05，具有統計學意義，見表4。

表3 兩組PTEN蛋白表達情況(例，%)

表4 CyclinD1、p27及PTEN蛋白與口腔鱗狀細胞癌組織分化程度的關系(例，%)

3 討論

口腔鱗狀細胞癌是口腔科發病率較高的惡性腫瘤，在口腔癌癥中的發病率較高，居80%以上，該類患者臨床上的生存率較低，且預后情況也較差。近年來，隨著外科診斷技術的不斷進步及分子生物學的不斷發展，口腔鱗狀細胞癌的早期診斷率不斷提高，從分子學上水平上對OSCC發生機制的闡述也不斷完善［6］。目前，臨床上對口腔鱗癌的研究重點主要在于分子生物學研究，旨在探尋有效的分子生物學指標，從而對口腔鱗癌進行診斷篩選。

多數國內外關于OSCC的研究顯示，抑癌基因(PTEN)在OSCC的發展過程中具有較為重要的作用，可通過誘導細胞的凋亡，從而抑制癌細胞的生長繁殖，同時還能抑制端粒酶的活性，從而抑制原癌基因的表達［7-8］。惡性腫瘤的發生發展與PTEN存在較為緊密的關系，其中關于子宮內膜癌、神經膠質癌、前列腺癌、乳腺癌等惡性腫瘤方面的研究報道較多，而關于口腔鱗癌PTEN的報道較少，經不斷的研究發現，PTEN的改變多發生在蛋白水平上，而基因水平上的改變不明顯。PTEN基因參與機體的正常發育，該基因功能的缺失對于癌癥的發展具有明顯的促進作用［9］。PTEN是目前唯一一個發現的具有磷酸酶活性的抑癌基因，主要位于人體10q23.3，編碼的蛋白質主要分布于細胞質內，在OSCC的發展過程中的陽性表達率呈不斷變化的趨勢。OSCC的癌變過程依次為正常口腔黏膜、上皮單純增生、上皮異常增生、口腔鱗狀細胞癌，有研究顯示，隨著病變的不斷進展，PTEN的陽性表達率不斷的降低，表明癌細胞正在不斷的生長，病情演變也越來越重，表明OSCC患者腫瘤的惡性轉變過程與PTEN基因的異常遺傳學改變有關［10］。

本研究對OSCC與正常口腔黏膜患者PTEN蛋白表達情況的檢測可知，OSCC患者PTEN蛋白表達的陽性率較正常口腔黏膜組患者低;高分化組患者PTEN蛋白的陽性率較低分化高，表明PTEN與OSCC的分化程度呈顯著相關性。細胞正常生長過程中細胞周期的平衡調控是由各種調控因子決定的，包括細胞周期素依賴性激酶(p27)和細胞周期D1(CyclinD1)等調控因子，其中p27對細胞的生長呈負性調控，而CyclinD1對細胞的生長則呈正性調控，OSCC患者細胞的生長與p27、CyclinD1的表達有關，p27對細胞增殖起抑制作用，CyclinD1起促進作用［11-12］。CyclinD1與細胞周期的G1期相關，可促進G1期細胞轉向S期。在正常的細胞周期中CyclinD1為低表達，陽性表達率低，在細胞周期的調控中起著至關重要的作用。p27是1種新近發現的屬于細胞周期素依賴激酶抑制物之一，可抑制細胞周期G1期的CyclinD CDK4/6復合物和CyclinE-CDK2復合物活性，在細胞周期與分化調控中起著重要的作用，當p27過度表達時可導致細胞周期持續的維持在G1期，阻礙細胞從G1期轉向S期。有研究顯示，在正常口腔黏膜組織中p27呈強陽性表達，而在口腔鱗癌患者中呈弱陽性表達［13-14］。本組結果顯示，口腔鱗癌組患者p27陽性表達率較正常口腔黏膜組織高，且口腔鱗癌患者呈強陽性表達;口腔鱗癌患者中CyclinD1呈弱陽性表達，且表達的陽性率高于正常口腔黏膜患者。p27、CyclinD1的表達與口腔鱗癌分化程度相關，患者鱗癌分化程度越差，p27表達水平越低，而CyclinD1表達水平越高。p27、CyclinD1等調控因子在調節細胞的增殖過程中具有重要作用，調控因子的紊亂可導致細胞的增殖出現異常，最終誘發腫瘤的發生。綜上所述，口腔鱗癌的發生和發展與PTEN基因的表達具有存在較為重要的關系，3種蛋白的表達情況與組織分化程度相關，三者的聯合檢測對OSCC的早期診斷具有較為重要的臨床價值。

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