昆明地區兒童下呼吸道感染流感嗜血桿菌分離株的耐藥性和血清分型研究

胡瑩，夏曉玲，黃海林，單斌，李豐良，黃云昆，劉曉莉

(1、昆明醫科大學第二附屬醫院檢驗科，云南昆明650101;2、昆明市兒童醫院檢驗科3、昆明醫科大學第一附屬醫院檢驗科；4、云南省第一人民醫院檢驗科；5、昆明市延安醫院檢驗科)

昆明地區兒童下呼吸道感染流感嗜血桿菌分離株的耐藥性和血清分型研究

胡瑩1，夏曉玲1，黃海林2，單斌3，李豐良4，黃云昆5，劉曉莉1

(1、昆明醫科大學第二附屬醫院檢驗科，云南昆明650101;2、昆明市兒童醫院檢驗科3、昆明醫科大學第一附屬醫院檢驗科；4、云南省第一人民醫院檢驗科；5、昆明市延安醫院檢驗科)

目的了解昆明地區急性下呼吸道感染患兒中分離的流感嗜血桿菌體外耐藥模式和血清分型情況。方法收集2009年1月1日至2010年1月1日4家三甲醫院的兒科和兒童醫院急性呼吸道感染患兒鼻咽分泌物或深部吸痰標本分離的流感嗜血桿菌，用頭孢硝噻酚法檢測β-內酰胺酶，紙片擴散法檢測其對抗菌藥物的敏感性，并用玻片凝集法對流感嗜血桿菌進行血清分型。結果流感嗜血桿菌對氨芐西林的敏感率為52%，耐藥率為42.7%；32株β-內酰胺酶陽性，產酶率為17.6%；菌株對頭孢哌酮-舒巴坦、亞胺培南、阿莫西林-克拉維酸、頭孢噻肟、頭孢曲松和頭孢呋辛、阿奇霉素的敏感率為93.4%～100.0%，對復方磺胺磺胺甲噁唑的耐藥率最高，達78%；產β-內酰胺酶流感嗜血桿菌多重耐藥率達65.6%；血清分型以不定型株為主，Hib僅占1.57%。結論昆明地區急性呼吸道感染兒童流感嗜血桿菌的耐藥性和產酶率呈上升趨勢，臨床應根據藥敏結果合理使用抗菌藥物。血清分型以不定型株為主，流感嗜血桿菌b分離率不高。

流感嗜血桿菌；耐藥性；β-內酰胺酶；血清型；兒童

流感嗜血桿菌是社區獲得性肺炎的常見致病菌之一。近年來，產β-內酰胺酶的流感嗜血桿菌不斷上升，抗生素耐藥性問題越來越受到世界各地的關注[1]。為了解昆明地區兒童呼吸道感染流感嗜血桿菌的耐藥模式，并為臨床經驗治療提供科學的參考依據，本文對2009年1月至2010年1月的昆明市4家三甲醫院的兒科和兒童醫院門診及住院急性呼吸道感染患兒呼吸道分離到的流感嗜血桿菌進行了β-內酰胺酶測定、血清分型和耐藥性分析。現將其分析結果報告如下。

1 資料與方法

1.1 臨床資料2009年1月至2010年1月門診及住院符合診斷標準[2]的急性呼吸道感染患兒共2948例，取鼻咽分泌物及痰標本標本，分離出182株流感嗜血桿菌。

1.2 方法

1.2.1 細菌培養及鑒定患兒于入院當天或次日取其鼻咽深部分泌物或用吸痰器吸取深部痰標本

送檢。進行HE染色細胞鏡檢篩選合格標本(鱗狀上皮細胞≤10個/低倍視野、中性白細胞≥25個/低倍視野。對合格標本分別接種于血瓊脂平板、巧克力色瓊脂平板、麥康凱瓊脂平板，置5%CO2培養箱中35℃培養18～24 h，然后進行菌落觀察、涂片鏡檢，用細菌鑒定儀(法國梅里埃制造VITEK32)行細菌鑒定。

1.2.2 藥敏試驗用紙片擴散法行藥敏試驗,紙片由英國OXOID公司提供,包括氨芐西林、阿莫西林/克拉維酸、頭孢哌酮/舒巴坦、頭孢噻肟、頭孢曲松、頭孢呋辛、頭孢吡肟、亞胺培南、阿奇霉素、環丙沙星、左氧氟沙星、復方磺胺磺胺甲噁唑。判斷標準按照CLSI 2009年版規定，以敏感(S)、中敏(I)、耐藥(R)報告結果。質控菌株為流感嗜血桿菌標準菌株ATCC49247和ATCC49766。

1.2.3 β-內酰胺酶測定頭孢硝基噻酚顯色反應方法，試劑采用OXOID公司產品。

1.2.4 血清分型采用玻片凝集法分離到流感嗜血桿菌進行血清分型，流感嗜血桿菌分型血清采用日本DENKA SEIKEN株式會社產品。

1.2.5 統計學方法用Whonet5.3軟件進行分析。

2 結果

2.1 流感嗜血桿菌耐藥情況流感嗜血桿菌對12種抗生素耐藥性監測結果顯示，流感嗜血桿菌對氨芐西林的耐藥率已達到42.7%，各種抗菌藥物耐藥率與以往相比呈上升趨勢[3]，耐藥情況見表1。

表1 182株流感嗜血桿菌對12種抗菌藥物的藥敏結果(%)

2.2 流感嗜血桿菌產酶情況182株流感嗜血桿菌中32株產生β內酰胺酶，總產酶率17.6%。有2株氨芐西林耐藥的流感嗜血桿菌為β內酰胺酶酶陰性。β內酰胺酶陽性菌株中多重耐藥株共21株，其耐藥情況情況見表2。

表2 32株β內酰胺酶陽性菌株流感嗜血桿菌對12種抗生素耐藥情況(%)

2.3 血清分型情況分離的182株流感嗜血桿菌中，Hib為2株，占1.09%(2/182)，Hic為2株，Hie為3株，Hif為3株，其余為不定型株(NTHi)，占94.51%(172/182)。

3 討論

流感嗜血桿菌是本地區兒科常見呼吸道病原體之一，且耐藥特點具有較強的地區特色，耐藥性問題隨著臨床用藥習慣的改變以及病原菌本身的變異和相互影響，因此對于流感嗜血桿菌的耐藥性研究，有利于臨床抗生素的合理選擇；良好的分型為本地區制定預防兒童呼吸道疾患的針對性措施提供參考。

本次檢測顯示，昆明地區流感嗜血桿菌對頭孢哌酮-舒巴坦、亞胺培南、阿莫西林-克拉維酸、頭孢噻肟、頭孢曲松和頭孢呋辛、阿奇霉素具有高度的活性，敏感率為93.4%～100.0%。對復方磺胺磺胺甲噁唑的耐藥率最高,達78%，提示臨床經驗用藥時應避免選擇復方磺胺磺胺甲噁唑。氨芐西林耐藥率已達42.7%，低于南京地區報道的49.7%[4]，高于廣州地區性報道的30.0%[5]和本地區2001年間的34.5%[3]，明顯高于杭州地區[6]報道的22.4%。氨芐西林因價格低，不良反應小，常作為治療流感嗜血桿菌感染的首選藥物應用于臨床，用量大，應用時間長。因此，對該藥的耐藥率增長較快。應引起臨床醫生的重視。

流感嗜血桿菌對氨芐西林的主要耐藥機制是β內酰胺酶的產生。本研究中，流感嗜血桿菌總產酶率17.6%，與近幾年亞洲地區如新加坡(51%)[7]相

比較低，也低于汪復報道全國9家醫院產酶率兒童33%，成人25%及華中科技大學同濟醫學院附屬同濟醫院孫自鏞報道的42.4%[8]。β內酰胺酶陽性菌多重耐藥的情況較嚴重，多重耐藥株約65.6%，提示對于本地區在常規藥物治療失敗后的流感嗜血桿菌呼吸道感染病例，β-內酰胺酶穩定劑值得優先采用。值得一提的是發現2株流感嗜血桿菌固有耐藥菌株，即β-內酰胺酶陰性而對氨芐青霉素耐藥株(BLNAR株)，因為它對常用的β-內酰胺藥物可以產生聯合耐藥[9]，具有重要的臨床意義，其耐藥機制是結合蛋白改變還是外膜蛋白通透性下降需要進一步研究。

流感嗜血桿菌可分為有莢膜型和無莢膜型兩大類。根據莢膜多糖抗原可將有莢膜型分成a、b、c、d、e、f 6個血清型和無莢膜不定型(NTHi)，有莢膜型的b型毒力強、侵襲力也強，常引起肺炎、菌血癥和腦膜炎等嚴重感染，且主要侵犯學齡前兒童。了解流感嗜血桿菌型別的地區特點對于疾病防治至關重要，良好的分型是進行流感嗜血桿菌致病性和流行病學研究的基礎，本文分離到的182株流感嗜血桿菌以不定型株為主，可分型菌株數量稀少，沒有優勢型。Hib是小兒肺炎的重要病原菌，但本次只檢測到2株，可能與標本來源單一，沒有來自腦脊液和血液的標本或取標本前已使用抗生素有關。

[1]Volturo GA,Low D E,Aqhababian R.Managing acute lower respiratory tract infections in an era of antibacterial resistance[J].Am J Emerg Med,2006,24(3):329-342.

[2]胡亞美,江載芳,諸福棠.實用兒科學[M].第7版.北京:人民衛生出版社,2002:1167-1175.

[3]趙云,夏星,高輝.馬血巧克力平板分離流感嗜血桿菌及其耐藥性分析[J].上海檢驗醫學,2003,18(1):55-56.

[4]徐飛,王惠云,鐘天鷹,等.2005年至2006年南京地區兒童流感嗜血桿菌耐藥性分析[J].實用醫技雜志,2007,14(10):1234－1236.

[5]鄧秋連,鄧力,謝永強,等.廣州地區兒童急性呼吸道感染流感嗜血桿菌耐藥性和血清分型研究[J].中國實用兒科雜志,2009,24(5): 362-365．

[6]裘益輝,張艷,華春珍,等.杭州市上呼吸道感染患兒分離的流感嗜血桿菌分離株的血清分型及其對氨芐西林的耐藥性分析[J].中國當代兒科雜志,2009,11(3):217-220.

[7]Fernaays MM,Lesse AJ,Cai X,et al.Characterization of iga B,a secondimmunoglobulinA1proteasegeneinnontypeable Haemophilus influenzae[J].Infect Immun,2006,74(10):5860-5870.

[8]朱旭慧,孫自鏞,李麗,等.流感嗜血桿菌的分布及耐藥性分析[J].實驗與檢驗醫學,2010,28(2):114-116.

[9]Krasan GP,Sauer FG,Cutter D,et al.Evidence for donor strand complementioninthebiogenesisofHaemophilusinfluenzae haemagglutinating pili[J].Mol Microbiol,2000,35(6):1335-1347.

Study on serotype and drug resistance of haemophilus influenzae isolates from children with respiratory tract infection in Kunming

HU Ying,XIA Xiaoling,HUANG Hailin，et al.Department of Clinical Laboratory，Second Affiliated Hospital of Kunming Medical University,Kunming 650101,China

ObjectiveTo investigate serotype and antibiotics resistance patterns of Haemophilus influenzae(Hi)isolated from children with respiratory tract infection in Kunming.Methods 182 isolates from sputum and throat swabs of children with acute respiratory tract infection were collected.Nitrocefin test was used to detect β-lactamase.The sensitivities of antibiotics against 182 strains were determined in vitro by Kirby-Bauer diffusion method,and serotypes were measured by Haemophilus Influenzae Antiserum.Results The susceptibility to AMP was 52%while the resistance rate was 42.7%.The prevalence of β-lactamase was 17.6%in all Hi isolates.The sensitive rates to CFS,IMP,AMC,CXT,and CRO were from 93.4%to 100.0%.The resistance rate of SXT was 78%which was the highest one.Hib accounted only 1.57%among all Hi strains.ConclusionsThe resistance rate of Hi isolated from children in Kunming is in an upward trend,so antibiotics should be used rationally and be based on the drug sensitivity results in clinical therapy.NTHi is the major serotype of Hi in children with acute respiratory tract infection.The prevalence of Hib is low.

Haemophilus influenzae;Drug resistance;β-lactamase；Serotype；Children

R446.5,Q939.92,R378.4+1

A

1674-1129(2013)02-0118-03

10.3969/j.issn.1674-1129.2013.02.005

胡瑩,女,1977年生,主治醫師,碩士學位,畢業于昆明醫學院臨床微生物與分子生物學專業，主要從事細菌耐藥方面研究。

劉曉莉,女，1960年生，主任醫師，學士學位，畢業于昆明醫學院臨床醫學專業，主要從事細菌耐藥方面研究。