高效液相色譜法測定紅寶散中歐前胡素的含量

王 舒 王苗苗 呂述麗

（吉林省吉林市食品藥品檢驗所，吉林132001）

高效液相色譜法測定紅寶散中歐前胡素的含量

王 舒 王苗苗 呂述麗

（吉林省吉林市食品藥品檢驗所，吉林132001）

目的 采用高效液相色譜法測定紅寶散中歐前胡素的含量。方法 采用HPLC法，Apollo-C18（250mm×4.6mm，5μm）色譜柱，流動相為甲醇-水（55∶45），流速為1.0mL·min-1，紫外檢測波長為300nm，柱溫為室溫。結(jié)果 歐前胡素進樣量在0.0300～0.2000ug線性關(guān)系良好，r=0.9999，平均回收率99.68%，RSD=0.35%。結(jié)論 本方法準確、簡便、快速，可作為紅寶散中歐前胡素的含量測定。

高效液相色譜法；紅寶散；歐前胡素

紅寶散由白白芷、紅花、紫草等14味中藥制成的散劑。具有祛瘀止痛、止強筋壯骨之功效［1］。該制劑為成方制劑，無含量測定方法。為了有效控制藥品質(zhì)量，提高該制劑的質(zhì)量標準，本文采用高效液相法測定歐前胡素的含量，結(jié)果表明，該方法、準確、簡便、可行，可供該制劑質(zhì)量控制參考。

1 儀器與試藥

LC-2010A高效液相色譜儀，CLASS-VP色譜工作站；歐前胡素對照品（批號：110826-200511置五氧化二磷減壓干燥器中干燥12小時以上使用）歐前胡素，由中國藥品生物制品檢定所提供，供含量測定用；紅寶散為市售樣品（吉林市皇城股骨頭專科醫(yī)院，批號：120401，120402，120403）。甲醇為色譜純；水為超純水；其他試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1色譜條件Apollo C18柱（250mm×4.6mm，5μm）色譜柱；甲醇-水（55∶45），流速為1.0mL·min-1；檢測波長300nm；柱溫室溫。

2.2溶液制備

2.2.1對照品溶液的制備精密稱取歐前胡素對照品適量，加甲醇制成0.0500mg·ml-1的對照品貯備液；再精密量取對照品貯備液適量，加甲醇制成10.00μg·ml-1的對照品溶液，即得。

2.2.2供試品溶液的制備取本品適量，研細，取約6.0g，精密稱定；置50ml量瓶中，加甲醇45ml，超聲處理（功率300W，頻率50k Hz）1小時，取出，放冷，再加甲醇至刻度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得［2］。

2.2.3陰性樣品溶液的制備因?qū)嶒炇抑荒茏鲂×康臉悠罚园刺幏搅繉⑷恿繙p量，取除白芷以外的處方中其余藥材的十分之一量，按法制成散劑，再按供試品溶液制備方法，制成陰性樣品溶液。

2.3專屬性試驗分別精密吸取供試品溶液、陰性樣品溶液和對照品溶液各10μl注入液相色譜儀，記錄色譜圖（圖1）。由圖1可見，供試品色譜中，在與對照品色譜相應(yīng)的位置上，有相同保留時間（歐前胡素42.511min）的色譜峰，陰性試驗無干擾，證明本法可行。

圖1 紅寶散HPLC色譜圖

2.4線性關(guān)系考察精密吸取對照品溶液（10.00μg· ml-1）3、5、10、15、20μl，注入液相色譜儀，測得峰面積。以峰面積為縱坐標，其進樣量為橫坐標，得的回歸方程為：Y=1E+7X+553.23，r=0.9999（n=5），結(jié)果表明，歐前胡素進樣量在0.0300～0.2000ug范圍內(nèi)與峰面積呈良好線性關(guān)系。

2.5穩(wěn)定性試驗精密吸取歐前胡素對照品溶液（10.00ug·ml-1），按“2.1”項下色譜條件分別在0、4、8、12、24h測定，結(jié)果表明歐前胡素對照品溶液在24h內(nèi)穩(wěn)定，RSD為0.8%。

2.6重復(fù)性試驗取供試品（批號120401），共5份，分別按“2.2.2供試品溶液的制備”方法制備供試品溶液，進行測定，求得歐前胡素含量的RSD為0.7%，表明重現(xiàn)性較好。

2.7精密度試驗精密吸取歐前胡素對照品溶液（10.00ug·ml-1）10μl，按“2.1”項下色譜條件重復(fù)進樣5次測定，計算葛根素面積的相對標準偏差（RSD）為0.6%，表明精密度較好。

2.8加樣回收率試驗精密稱取已知含量的樣品（批號120401，歐前胡素含量0.108mg·g-1）約1g，共6份，分別置50ml容量瓶中，分別精密加入歐前胡素對照品儲備液（0.0500mg·ml-1）10ml、12ml、15ml各2份混勻后按“2.2.2供試品溶液的制備”方法操作，得回收率試驗溶液，依法測定，結(jié)果見表1。

2.9樣品含量的測定精密稱取3個批號的樣品（每批號2份），按“2.2.2供試品溶液的制備”方法制備供試品溶液，分別精密吸取供試品溶液與對照品溶液各10μl，注入液相色譜儀，測定三批樣品中歐前胡素的峰面積，按外標法計算其含量，結(jié)果見表2。

表1 歐前胡素加樣回收率試驗

表2 3批樣品含量測定結(jié)果

3 討論

通過對3批樣品中歐前胡素的測定，結(jié)果表明最高含量為0.108mg·g-1，最低為0.098mg·g-1，綜合考慮確定限量每克含歐前胡素不得低于0.528mg。

流動相的選擇：試驗中采用不同的流動相：甲醇-水（50∶50），甲醇-水（55：45），甲醇-水（60：40），結(jié)果表明采用流動相甲醇-水（55∶45）的色譜圖基線較平穩(wěn)，分離效果較好。

該方法簡便、準確，重復(fù)性好，可供該制劑質(zhì)量控制參考。

［1］吉林省食品藥品監(jiān)督管理局醫(yī)療機構(gòu)制劑標準［J］.JLZJ-ZB-0019-2006，2006：1.

［2］國家藥典委員會.《中國藥典》年版一部［M］.北京：中國醫(yī)藥科技出版社，2010：97.

杏仁——止咳之王

【歌訣】

杏仁數(shù)王在止咳，

性溫潤燥解肌熱。

咳喘便秘行痰泄，

寒熱虛實止咳歇。

【釋義】 中藥治療咳嗽氣喘首選杏仁。杏仁其性溫，味苦降泄，肅降并宣發(fā)肺氣而能止咳平喘；苦而能燥，能化痰飲；又其質(zhì)潤多脂，味苦下氣，故能潤燥而行大便。無論寒熱虛實之咳嗽氣喘，杏仁皆可用之。

【藥解】 杏仁為薔薇科植物山杏Prunues armeniaca L.var.ansu Maxim.西伯利亞杏P.sibirica L.東北杏P.mandshurica（Maxim.）Koehne或杏P.armeniaca L.的成熟種子。

性味歸經(jīng)：苦杏仁：苦，微溫。甜杏仁：甘，平。有小毒。歸肺、大腸經(jīng)。

功效：止咳平喘，潤腸通便。

主治：①用于咳嗽氣喘。②用于腸燥便秘。

用法用量：煎服，9～15g。或入丸、散。

各家論述：

l.《本草拾遺》：“殺蟲。以利喉咽，去喉痹、痰唾、咳嗽、喉中熱結(jié)生瘡。”

2.《珍珠囊藥性賦》：“除肺熱，治上焦風(fēng)燥，利胸膈氣逆，潤大腸氣秘。”

3.《本草便讀》；“功專降氣，氣降則痰消嗽止。能潤大腸，故大腸氣秘者可用之。”

【常用藥類】 蘇子降氣化痰，瀉肺平喘；前胡用于熱證之咳喘；麥冬滋陰，潤肺，多用于肺燥之咳喘；葶藶子瀉肺平喘，利水消腫。

【臨證應(yīng)用】 杏仁有甜杏仁和苦杏仁之分，兩者功效類似，但甜杏仁較苦杏仁藥力緩和，苦杏仁偏降氣止咳，而甜杏仁偏于潤肺止咳。杏仁治療風(fēng)寒咳嗽，胸悶氣逆，則配伍麻黃、甘草，以宣肺平喘，如三拗湯；用于風(fēng)熱感冒時則配伍桑葉、菊花，如桑菊飲；治療燥熱咳嗽，痰少難咳，配伍桑葉、貝母、沙參等，如桑杏湯；若用于治療腸燥便秘，則與柏子仁、郁李仁等同用，如五仁丸。本品含有毒成分氫氰酸，故臨證使用時應(yīng)當注意用量不宜過大。

——摘編自人民軍醫(yī)出版社《臨證藥王歌訣》

De t e r mination o f Imp e r a t o rin in Ho ng Bao p o w d e r b y HPLC

Wang Shu Wang M iaomiao Lu Shuli
（Jilin Institute for Food and D rug Control，Jilin 132001，China）

ObjectiveTo establish a method for the determination of Imperatorin in Hong Bao powder.Methods HPLCmethod was used to determine the content.The column was Apollo-C18（250 mm×4.6 mm，5μm），and the mobile phase：methanol-water（55∶45）.The flow rate was 1.0 mL·min-1and the detective wavelength was 300nm.Results The calibration curve of Imperatorin was linear in the range of 0.0300～0.2000μg（r=0.9999），the average recovery was 99.68%，RSD=0.35%.Conclusion The method is accurate with good reproducibility and can be used for the content determination of Imperatorin in Hong Bao powder.

Hong Bao powder；Lmperatorin；HPLC

10.3969／j.issn.1672-2779.2013.08.101

1672-2779（2013）-08-0149-02

韓世輝

2013-03-13）