高血壓性腦出血患者血漿循環DNA與纖維蛋白原相關性研究

·論 著·

高血壓性腦出血患者血漿循環DNA與纖維蛋白原相關性研究

趙召霞1，高 虹2，徐運強3，劉 蓓3，王榮霞3，潘世揚4

（1.河北省石家莊市第五醫院檢驗科，河北石家莊050021；2.河北省石家莊市第四醫院檢驗科，河北石家莊050011；3.河北省石家莊市第二醫院檢驗科，河北石家莊050051；4.江蘇省人民醫院檢驗科，江蘇南京210029）

目的探討高血壓性腦出血患者血漿循環DNA與纖維蛋白原的相關性。方法 采集30例高血壓性腦出血患者發病后24h靜脈血，采用雙重熒光定量PCR技術檢測血漿循環DNA水平，并同時檢測血漿纖維蛋白原水平。采集30例健康體檢者靜脈血作為對照組。結果 腦出血患者血漿循環DNA水平（313.2±224.7）mg/L，顯著高于對照組的（26.1±5.9）mg/L，差異有統計學意義（P＞0.05）。腦出血患者輕、中、重度3組血漿循環DNA水平之間差異有統計學意義（P＜0.05），重度組血漿循環DNA水平顯著高于輕度組和中度組（P＜0.05），中度組顯著高于輕度組（P＜0.05）。腦出血患者血漿纖維蛋白原水平（4.25±1.51）g/L，顯著高于對照組的（2.76±0.85）g/L，差異有統計學意義（P＜0.05）；重度組血漿纖維蛋白原水平顯著高于輕度組和中度組（P＜0.05）；中度組與輕度組間血漿纖維蛋白原水平差異無統計學意義。腦出血患者血漿循環DNA水平與其纖維蛋白原水平呈顯著正相關（r=0.632，P＜0.05）。結論 血漿循環DNA可作為反映高血壓性腦出血后腦組織細胞損傷及嚴重程度的靈敏指標。

顱內出血，高血壓性；纖維蛋白原；診斷

循環DNA（circulating DNA）是存在于血液（血漿或血清）、滑膜液、腦脊液等體液中的細胞外DNA，目前國外文獻報道血漿中循環DNA水平的高低與創傷和感染的嚴重程度相關，高水平循環DNA預示著臨床的高病死率。高血壓性腦出血發病率高，預后差，雖然一些臨床評分可預測腦出血的預后，但仍缺乏可靠的實驗室指標指導臨床醫生作出正確判斷。本研究檢測高血壓性腦出血患者早期血漿循環DNA和纖維蛋白原水平，旨在探討其在腦出血患者中的相關性以及臨床意義。

1 資料與方法

1.1 一般資料：選取2010年10月—2011年5月在河北省石家莊市第二醫院住院的高血壓性腦出血患者30例，診斷符合中華醫學會第4次全國腦血管病會議制定的診斷標準［1］，其中男性20例，女性10例，年齡41～64歲，平均（50.9±9.2）歲。所有患者經頭顱 CT檢查證實有顱內出血，出血量10～120mL，平均（45.6±23.8）mL。病情輕重參照腦卒中患者臨床神經功能缺損程度評分標準進行評估，其中輕度9例，中度13例，重度8例。所有患者排除發病前并發急慢性感染、腫瘤、免疫性疾病等。選擇同期健康體檢者30例作為對照組，其中男性19例，女性11例，年齡40～60歲，平均（49.3±1.9）歲。2組性別、年齡差異均無統計學意義（P＞0.05），具有可比性。

1.2 方法

1.2.1 血漿標本的采集和保存：采集健康體檢者和高血壓性腦出血患者發病24h內靜脈血2mL，乙二胺四乙酸抗凝，3 000r/min離心10min，吸取上清于1.5mL離心管中，16 000 r/min離心10min，吸取上層無細胞血漿200μL，置于含有5.0×104拷貝重組質粒0.2mL離心管（江蘇省人民醫院潘世揚教授饋贈）中，充分混勻后，-20℃保存備用。

1.2.2 血漿循環DNA的提取：采用磁珠法同步提取血漿DNA和重組質粒，試劑盒由上海浩源生物有限技術公司提供。

1.2.3 熒光定量PCR檢測血漿循環DNA：采用雙重熒光定量PCR技術檢測提取的血漿DNA和重組質粒，檢測方法參見文獻［2］。試劑盒由江蘇省人民醫院潘世揚教授饋贈。

1.2.4 血漿纖維蛋白原的檢測：抽取外周血2mL，加入1∶9枸櫞酸鈉抗凝試管中混勻，3 000 r/min離心10min，分離出血漿，用日本Sysmex CA1500型血凝儀測定血漿纖維蛋白原水平。

1.3 統計學方法：應用SPSS13.0統計學軟件包進行數據處理。計量資料以±s表示，分別采用單因素方差分析、q檢驗及t檢驗；相關性采用Pearson直線相關分析。P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結 果

2.1 血漿循環DNA水平比較：高血壓性腦出血患者血漿循環DNA水平顯著高于對照組差異有統計學意義（P＜0.05）。腦出血患者輕、中、重度3組血漿循環 DNA水平之間差異有統計學意義（F= 19.362，P＜0.05）。腦出血患者重度組血漿循環DNA水平顯著高于輕度組和中度組，中度組顯著高于輕度組，差異有統計學意義（P＜0.05）。見表1。

2.2 血漿纖維蛋白原水平變化：高血壓性腦出血患者血漿纖維蛋白原水平顯著高于對照組，差異有統計學意義（P＜0.05）。高血壓性腦出血患者重度組血漿纖維蛋白原水平顯著高于輕度組和中度組，差異有統計學意義（P＜0.05）；中度組與輕度組間血漿纖維蛋白原水平差異無統計學意義（P＞0.05）。見表1。

Groups n Circulating DNA（mg/L）Fibrinogen（g/L）Control 30 26.1±5.9 2.76±0.85 Intracerebral hemorrhage 30 313.2±224.7* 4.25±1.51*Mild 9 73.4±20.8 2.89±1.23 Moderate 13 264.4±88.7# 3.21±1.36 Severe 8 546.2±152.9#△ 5.29±2.31#△

2.4 血漿循環DNA水平與纖維蛋白原水平相關性分析：高血壓性腦出血患者血漿循環DNA水平與其纖維蛋白原水平呈顯著正相關（r=0.632，P＜0.05）。

3 討 論

現代社會腦卒中發病率、致殘率均較高，嚴重威脅著中老年人的健康。高血壓性腦出血病理生理機制復雜，腦出血后引起機體及腦組織局部一系列病理生理反應。腦出血后，除血腫本身的占位性損害外，血腫對周圍腦組織的直接破壞和繼發性腦損傷是影響預后的重要因素。腦出血后血凝塊釋放大量凝血酶，后者與表達在腦組織神經元、神經膠質細胞以及內皮細胞上的凝血酶受體結合，通過一系列信號轉導，導致細胞膜功能或結構的破壞，最終不但可通過細胞毒作用直接損害神經細胞，導致細胞凋亡，還能破壞血腦屏障，形成腦水腫［3］。細胞凋亡、腦水腫和DNA損傷均能導致細胞核內核酸釋放致外周血中。循環DNA是一種無細胞狀態的細胞外DNA，健康人和許多疾病患者血清和血漿中都含有一定量的循環DNA。關于血漿循環DNA的來源目前研究傾向2種觀點：一是細胞主動分泌或釋放產生的DNA片段，這種情況主要發生在腫瘤細胞，腫瘤患者血漿循環DNA水平顯著升高，其來源大多數是腫瘤細胞分泌釋放［4］；二是細胞死亡后釋放的DNA片段，當機體伴有大量組織細胞破壞時，其胞內核酸釋放，外周血循環DNA的含量會急劇上升。本研究結果顯示高血壓性腦出血患者血漿循環DNA水平顯著升高，說明高血壓性腦出血后原發或繼發的腦組織損傷，導致腦組織細胞破壞，DNA釋放至血中，致循環DNA的水平升高，因此循環DNA可作為反映高血壓性腦出血后腦組織細胞損傷程度的一項指標。

纖維蛋白原是體內凝血系統的凝血因子，具有參與炎癥反應、血小板活化和血栓形成的病理生理功能，研究發現血漿纖維蛋白原是腦卒中有力的預測因子［5-6］，急性缺血性腦血管病早期血漿纖維蛋白原增高提示預后不良［7-8］。本研究結果顯示腦出血患者血漿纖維蛋白原水平顯著高于對照組（P＜0.05），這一結果也與楊松斌等［9］研究結果一致。高血壓性腦出血患者血漿纖維蛋白原濃度的升高提示預后不良，本研究結果還顯示高血壓性腦出血患者血漿循環DNA水平與其纖維蛋白原水平呈顯著正相關，提示檢測循環DNA對判斷高血壓性腦出血病情嚴重程度和預后具有重要臨床意義。高血壓性腦出血患者重度組血漿循環DNA水平顯著高于輕度組和中度組（P＜0.5）；并且中度組顯著高于輕度組（P＜0.5）。雖然腦出血患者重度組血漿纖維蛋白原水平顯著高于輕度組和中度組（P＜0.5），但是中度組與輕度組間血漿纖維蛋白原水平差異無統計學意義。因此，血漿循環DNA水平更能準確、靈敏地反映高血壓性腦出血患者的病情嚴重程度。

［1］中華醫學會神經科分會.各類腦血管疾病診斷要點［J］.中華神經科雜志，1996，29（6）：379.

［2］陳丹，潘世揚，張麗霞，等.人血漿DNA雙重實時熒光定量PCR檢測法的建立［J］.臨床檢驗雜志，2007，25（3）：177-179.

［3］鄧平，吳曉牧.高血壓腦出血病理生理機制研究進展［J］.中華腦血管病雜志：電子版，2010，4（4）：267-278.

［4］屠紅，高海峰，傅士龍，等.腫瘤患者循環DNA的定量研究［J］.中華腫瘤雜志，2204，26（10）：606-608.

［5］李敏，董萬利.進展性卒中危險因素的臨床分析［J］.中國腦血管病雜志，2010，7（4）：187-190.

［6］CAMPBELL RA，ALEMAN M，GRAY LD，et al.Flow profoundly influences fibrin network structure： implications for fibrin formation and clot stability in haemostasis［J］.Thromb Haemost，2010，104（6）：1281-1284.

［7］陳勇，陳道文，陳晨，等.檢測腦卒中患者纖維蛋白原及血小板參數變化的臨床意義［J］.國際檢驗醫學雜志，2011，32（19）：2210-2212.

［8］張國芬.腦卒中患者伴焦慮和抑郁障礙104例臨床分析［J］.河北醫科大學學報，2010，31（12）：1503-1504.

［9］楊松斌，董曉巧，胡悅育.血漿D-二聚體、C反應蛋白和纖維蛋白原與腦出血預后的相關研究［J］.浙江醫學，2010，32（4）：461-463.

（本文編輯：劉斯靜）

THE RELATIONSHIP BETWEEN PERIPHERAL BLOOD CIRCULAR DNA AND FIBRINOGEN IN PATIENTSW ITH HYPERTENSIVE INTRACEREBRAL HEMORRHAGE

ZHAO Zhaoxia1，GAO Hong2，XU Yunqiang3，LIU Bei3，WANG Rongxia3，PAN Shiyang4
（1.Department of Laboratory Medicine，the Fifth Hospital of Shijiazhuang，Hebei Province，Shijiazhuang 050021，China；2.Department of Laboratory Medicine，the Fourth Hospital of Shijiazhuang，Hebei Province，Shijiazhuang 050011，China；3.Department of Laboratory Medicine，the Second Hospital of Shijiazhuang，Hebei Province，Shijiazhuang 050051，China；4.Department of Laboratory Medicine，the First Affiliated Hospital of Nanjing Medical University，Jiangsu Province，Nanjing 210029，China）

Objective To explore the relationship between peripheral blood circular DNA and fibrinogen in patientswith hypertensive intracerebral hemorrhage.M ethods Venous blood of 30 healthy people and 30 patients with hypertensive intracerebral hemorrhage within 24h of illness onset was collected.The level of plasma circular DNA was detected by duplex real-time polymerase chain reaction assay.The level of fibrinogen was detected by blood coagulation analyzer.Results The level of circular DNA in patientswith intracerebral hemorrhage（313.2±224.7）mg/L was significantly higher than that in control group（26.1±5.9）mg/L（P＜0.05）.Patientswith intracerebral hemorrhagewere divided into mild，moderate and severe group.The levels of plasma circular DNA among the three groups were significantly different（P＜0.05）.The level of plasma circular DNA in severe group was significantly

intracranial hemorrahage，hypertensive；fibrinogen；diagnosis

R743.34

A

1007-3205（2013）03-0253-03

2012-04-26；

2012-07-11

石家莊市科學研究與發展計劃課題（101461293）；江蘇省實驗診斷學重點實驗室重大課題（XK200731）

趙召霞（1978-），女，山西平陸人，河北省石家莊市第五醫院醫師，醫學碩士，從事分子生物學研究。

10.3969/j.issn.1007-3205.2013.03.002

higher than that in mild and moderate group（P＜0.05）；moderate group significantly higher than the mild group（P＜0.05）.The level of fibrinogen in patientswith intracerebral hemorrhage（4.25±1.51）g/L was significantly higher than control group（2.76±0.85）g/L（P＜0.05）.The level of fibrinogen in severe group was significantly higher than that in mild and moderate group（P＜0.05），but the levels of fibrinogen inmoderate group and mild group had no significant difference.Therewas significantly positive correlation between the level of circular DNA and that of fibrinogen（r=0.632，P＜0.05）.Conclusion

Plasma circular DNA can be used as a sensitive parameter of brain cell damage and severity after intracerebral hemorrhage.