Caveolin-1與Her-2在乳腺浸潤性導(dǎo)管癌中的表達及臨床意義

李 揚，萬建設(shè)

（1.承德醫(yī)學(xué)院腫瘤外科，河北承德067000；2.河北省保定市第一醫(yī)院外科，河北保定071000）

·論 著·

Caveolin-1與Her-2在乳腺浸潤性導(dǎo)管癌中的表達及臨床意義

李 揚1，萬建設(shè)2*

（1.承德醫(yī)學(xué)院腫瘤外科，河北承德067000；2.河北省保定市第一醫(yī)院外科，河北保定071000）

目的 探討小凹蛋白1（caveolin-1，Cav-1）、人表皮生長因子受體2（human epidermal growth factor recepter-2，Her-2）在乳腺浸潤性導(dǎo)管癌（invasive ductal carcinoma，IDC）中的表達及其臨床意義。方法應(yīng)用免疫組織化學(xué)法檢測53例IDC組織及其周圍正常乳腺組織中Cav-1、Her-2的表達情況，并分析二者與臨床病理參數(shù)之間及其二者之間的相關(guān)關(guān)系。結(jié)果53例IDC組織中，Cav-1陽性表達率為54.7％，顯著低于癌旁正常乳腺組織上皮細胞的88.7％（P=0.000）；Her-2在IDC組織中陽性表達率為30.2％，高于癌旁正常乳腺組織上皮細胞的13.2％（P=0.034）；二者在IDC中的表達呈負相關(guān)（rs=-0.310，P=0.024）。Cav-1、Her-2在IDC中的表達情況與有無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、臨床分期有關(guān)（P＜0.05），與患者年齡、腫瘤大小無關(guān)（P＞0.05）。結(jié)論Cav-1在IDC組織中表達下調(diào)，在細胞信號轉(zhuǎn)導(dǎo)過程中作為負性調(diào)節(jié)蛋白，負向調(diào)節(jié)Her-2蛋白的表達，從而抑制乳腺癌的發(fā)生、發(fā)展及浸潤轉(zhuǎn)移。

乳腺腫瘤；小凹蛋白-1；受體，表皮生長因子

乳腺癌作為女性最常見的惡性腫瘤之一［1］，發(fā)病率呈逐年上升趨勢，其中以浸潤性導(dǎo)管癌（invasive ductal carcinoma，IDC）最為多見，占所有乳腺癌的50％～80％。小凹蛋白1（caveolin-1，Cav-1）是近年來新發(fā)現(xiàn)的抑癌基因［2-5］，人表皮生長因子受體2（human epidermal growth factor recepter-2，Her-2）蛋白的過表達與人類乳腺癌的進展有關(guān)［6］。目前對于二者之間的相互作用機制在乳腺癌方面研究還很少，本研究檢測二者在乳腺IDC和癌旁正常組織中的表達情況，分析二者與臨床病理特征及二者之間的關(guān)系，探討其在乳腺IDC發(fā)生、發(fā)展中的作用，旨在為乳腺癌的診斷及治療提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 標本來源：53例乳腺浸潤性導(dǎo)管癌及癌旁正常組織（距癌變部位5cm以外，病理檢查無癌變組織），標本均來自于河北省保定市第一醫(yī)院病理科2009年6月—2012年6月外科手術(shù)切除及存檔石蠟包埋標本。所有標本術(shù)前均未行放療和化療，均為女性，年齡38～75歲，平均52歲；按2002年美國聯(lián)合癌癥分類委員會和國際抗癌聯(lián)盟制定的標準進行TNM分期為Ⅰ～Ⅲ期［7］。所有標本均經(jīng)10％福爾馬林固定，常規(guī)石蠟包埋，4μm厚連續(xù)切片，進行免疫組織化學(xué)染色。

1.2 實驗試劑：Cav-1抗體為兔抗人多克隆抗體，購自美國基因公司（稀釋度為1∶100）。Her-2抗體為兔抗人單克隆抗體，購自中杉金橋公司（稀釋度為1∶150）。二氨基聯(lián)苯胺顯色液購于福州邁新生物技術(shù)開發(fā)公司。

1.3 Cav-1、Her-2檢測：采用免疫組織化學(xué)Envision二步法檢測Cav-1及Her-2蛋白在乳腺IDC及癌旁正常組織中的表達。操作按照試劑盒所附說明書進行，用已知陽性片（北京中杉金橋生物技術(shù)公司提供）作陽性對照，同時用PBS替代一抗作陰性對照，每次實驗均設(shè)陽性對照及陰性對照。

1.4 結(jié)果判定：Cav-1蛋白主要表達于細胞膜上，以胞膜中出現(xiàn)棕黃色顆粒為陽性反應(yīng)，Her-2表達于細胞膜上。采用雙盲法對每張切片在高倍鏡（× 200）下計數(shù)10個視野。Cav-1以＜50％細胞膜染色為陰性；50％～100％細胞膜染色為陽性。Her-2以全部癌細胞中細胞膜無染色或＞30％癌細胞膜不完整弱染色為陰性；＞10％癌細胞膜輕至中度完整染色或＞30％癌細胞膜完整強染色為陽性。

1.5 統(tǒng)計學(xué)方法：應(yīng)用SPSS17.0統(tǒng)計軟件包進行數(shù)據(jù)處理。計數(shù)資料以百分率表示，采用χ2檢驗；相關(guān)性采用Spearman等級相關(guān)分析。P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 Cav-1蛋白在乳腺IDC及正常乳腺組織組織中的表達：Cav-1在53例IDC組織中陽性表達率為54.7％，顯著低于癌旁正常乳腺組織上皮細胞的88.7％（P=0.000）；Her-2在IDC組織中陽性表達率為30.2％，高于癌旁正常乳腺組織上皮細胞的13.2％（P=0.034）。經(jīng)Spearman等級相關(guān)分析，二者的表達呈負相關(guān)，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（rs= -0.310，P=0.024）。見表1，2。

表1 Cav-1、Her-2在乳腺癌及癌旁正常組織中的表達 （n=53，例數(shù)，％）

表2 乳腺癌組織中Cav-1與Her-2的相關(guān)性

2.2 免疫組織化學(xué)檢測結(jié)果：Cav-1主要表達于細胞膜上，胞漿中亦有表達；Her-2表達于細胞膜上。見圖1，2。

圖1 IDC中Cav-1陽性表達（SP×200）

圖2 IDC中Her-2陽性表達（SP×200）

2.3 乳腺IDC組織Cav-1、Her-2的表達與臨床病理參數(shù)的關(guān)系：Cav-1及Her-2在IDC組織中的表達與有無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、臨床分期有關(guān)（P＜0.05），與年齡、腫瘤大小無關(guān)（P＞0.05）。其中淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移越多、臨床分期越晚，Cav-1表達率降低；腫瘤越大、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移越多、臨床分期越晚，Her-2表達率越高。見表3。

表3 乳腺浸潤性導(dǎo)管癌組織中Cav-1與Her-2的表達 （例數(shù)，％）

3 討 論

Caveolae（小凹）是細胞質(zhì)膜表面特異性的內(nèi)陷微區(qū)，是細胞信號轉(zhuǎn)導(dǎo)的信使中心［8］。許多信號分子聚集在Caveolae區(qū)，如各種受體酪氨酸激酶，非受體酪氨酸激酶等。Cav-1是Caveolae表面標記蛋白，是許多信號分子的支架蛋白和負性調(diào)節(jié)蛋白，它與細胞的增殖、遷移、凋亡等過程密切相關(guān)［9］。人類的Cav-1基因定位在可疑的腫瘤抑制位點（7q31.1）上，研究［10-11］表明Cav-1在乳腺癌細胞及原癌基因激活的腫瘤細胞中表達下調(diào)。Park等［12］研究發(fā)現(xiàn)，Cav-1在130例正常乳腺組織中陽性表達率100％；在IDC中陽性表達率為56.9％，其表達與患者年齡、腫瘤大小、淋巴結(jié)情況等無關(guān)。本研究發(fā)現(xiàn)Cav-1在正常乳腺組織中陽性表達率為88.7％，IDC中為54.7％，其可能與試驗方法、技術(shù)操作等因素有關(guān)。同時發(fā)現(xiàn)乳腺癌臨床分期越晚，Cav-1表達減少；伴有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的乳腺癌Cav-1表達減少。表明其具有抑制乳腺癌發(fā)生、發(fā)展、浸潤轉(zhuǎn)移的作用。

Her-2（也稱C-erbB-2，Her-2/neu），屬于表皮生長子受體家族，與人類及嚙齒類動物的乳腺腫瘤的發(fā)生有關(guān)。研究［13］發(fā)現(xiàn)在20％～30％的乳腺癌患者中Her-2過度表達，它參與了抑制細胞凋亡、促進腫瘤新生血管生成、增加腫瘤細胞的侵襲力等過程。目前對其研究較明確，與乳腺癌的發(fā)生、發(fā)展及預(yù)后密切相關(guān)，是判斷乳腺癌預(yù)后的獨立指標。本研究發(fā)現(xiàn)Her-2在正常乳腺組織中陽性表達率為13.2％，在IDC中為30.2％，可能與Her-2表達的個體差異、樣本含量及所采用的檢測技術(shù)有關(guān)。同時發(fā)現(xiàn)乳腺癌臨床分期越晚、伴有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的乳腺癌，Her-2的表達增加。提示Her-2表達增高，越容易發(fā)生浸潤和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移。

Cav-1N端近膜區(qū)的21個氨基酸殘基組成“腳手架”結(jié)構(gòu)域（scaffolding domain，SD），Her-2基因集中定位于Caveolae中［14］，Cav-1通過SD對Her-2起負性調(diào)節(jié)作用，是Her-2信號傳導(dǎo)的負向調(diào)控因子［12］。近來Lu等［15］研究表明該效應(yīng)是使轉(zhuǎn)錄下調(diào)，抑制細胞增殖，促進細胞成熟、分化，維持細胞穩(wěn)定，這些都是通過Cav-1的減量調(diào)節(jié)介導(dǎo)完成的。本研究證實Cav-1與Her-2在乳腺IDC中的表達呈負相關(guān)，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（rs=-0.310，P= 0.024）。表明隨著乳腺癌病期的進展，Cav-1表達下調(diào)，對Her-2抑制作用減弱，Her-2表達增加，從而促進乳腺癌細胞的增殖，增加侵襲能力。

本研究從蛋白水平初步探討了Cav-1及Her-2蛋白在乳腺IDC及正常組織中的表達狀態(tài)，證實Cav-1在乳腺癌中表達下調(diào)，并對Her-2蛋白的表達起負性調(diào)控作用，初步驗證Cav-1具有抑制乳腺癌發(fā)生、發(fā)展、轉(zhuǎn)移的能力，是乳腺癌發(fā)生的重要分子生物學(xué)事件。侵襲和轉(zhuǎn)移是惡性腫瘤的本質(zhì)特征，研究其機制是制定治療方案的理論基礎(chǔ)［16］。本研究為預(yù)測患者預(yù)后、指導(dǎo)臨床、預(yù)防腫瘤等方面打下堅實的基礎(chǔ)。

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（本文編輯：趙麗潔）

R737.9

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1007-3205（2013）07-0816-04

2012-12-24；

2013-01-28

李揚（1986-），女，河北衡水人，承德醫(yī)學(xué)院醫(yī)學(xué)碩士研究生，從事乳腺腫瘤診治研究。

*通訊作者

10.3969/j.issn.1007-3205.2013.07.026