家蠶無性克隆母蛾的微粒子病檢測(cè)靈敏度分析初報(bào)

徐杰，魯興萌，劉培剛，杜鑫，孟正樂，何恩潔

（1.浙江省蠶種質(zhì)量檢驗(yàn)檢疫站，浙江 杭州 310020；2.浙江大學(xué)動(dòng)物科學(xué)學(xué)院，浙江 杭州 310029；

3.浙江省農(nóng)業(yè)科學(xué)院蠶桑研究所，浙江 杭州 310021）

家蠶無性克隆母蛾的微粒子病檢測(cè)靈敏度分析初報(bào)

徐杰1，魯興萌2，劉培剛3，杜鑫3，孟正樂1，何恩潔1

（1.浙江省蠶種質(zhì)量檢驗(yàn)檢疫站，浙江 杭州 310020；2.浙江大學(xué)動(dòng)物科學(xué)學(xué)院，浙江 杭州 310029；

3.浙江省農(nóng)業(yè)科學(xué)院蠶桑研究所，浙江 杭州 310021）

由于單交制種模式與常規(guī)蠶種制種模式不同，因此需要建立適合單交制種模式的新蠶種生產(chǎn)技術(shù)規(guī)程和質(zhì)量檢疫檢驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)。本文對(duì)雌蠶無性克隆和常規(guī)交配制種條件下的母蛾微粒子病檢出率進(jìn)行分析，結(jié)果表明雌蠶無性克隆制種方式下的母蛾對(duì)微粒子病檢疫沒有產(chǎn)生不良影響，即使摘除卵管和蠶卵，其檢測(cè)靈敏度也是足夠的。

家蠶；無性克隆；母蛾；微粒子病；檢疫

近些年來，浙江省農(nóng)科院蠶桑研究所利用雌蠶無性克隆（也稱孤雌生殖、無性繁殖）技術(shù)育成了發(fā)生率和孵化率分別達(dá)90%和80%以上的實(shí)用化雌蠶無性克隆系（基因型完全相同、后代全部為雌性的品種），并與經(jīng)濟(jì)性狀優(yōu)良的限性卵色品種或平衡致死系（根據(jù)卵色能將雌、雄分開）雜交先后育成了綜合經(jīng)濟(jì)性狀優(yōu)良的新型單交品種浙鳳1號(hào)（原名：雌29×卵36）和新型雄蠶品種“雌35×平28”，前者已通過浙江省品種審定，后者正在參加浙江省家蠶新品種實(shí)驗(yàn)室鑒定［1～3］。這種新型的“單交制種”新模式，提供給蠶種生產(chǎn)企業(yè)的原種，一方全為雌蠶，另一方全為雄蠶，免去了雌雄鑒別這道復(fù)雜的工序，將有效解決目前原蠶區(qū)蠶種生產(chǎn)過程中的雌雄蠶蛹鑒別費(fèi)時(shí)、費(fèi)工的問題，大幅度提高制種效率及雜交徹底率，有利于提高蠶種質(zhì)量［4］。

單交品種的育成與應(yīng)用將推進(jìn)我國(guó)蠶種生產(chǎn)技術(shù)的創(chuàng)新，提高蠶種生產(chǎn)企業(yè)的效益。但由于單交制種模式與現(xiàn)行蠶種制種模式不同，需要建立新的蠶種生產(chǎn)技術(shù)規(guī)程和蠶種質(zhì)量檢疫檢驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)。如雌蠶無性克隆系原種生產(chǎn)，需要從羽化的處女蛾體內(nèi)取出未受精卵處理，這種制種方式即摘除卵管和蠶卵的母蛾是否會(huì)對(duì)微粒子病的檢疫產(chǎn)生不良影響［5］。需要對(duì)摘除卵管和蠶卵的母蛾微粒子病檢測(cè)靈敏度進(jìn)行測(cè)試，判斷雌蠶無性克隆的母蛾微粒子病檢出率與正常交配產(chǎn)卵的母蛾微粒子病檢出率是否存在顯著差異，為建立新型蠶種生產(chǎn)模式下的蠶種質(zhì)量檢疫檢驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)提供依據(jù)。為此，2012年秋期浙江省蠶種質(zhì)量檢疫檢驗(yàn)站、浙江大學(xué)動(dòng)物科學(xué)學(xué)院蠶蜂研究所、浙江省農(nóng)科院蠶桑研究所聯(lián)合開展了相關(guān)研究，現(xiàn)將結(jié)果報(bào)告如下。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

供試家蠶微粒子蟲孢子液：由浙江大學(xué)動(dòng)物科學(xué)院蠶蜂研究所提供，分別設(shè)置103spore/ml、105spore/ml、107spore/ml等3種不同濃度。

供試蠶品種：“無毒”秋豐、白玉原種，由浙江省蠶種質(zhì)量檢驗(yàn)檢疫站提供。

供試“無毒”母蛾：由浙江省蠶種質(zhì)量檢驗(yàn)檢疫站提供一樣本檢驗(yàn)“無毒”的二樣本蛾盒。

1.2 飼養(yǎng)和感染

供試的“無毒”秋豐、白玉原種，由浙江省農(nóng)科院蠶桑研究所按DB33/T 217.4-2007《桑蠶種繁育規(guī)程》飼養(yǎng)至4齡大眠，提供給浙江大學(xué)動(dòng)物科學(xué)學(xué)院添毒用大眠蠶1600條；浙江大學(xué)動(dòng)物科學(xué)學(xué)院蠶蜂研究所在5齡起蠶時(shí)，分別添食103spore/ml、105spore/ml、107spore/ml等3種不同濃度的微粒子蟲孢子懸浮液。添毒后按常規(guī)方法飼養(yǎng)至化蛹，鑒別雌、雄蠶蛹備用。

1.3 制種

試驗(yàn)區(qū)雌蛹化蛾當(dāng)天下午14～16時(shí)按無性克隆制種方式摘除輸卵管和蠶卵，摘除輸卵管和蠶卵后的蛾體60℃烘干后備檢。

對(duì)照區(qū)雌蛹化蛾后與對(duì)交品種雄蛾交配產(chǎn)卵，產(chǎn)卵的母蛾待自然死亡后60℃烘干備檢。

1.4 微粒子病靈敏度檢測(cè)

將感染母蛾與“無毒”母蛾以1∶27的比例混合。母蛾鏡檢由浙江省蠶種質(zhì)量檢疫檢驗(yàn)站按DB 33/ T217.3-2007《桑蠶種母蛾檢疫規(guī)程》3.6規(guī)定的檢疫流程進(jìn)行磨蛾、過濾、離心、鏡檢，調(diào)查檢出率。以“無毒”母蛾（28蛾/盒）鏡檢結(jié)果作為陰性對(duì)照。

1.5 數(shù)據(jù)處理

使用Microsoft Excel 2003程序，對(duì)試驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行方差分析，百分?jǐn)?shù)進(jìn)行Sin-1（P）1/2轉(zhuǎn)換。

2 結(jié)果與分析

2.1 不同制種方式的母蛾微粒子病檢出率

將雌蠶無性克隆（試驗(yàn)區(qū)）和常規(guī)交配制種（對(duì)照區(qū)）的母蛾微粒子病檢出率進(jìn)行了統(tǒng)計(jì)分析，結(jié)果見表1。

表1 雌蠶無性克隆與常規(guī)制種的母蛾微粒子病檢出率（%）Table 1 Pebrine detectable rate of female silkworm parthenogenetic clone and conventional eggs production（%）

對(duì)雌蠶無性克隆與常規(guī)制種的母蛾微粒子病檢出率原始數(shù)據(jù)進(jìn)行了Sin-1（P）1/2轉(zhuǎn)換，結(jié)果見表2。

表2 雌蠶無性克隆與常規(guī)制種的母蛾微粒子病檢出率Table 2 Pebrine detectable rate of female silkworm parthenogenetic clone and conventional eggs production

2.2 不同制種方式的母蛾微粒子病檢出率方差分析

對(duì)不同制種方式、不同感染濃度母蛾微粒子病檢出率作無重復(fù)雙因素方差分析，結(jié)果見表3。

通過分析發(fā)現(xiàn)，不同感染劑量對(duì)母蛾微粒子病檢出率影響顯著：

F（劑量）=13.494＜Fcrit（臨界值）=5.143

P（概率）=0.006＜0.01

而不同制種方式對(duì)母蛾微粒子病檢出率沒有表現(xiàn)出明顯差異：

F（制種方式）=1.828＜Fcrit（臨界值）=4.757

P（概率）=0.242＞0.05

PA preliminary Analysis on Moth Pebrine Detection Sensitivity of Silkworm Parthenogenetic Clones

XU Jie1，LU Xing-meng2，LIU Pei-gang3，DU Xin3，MENG Zheng-le1，HE En-jie1
（1.Silkworm Egg Technical Service Center，Agricultural Deportment of Zhejiang Province，Hangzhou 310020，China；2.Colleges of Animal Sciences，Zhejiang University，Hangzhou 310029，China；3.Sericultural Research Institute，Zhejiang Academy of Agricultural Sciences，Hangzhou 310021，China）

Because of the differences between the single-cross eggs production mode and conventional eggs production mode，it is necessary to establish new suitable eggs production technical specification and quality inspection standard. The female moth pebrine detection rate of female silkworm parthenogenetic clones and conventional eggs production were analyzed，results showed that there were no adverse effects on moth pebrine quarantine under female silkworm parthenogenetic clones eggs production.Even if the ovarian tubes and eggs were removed，the detection sensitivity is also enough.

silkworm；parthenogeneticc clone；moth pebrine disease；quarantine

S882.2

A

0258-4069［2013］02-032-03

項(xiàng)目來源：浙江省農(nóng)業(yè)新品種選育重大專項(xiàng)（2012C12910）

徐杰，男，浙江嘉興，碩士，高級(jí)農(nóng)藝師。主要從事蠶種質(zhì)量檢疫檢驗(yàn)。E-mail：osan@sina.com