Notch-1和Survivin在甲狀腺乳頭狀癌中的表達及意義

史永亮

甲狀腺癌是最常見的內分泌器官惡性腫瘤之一，好發于中青年女性，其病理類型以乳頭狀癌為主，具有惡性程度高、預后差的特點，然而其病變機制目前尚不明確。眾多研究證實，惡性腫瘤發生發展的重要原因是腫瘤細胞的過度增殖和凋亡受抑。Notch-1和Survivin是調控細胞增殖、分化和凋亡的重要蛋白［1，2］。本研究采用免疫組織化學SP法觀察甲狀腺乳頭狀癌組織Notch-1和Survivin的表達及二者的相關性，并分析其臨床意義，探討Notch-1和Survivin在疾病發生發展中的作用，為疾病診治提供理依據。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取我院2010年1月至2011年10月手術切除的甲狀腺乳頭狀癌組織蠟塊標本80例，經病理確診均為乳頭狀癌(甲狀腺乳頭狀癌組)。其中男10例，女70例;年齡28～56歲，中位年齡41.5歲;所有患者術前均未接受放療、化療及內分泌治療。TNM臨床分期:Ⅰ+Ⅱ期58例，Ⅲ+Ⅳ期22例。80例甲狀腺乳頭狀癌中有頸淋巴結轉移者34例，無頸淋巴結轉移者46例。同時選取我院甲狀腺腺瘤70例(甲狀腺腺瘤組)和門診健康志愿者50例為對照組。3組性別比、年齡等一般資料差異無統計學意義(P＞0.05)，具有可比性。

1.2 主要試劑 羊抗人Notch-1單克隆抗體、兔抗人 Survivin多克隆抗體為Santa Cruz公司產品。免疫組化SP試劑盒購自上海生工生物工程技術服務有限公司產品。

1.3 方法 采用免疫組織化學SP法檢測Notch-1和Survivin的表達，嚴格按照試劑盒說明書操作，用已知陽性切片作為陽性對照，用PBS代替一抗作為陰性對照。判定標準:細胞質(核)內檢出棕黃色顆粒，400倍鏡下隨機選取5個視野計數200個細胞，著色細胞數≥10%為陽性，＜10%即為陰性。

1.4 統計學分析 應用SPSS 10.0統計軟件，計數資料采用χ2檢驗，相關性比較采用Spearman等級相關性分析，P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 Notch-1和Survivin在不同甲狀腺組織中的表達 Notch-1在甲狀腺乳頭狀癌組的陽性表達率為22.5%(18/80)，顯著低于甲狀腺腺瘤組織78.6%(55/70)和對照組88.0%(44/50)的陽性表達率，差異有統計學意義(P＜0.05);Survivin在甲狀腺乳頭狀癌組的陽性表達率為70.0%(56/80)，顯著高于甲狀腺腺瘤組織12.9%(9/70)和對照組織0(0/50)的陽性表達率，差異有統計學意義(P＜0.05)。

2.2 Notch-1和Survivin在甲狀腺乳頭狀癌組織表達的相關性80例甲狀腺乳頭狀癌組織中，Notch-1和Survivin的表達呈負相關(r= －0.512，P＜0.01)。見表 1。

2.3 Notch-1和Survivin表達與甲狀腺乳頭狀癌臨床病理特征的關系 Notch-1和Survivin表達與患者年齡、性別、腫瘤大小無關(P＞0.05)，而與臨床分期和淋巴結轉移密切相關，差異有統計學意義(P＜0.05)。見表2。

表2 Notch-1和Survivin表達與甲狀腺乳頭狀癌臨床病理特征關系例(%)

3 討論

Notch-1基因最早是在果蠅中發現，之后在哺乳動物中也發現其表達。Notch-1信號通路不僅廣泛參與細胞的分化、發育、增殖和凋亡，現證實也和惡性腫瘤的發生密切相關，但其作用存在復雜性。有研究發現Notch-1基因在胰腺癌、卵巢癌、宮頸癌等惡性腫瘤中高表達，在前列腺癌、甲狀腺髓樣癌中低表達。有學者總結得到的結論是，Notch-1基因在腫瘤中的作用與不同的細胞種類和細胞內環境有關。楊晶金等［3］采用Real Time-PCR技術和免疫組化技術分別檢測甲狀腺乳頭狀癌組織Notch-1 mRNA和蛋白的表達水平，結果顯示Notch-1 mRNA表達水平為對照組的0.2228±0.1202，Notch-1蛋白的陽性表達率為20%。我們的免疫組化結果顯示，Notch-1蛋白在甲狀腺乳頭狀癌組織中的陽性表達率為22.5%，與對照甲狀腺組織相比，表達水平顯著降低。

惡性腫瘤的發生發展與細胞凋亡過程失調密切相關。Survivin是凋亡抑制蛋白家族(IAP)的重要成員，是目前已知最強的凋亡抑制因子，也是腫瘤標志物方面研究的熱點。Survivin在正常成熟組織中不表達，在乳腺癌、大腸癌、肺癌等多種惡性腫瘤中異常高表達，發揮抗凋亡和促進腫瘤細胞增殖的作用［2］。劉鋼等［4］采用免疫組化法檢測不同人群組織 Survivin蛋白的表達情況，研究發現甲狀腺癌組織Survivin表達水平顯著高于甲狀腺腺瘤及癌旁正常組織，呈過表達狀態。趙海寶［5］同樣發現Survivin在甲狀腺乳頭狀癌組織中表達增高，且其高表達與病理分期和淋巴結轉移狀況有關。本實驗結果顯示，甲狀腺乳頭狀癌組織Survivin的陽性表達率為70.0%，顯著高于甲狀腺腺瘤組織和正常甲狀腺組織，且其表達與甲狀腺乳頭狀癌臨床分期和淋巴結轉移密切相關，提示Survivin表達與疾病進展、轉移及預后有關，與上述文獻［5］報道一致。目前研究認為Survivin抗凋亡的主要機制是阻斷了caspase-3和caspase-7的激活，后二者是細胞凋亡途徑的關鍵激酶，Survivin與之結合后直接造成激酶的失活，從而使凋亡進程受抑［6，7］。

本研究結果顯示，Notch-1和Survivin與腫瘤臨床分期和淋巴結轉移密切相關，且二者表達呈顯著負相關(r=－0.512，P＜0.01)，提示Notch-1和Survivin共同參與了腫瘤的侵襲轉移過程。最新研究顯示，Notch-1信號通過抑制核轉錄因子NF-κB的活化調控一些下游基因的表達，從而抑制細胞增殖和促進凋亡進程［8］。由于Survivin基因的轉錄和表達依賴于NF-κB的活化，因此有可能Notch-1信號對Survivin基因的表達存在負向調控。這與我們的實驗結果一致:即甲狀腺乳頭狀癌組織中Notch-1基因低表達和 Survivin基因高表達，但腫瘤細胞內Notch-1和Survivin基因之間的具體調控機制尚有待深入研究。

1 Leong KG，Karsan A.Recent insights into the role of Notch signaling in tumorigenesis.Blood，2006，107:2223-2233.

2 孟予城，陳洪杰，楊樹森，等.Survivin、XIAP在甲狀腺乳頭狀癌組織中表達的研究.河北醫藥，2011，33:661-663.

3 楊晶金，姚軍，沈峰清，等.Notch信號通路與甲狀腺乳頭狀癌的關系.中國細胞生物學學報，2012，34:120-126.

4 劉鋼，史火喜，袁又能，等.凋亡抑制基因Survivin在甲狀腺癌組織中的表達及意義.中華臨床醫師雜志，2011，5:840-843.

5 趙海寶.Cyclin和Survivin蛋白凋亡抑制基因Survivin在甲狀腺癌組織中的表達及意義.山西醫科大學學報，2011，42:989-992.

6 Ulukus EC，Kargi HA，Sis B，et al.expressionin non-small-cell lung carcinomas:correlation with apoptosis and other apoptosis-related proteins，clinicopathologic prognostic factors and prognosis.Appl Immunohistochem Mol Morpho，2007，15:31-37.

7 Xu JH，Wang AX，Huang HZ，et al.Survivin shRNA induces caspase-3-dependent apoptosis and enhances cisplatin sensitivity in squamous cell carcinoma of the tongue.Oncol Res，2010，18:377-385.

8 金曉燕，梁勇，陳佳玉，等.Notch在甲狀腺乳頭狀癌中的表達及意義關系.中國衛生檢驗雜志，2011，21:1-3.