五味子多糖質量濃度測定及生物活性研究

王 瑤,張彥飛,貢濟宇

(長春中醫藥大學藥學院,長春130117)

五味子為木蘭科植物五味子Schisandra chinensis(Turcz.)Baill.的干燥成熟果實[1]。具有斂肺滋腎、生津斂汗、寧心安神之功。現代研究認為具有保肝、增強免疫、抗衰老等作用[2-5]。本文就五味子多糖含量及生物活性進行研究。報告如下。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 試驗材料與試劑 五味子藥材(購于吉林大藥房),乙醇、硫酸亞鐵銨、水楊酸、過氧化氫(北京化工廠);抗壞血酸(湖北恒碩醫藥有限公司),均為分析純。

1.1.2 主要設備 紫外-可見分光光度計TU1810(北京普析通用儀器有限責任公司);電子分析天平AB135-S(梅特勒-托利多儀器上海有限公司);恒溫水浴鍋HH-S數顯(鄭州佳創儀器設備有限公司)。

1.2 實驗方法

1.2.1 五味子多糖的提取 將五味子藥材粉碎過40目篩,稱100.0g,加入 6倍量的蒸餾水,煎煮2次,每次4h,合并液體,過濾2次,將液體醇沉12 h后離心得沉淀分別用無水乙醇、丙酮、乙醚洗脫即得多糖[2-3]。

1.2.2 方法學考察

1.2.2.1 供試品溶液的配制 精密稱取樣品10.06 mg,置50 mL容量瓶中溶解并定容至刻度。即得濃度0.20 mg/mL的溶液。

1.2.2.2 標準品溶液的配制 精密稱取干燥至恒重的葡萄糖6.32 mg,蒸餾水溶解于100 mL容量瓶中,稀釋至刻度,搖勻,即得濃度為0.063 2 mg/mL的葡萄糖。

5%苯酚溶液：稱取苯酚5 g,用100 mL蒸餾水,超聲溶解,待用。

1.2.2.3 標準曲線的繪制 精密吸取標準液0、0.4、0.6、0.8、1.2、1.4、1.8 mL 分別置于具塞管中,各補水至2 mL。再加5%苯酚液1.0 mL搖勻,滴加濃硫酸6.5 mL,混勻后置沸水浴加熱30 min,冰水浴15 min,另以蒸餾水1.0 mL,同上操作做空白對照,于紫外486 nm處測定吸收度(Abs)。以標準品(μ g)為橫坐標,Abs為縱坐標,得回歸方程C=0.006 4 X+0.005 8,r=0.999 0。說明標準品量在 0～130 μ g范圍內,與Abs呈良好的線性關系。

1.2.2.4 精密度測定 取0.20 mg/mL的樣品溶液1.0 mL,按“標準曲線的繪制”項下測定Abs值,測定6次,樣品溶液Abs平均值約為0.123,RSD為0.18%,表明此方法精密度良好。

1.2.2.5 重現性測定 精密量取0.20 mg/mL樣品溶液1.0 mL 3分,分別按“標準曲線的繪制”項下測定Abs,重復測定3次。平行測定的3分樣品溶液,其測定結果所得RSD為0.69%,在實際要求的范圍內,重現性較好。

1.2.2.6 穩定性測定 取“重現性項下”3分供試品分別于顯色后 0、5、15、30、60、120 min 測定 Abs,樣品溶液在120 min內的測定結果RSD為0.69%,表明樣品在120 min內具有良好的穩定性。

1.2.2.7 加樣回收率測定 取已知質量濃度的供試樣品分別添加標準品,按上述測定條件測定,計算回收率。參考加樣回收試驗法,精密量取0.20 mg/mL樣品溶1 mL,按加樣比例精密加入葡萄糖標準品溶液,制備低、中、高劑量組,每組平行3分,按“1.2.2.3標準曲線的繪制”項下測定Abs,計算回收率和RSD值,考察方法的準確性與可行性。平均回收率為99.99%,RSD為1.76%,表明此方法具有較好的回收率。

1.2.3 質量濃度測定 稱取上述處理好的樣品溶液1.0 mL于10 mL具塞試管中加蒸餾水至2.0 mL,5%苯酚1.0 mL,加濃硫酸6.5 mL,混勻后置沸水浴加熱30 min,冰水浴15 min,486 nm進行測定。測定其Abs值0.124,用標準曲線得濃度為0.006 6 mg/mL,即多糖為13.3%。

1.3 測定方法 在10 mL具塞試管中,依次精密加入7.5 μ mol/L 硫酸亞鐵銨溶液1 mL 、7.5 μ mol/L 水楊酸溶液 1 mL、樣品溶液 1 mL,充分混勻,再加入0.01%過氧化氫溶液0.15 mL,混勻,37℃恒溫水浴作用30 min后,終止反應,于510 nm波長處測定吸光度,蒸餾水為陰性對照,平行測定3次[4]。清除率公式為：清除率(%)=[1-(Ai-Aj)/A0]×100%

1.4 實驗結果 五味子多糖對清除羥基自由基活性的清除作用,在試驗濃度范圍內五味子多糖對清除羥基自由基活性的清除能力隨濃度的增加而逐漸增強。

2 小結

本試驗通過體外實驗證明了五味子多糖具有抗氧化活性,為臨床應用提供了一定的理論基礎,但生物體內多糖的抗氧化作用途徑更為復雜,還有待作進一步的研究。

[1]國家藥典委員會.中華人民共和國藥典[M].北京：中國醫藥科學技術出版社,2010：61.

[2]王茹,張琰,程建峰.五味子活性成分提取工藝的優選[J].華南國防醫學雜志,2005,19(6)：4-6,47.

[3]李艷艷,張秀榮.北五味子有效成分提取分離方法的研究進展[J].吉林醫藥學院學報,2008,29(4)：230-232.

[4]孫瑾,王宗舉,陳崗,等.橄欖中多酚類物質體外抗氧化活性研究[J].中國食品添加劑,2010(3)：69-73.