核酸檢測標本運輸模式的探討

徐 忠，邱穎婕，章 懌，章舜瑋，周筱嫣（上海市血液中心 200051）

為有效地縮短病毒特異性抗原和抗體免疫測定的“窗口期”，從而減少輸血風險，提高輸血安全性，2010年衛生部在全國部署了血站核酸檢測的試點工作。依據衛生部下發的《血站核酸檢測試點實驗室技術指導意見》，核酸標本的運輸溫度要求為2～8℃，高于現行的血液運輸要求（2～10℃），這就意味著血站對于標本運輸的冷鏈控制需投入更大的人力、物力。本中心為適應核酸檢測的需求，自行研發了符合核酸標本運輸要求的標本運輸箱，現報道如下。

1 材料與方法

1.1 標本運輸箱 內外殼使用蓋塑板，中間使用高強度發泡塑料填充。有大小兩種規格。

1.1.1 規格一 外形尺寸53cm×33cm×23cm（放置2個試管架，可放200根標本管），下文簡稱為小箱。

1.1.2 規格二 外形尺寸53cm×33cm×37cm（放置4個試管架，可放400根標本管），下文簡稱為大箱。

1.2 保溫劑 為耦氮二甲酰胺（AC）高分子材料與純凈水復合而成，外部使用多元醇磷酸酯（PAPE）材料包裹，安全無毒性。規格為每袋250g，尺寸為12cm×18cm×2.5cm。該保溫劑存放于－20℃～－10℃冷凍箱內冰凍12h以上，待其完全凍結，即可使用。

1.3 溫度計 Microlog EC600溫度監測儀（上海錦諾），溫度檢測范圍－30℃～50℃。EX500－B－04R數字溫度計（上海自動化儀表公司），溫度檢測范圍－100℃～300℃。EC600溫度監測儀在使用前，用經計量合格的EX500－B－04R數字溫度計進行校準。使用時，設定該溫度計1min自動記錄一次溫度，待檢測完成后，在電腦中通過配套軟件讀取溫度數據。

1.4 孵育箱 MIR－254（三洋公司）溫度控制范圍－10℃～60℃。

1.5 標本運輸模式

1.5.1 獻血屋標本運輸模式 獻血屋的標本需派專車至各個點接取。考慮到保溫劑需放在冷凍箱中保存，而各個獻血屋通常只有冷藏冰箱，無法保存保溫劑。故到各個獻血屋接取標本時，需同時帶上保溫劑外出。即先在運輸箱中放入保溫劑，過一段時間后，再放入標本。在驗證標本運輸箱保溫性能時，盡量模擬實際的運輸情況。在大箱中放入12塊保溫劑，在小箱中放入8塊保溫劑，將上述兩個標本運輸箱在25℃～30℃環境中放置2h后，再放入裝滿標本的試管架，為防止保溫劑上的冷凝水對標本上的標簽造成影響，在試管架外包裹塑料袋。大箱在箱體的長壁各擺放2塊保溫劑，在短壁各擺放1塊保溫劑，在試管架上方擺放6塊保溫劑，共12塊保溫劑。小箱在箱體內壁的四周各擺放1塊保溫劑，在試管架上方擺放4塊保溫劑，共8塊保溫劑。

1.5.2 標本長途運輸模式 即在運輸箱中同時放入保溫劑和標本。裝滿標本的試管架外包裹塑料袋后，放入標本運輸箱。大箱在箱體的長壁各擺放2塊保溫劑，在短壁各擺放1塊保溫劑，在試管架上方擺放6塊保溫劑，共12塊保溫劑。小箱在箱體內壁的四周各擺放1塊保溫劑，在試管架上方擺放4塊保溫劑，共8塊保溫劑。

1.6 保溫性能驗證 將標本運輸箱置于溫度為43℃的三洋孵育箱中，標本運輸箱內的溫度要求保持在2℃～8℃，觀察其保溫時間。同一規格的標本運輸箱，每種運輸模式各驗證3次。在3次運輸溫度驗證后，對置于標本運輸箱中的標本，進行外觀目視檢查。

2 結 果

2.1 獻血屋標本運輸模式 獻血屋標本運輸模式結果見圖1。小箱內部溫度波動范圍為3.75℃～5.75℃。說明在獻血屋標本運輸模式中，可以保持3h的運輸時間，能滿足使用需求。2.2 標本長途運輸模式 標本長途運輸模式結果見圖2。

圖1 獻血屋標本運輸模式驗證結果

圖2 標本長途運輸模式驗證結果

3次驗證結果表明，在本運輸模式中，標本運輸箱在43℃環境中放置3h，大箱內部溫度波動范圍為5.50℃～6.67℃，

3次驗證結果表明，在本運輸模式中，標本運輸箱在43℃環境中放置6h，大箱內部溫度波動范圍為4.0℃～7.75℃，小箱內部溫度波動范圍為4.75℃～7.75℃。說明在標本長途運輸模式中，可以保持6h的運輸時間，能滿足使用需求。

2.3 標本外觀檢查 經肉眼觀察，存放于標本運輸箱中的核酸檢測標本經多次驗證后，上清液無溶血等異常現象。

3 討 論

實踐證明，使用核酸篩查血液能分別將丙型肝炎病毒抗體和人類免疫缺陷病毒抗體的“窗口期”縮短70%和50%，能進一步降低輸血傳播傳染性疾病的風險［1］。1999年，日本率先對臨床血液進行核酸篩查，目前已有歐美、澳大利亞、加拿大等多個國家開展常規的血液核酸篩查。今年在全國各大血站試點進行的核酸檢測，正反映了我國對輸血安全性的重視，在全國范圍內開展核酸檢測，是將來的發展趨勢。

近幾年，隨著檢驗技術的發展，國內檢驗界已經越來越意識到檢驗前控制，即標本質量控制的重要性［2］。而在核酸檢測中，標本的采集、運輸和保存對檢驗結果往往有決定性的影響［3］。這是由于核酸檢測對象的特殊性，即檢測的靶核酸DNA、RNA極易降解。有研究表明，標本在室溫放置一段時間后，病毒的檢出率較存放于4℃環境中的同濃度標本，有一定比例的下降。對核酸檢測影響最大的是標本溶血產生的RNase、DNase等酶類，可直接降解標本中的病毒顆粒和從病毒顆粒中釋放出的核酸［4］。所以保障核酸檢測的質量，首先要保障核酸標本的質量。

本文著重討論核酸標本運輸過程中的冷鏈控制，提供一種簡便易行且成本低廉的標本運輸模式，為核酸檢測順利開展提供保障。本中心自行研制的標本運輸箱，在外界環境為43℃的惡劣環境中，能確保運輸箱內溫度3～6h，滿足不同標本運輸模式的要求。標本運輸箱的箱體內外均采用蓋塑板包裹，防水、防潮，且便于日常的清潔和消毒。同時考慮到箱體的搬運問題，每個標本運輸箱外均配有專用的帆布袋，易于運輸途中的拎取。該標本運輸箱與目前市面上保溫箱相比，保溫性能相接近，但自重僅1.6kg和2kg，而同樣容量的保溫箱自重達到5～6kg，使用該標本運輸箱大大減輕了工作人員的日常負擔。

但從實驗數據也可以看出，如事先把保溫劑置于室溫中一段時間后，標本運輸箱的保溫時間會縮短一半（3h）。提示在日常的使用中，特別需注意保溫劑的保存和使用，以保證在運輸的全過程中標本運輸箱內的溫度能符合要求，以確保核酸檢測的質量。

［1］ 王迅.采供血機構開展血液血液病毒核酸檢測的條件及意義［J］.中國輸血雜志，2008，21（11）：825－826.

［2］ 鄭春蘇.血液標本檢驗前的質量控制［J］.檢驗醫學與臨床，2009，6（18）：1589.

［3］ 李金明.實時熒光PCR技術［M］.北京：人民軍醫出版社，2007：63.

［4］ 王德文.現行常規采血流程對HIV RNA篩查的影響評估［J］.中國熱帶醫學，2007，7（11）：2100－2101.