復方西他列汀二甲雙胍緩釋片中主要組分的含量測定

遲云峰，張明晶

磷酸西他列汀（sitagliptin phosphate）是用于治療2型糖尿病的二肽基肽酶-4（DPP-4）抑制劑[1]。二甲雙胍能抑制腸道對葡萄糖的吸收，抑制肝細胞的糖原異生，改善機體對胰島素的敏感性。兩類藥物作用機制不同，具有協同作用，臨床上將磷酸西他列汀與二甲雙胍聯合應用，增強降糖效果，改善對2型糖尿病患者血糖的控制，并減少不良反應的發生。2007￣03美國食品藥品監督管理局（FDA）批準默克公司的復方西他列汀二甲雙胍緩釋片上市，商品名為“JANUMET XR”。臨床研究表明，西他列汀和二甲雙胍合用[2]，能明顯降低具有臨床意義的糖基化血紅蛋白（HbA1c）水平。國內還沒有復方西他列汀二甲雙胍制劑上市。本文建立了反向高效液相色譜法測定復方西他列汀二甲雙胍緩釋片中磷酸西他列汀的含量，用高效液相色譜法法測定鹽酸二甲雙胍的含量，兩種成分測定互不干擾，操作簡便，結果準確，可有效控制產品質量。

1 儀器和試劑

濕法混合制粒機；PP40型全自動壓片機；ZES－8G型智能溶出試驗儀；Waters 515高效液相色譜儀和紫外可見分光檢測器；電子分析天平；UV-254型可見分光光度計。磷酸西他列??；鹽酸二甲雙胍。

2 方法與結果

2.1 磷酸西他列汀的含量測定 采用反相高效液相色譜法測定。

2.1.1 溶液制備

2.1.1.1 對照溶液 精密稱取磷酸西他列汀對照品50 mg，加流動相溶解，并定容至50 ml量瓶中，制成濃度為1000 μg/ml的磷酸西他列汀對照品溶液。

2.1.1.2 供試品溶液 取本品10片，研細，精密稱取適量（約相當于磷酸西他列汀50 mg），置于50 ml量瓶中，加流動相充分溶解并稀釋至刻度，搖勻即得。

2.1.2 色譜條件和系統適用性 色譜柱：Symmetry C18柱（150 mm×4.6 mm，5 μm）；流動相為甲醇-0.1%高氯酸水溶液（32∶68），流速 1.0 ml/min，檢測波長 268 nm，柱溫 30℃。 取供試品溶液10 μl，注入液相色譜儀，按外標法以峰面積計算磷酸西他列汀的含量。理論塔板數按磷酸西他列汀計算不低于6000。

2.1.3 線性關系考察 分別精密量取磷酸西他列汀對照品溶液適量，制得濃度分別為 1、2、5、10、20、50、100、200 μg/ml的標準曲線溶液。依法測定，結果磷酸西他列汀濃度在1～200 μg/ml，呈良好的線性關系（r=0.9999）。

2.1.4 回收率試驗 稱取磷酸西他列汀對照品溶液適量，加入處方量的空白輔料，分別配成80%、100%、120%3種不同濃度的供試品溶液各3份，依法測定，3種供試品的平均回收率分別為 99.3%、99.5%、99.1%；RSD值分別為 0.35%、0.30%、0.16%。

2.1.5 精密度試驗 取磷酸西他列汀對照品溶液適量，連續進樣6次，測得其峰面積，結果RSD=0.33%。

2.1.6 重復性試驗 重復取樣6份，精密稱定，按“2.1.1.2”項下方法操作，結果RSD為1.1%（n=6），方法的重復性良好。

2.1.7 穩定性試驗 取供試品溶液分別在0、1、4、8、12、24 h進樣，結果RSD為0.98%，表明供試品溶液在室溫下24 h內穩定。

2.1.8 樣品含量測定 取本品3批，批號110920、110921、110922，磷酸西他列汀含量分別為99.73、101.23、99.48%。

2.2 鹽酸二甲雙胍的含量測定

2.2.1 色譜條件 色譜柱：Diamonsil C18（250 mm×4.6 mm，5 μm）流動相為 0.01 mol/L磷酸二氫鉀緩沖液含0.015 mol/L 高氯酸（pH3.0）∶甲醇=9∶1；流速 1.0 ml/min；檢測波長為233 nm。 進樣量 20 μl。

2.2.2 波長的選擇 精密稱取鹽酸二甲雙胍對照品50 mg，置100 ml量瓶中，用2%甲醇溶解稀釋至刻度，搖勻；精密量取上述溶液1 ml置100 ml量瓶中，用2%甲醇稀釋至刻度，搖勻，在200～800 nm范圍內，結果在233 nm 波長處有最大吸收。

2.2.3 標準曲線 精密稱取干燥至恒重鹽酸二甲雙胍對照品約50 mg，置于50 ml容量瓶中，加2%甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，配成1.0 mg/ml的對照品儲備液。分別精密吸取儲備液 0.5、1、2、4、8、16ml置于 50ml容量瓶中， 加 2%甲醇稀釋至刻度，充分搖勻，配成 10、20、40、80、160、320 μg/ml的標準溶液。依法測定。結果在10～320 μg/ml鹽酸二甲雙胍呈良好的線性關系（r=0.9999）。

2.2.4 穩定性試驗 取供試品溶液，分別在室溫放置2、4、6、8、10 h后測定其峰面積，結果供試品溶液在10 h內穩定，RSD為0.43%。

2.2.5 回收率試驗 稱取已知含量的鹽酸二甲雙胍供試品適量 （約相當于鹽酸二甲雙胍50 mg)，置于50 ml容量瓶中，分別精密加入對照品儲備液適量（相當于鹽酸二甲雙胍40、50、60 mg），加 2%甲醇適量，超聲 20 min 使溶解，定容，離心3000 r/min，5 min過濾，取續濾液1 ml置于10 ml量瓶中，加水稀釋至刻度，依法測定，結果平均加樣回收率為（99.6±0.6）%，RSD 為 0.85%。

2.2.6 樣品含量測定 取本品20片，研細，精密稱取適量（約相當于鹽酸二甲雙胍500 mg），置50 ml量瓶中，加甲醇適量，超聲20 min使溶解，定容，離心3000 r/min離心5 min過濾，吸取續濾液1 ml置于50 ml容量瓶中，加水釋至刻度，吸取20 μl進樣，計算鹽酸二甲雙胍的含量。結果3種批號的鹽酸二甲雙胍含量分別為99.54、98.45、100.45%。

3 結 論

本文建立了利用HPLC測定復方西他列汀二甲雙胍緩釋片中磷酸西他列汀和鹽酸二甲雙胍含量的方法，方法學研究結果表明利用該法測定磷酸西他列汀和鹽酸二甲雙胍保留時間穩定，測定結果準確，方法精密度高，重現性好，回收率符合要求，是一種可靠的含量測定方法。適用于復方西他列汀二甲雙胍緩釋片質量控制的檢測方法。

[1]Green BD，Flatt PR，Bailey CJ.Dipeptidyl peptidase IV(DPP IV)inhibitors:A newly emerging drug class for the treatment of type 2 diabetes[J].Diab Vasc Dis Res，2006，3(3):159.

[2]Raz I，Chen Y，Wu M，et al.Efficacy and safety of sitagliptin added to ongoing metformin in therapy in patients with type 2 diabetes[J].Curr Med Res Opin，2008，24(2):537.