豬圓環病毒2型的診斷與防控技術

何啟蓋

（華中農業大學動物醫學院，湖北武漢 430070）

一、圓環病毒感染的致病原因

（一）單獨感染的致病性 PCV2感染后主要引起免疫抑制。這可以從幾個方面來概括。（1）病毒能夠感染機體樹突狀細胞和肺泡巨噬細胞（抗原遞呈細胞），在免疫反應中起到“搬運工”的作用，雖然PCV2不能在其中復制，但是我們可以相信，感染后其抗原遞呈功能下降，進而影響免疫細胞獲得抗原刺激。（2）使細胞免疫下降，主要通過降低細胞因子如白細胞介素(IL)和干擾素基因的轉錄；同時破壞T細胞，導致細胞免疫反應的下降。（3）破壞B淋巴細胞，降低體液免疫反應，影響抗體產生，這是一些豬場免疫豬繁殖與呼吸綜合征活疫苗或豬瘟活疫苗后，免疫效果不好的重要原因。

豬圓環病毒病包含幾種不同的臨床表現，如斷奶衰竭綜合癥、先天性震顫、母豬繁殖障礙等，這應該是圓環病毒感染不同組織所致。究其原因，是否與病毒對不同組織的嗜性有關，還是與不同生長階段中與宿主相互作用的結果。皮炎與腎病綜合癥從本質上是一種過敏反應抑或是抗原抗體復合物沉積后，引起的炎癥反應。

我們在臨床上發現，豬圓環病毒2型引起的病理變化主要是水腫，如間質性肺炎、淋巴結水腫、腸系膜水腫、心臟冠狀溝的膠凍樣水腫等，因此，炎癥過程中體液或組織液的滲出，是宿主感染本病毒后的重要發病機理和發生發展規律。在對癥治療上，利用利尿脫水藥物，促進水腫液的回流，有助于縮短疾病康復所需的時間。

（二）混合感染的致病性 免疫抑制疾病的本質是為其他病原的繼發感染創造條件，這也是近幾年來我國豬病癥狀不典型或復雜性增加的原因所在。當然，免疫抑制并非全部由圓環病毒引起，但卻是一個重要因素。

1.降低豬瘟疫苗的免疫效力。臺灣學者先用l05.3TCID50豬圓環病毒2型同時通過鼻內接種和肌肉接種感染剖腹產和不吃母豬乳汁的仔豬，12 d后免疫豬瘟疫苗，27 d后攻毒，45 d后剖殺試驗豬。發現PCV2感染豬攻毒后出現發熱、病毒血癥并從唾液和糞便中排出豬瘟病毒，豬瘟中和抗體水平、IgM以及一些淋巴細胞亞類在數量上明顯低于免疫前未感染PCV2的豬。體外實驗中PCV2感染外周血單核細胞后，豬瘟特異性淋巴細胞增生反應降低，而這種抑制反應在活病毒還是紫外線滅活的豬圓環病毒處理的外周血細胞中，結果是一致的，提示圓環病毒粒子的結構蛋白（Cap蛋白）是引起這種效應的原因。這些結果表明，豬瘟免疫前感染了豬圓環病毒，將降低豬瘟疫苗的免疫效果。

2.與豬繁殖與呼吸綜合征病毒感染互相交織。研究發現，與未感染圓環病毒組相比，事先感染豬圓環病毒，然后免疫豬藍耳病活疫苗，隨后攻毒，其病變程度和臨床保護程度最低，該組的藍耳病疫苗抗體也最低，因此，作者認為，我國不同豬場圓環病毒的感染率高低及嚴重程度不同，是造成豬繁殖與呼吸綜合征活疫苗在不同豬場之間效果差異的原因之一。另一方面，豬繁殖與呼吸綜合征病毒感染后，增加豬圓環病毒在感染豬體內不同組織的分布更加廣泛，滴度更高。

3.影響豬偽狂犬病毒的免疫應答。Kekarainen(2008)發現，PCV2通過病毒自身組分或IL-10因子等途徑調節偽狂犬病的免疫。體外實驗表明，PCV2感染單核細胞后誘導IL-10分泌，進而有效抑制外周血單核細胞產生IL-12；用紫外線滅活的偽狂犬病毒刺激來自偽狂犬病疫苗免疫豬的外周單核細胞，隨后用PCV2感染，這些細胞產生α和β干擾素的能力也被抑制。這證明圓環病毒感染影響了豬對偽狂犬病疫苗的記憶免疫應答，這種作用只需要有PCV2核酸存在即可誘導，無需感染病毒。

4.增加細菌病繼發的幾率，尤其是副豬嗜血桿菌病或鏈球菌病。圓環病毒感染破壞機體巨噬細胞，降低了吞噬和清除外來病原的能力。副豬嗜血桿菌是豬上呼吸道中常在的細菌之一，當機體抵抗力下降時，副豬嗜血桿菌會乘虛而入。同時，我們在完成圓環病毒與副豬嗜血桿菌5型混合感染的動物試驗，分析了這兩種病原的關系，發現副豬嗜血桿菌促進了圓環病毒2型的增殖。這就導致了這兩種微生物之間在動物體內互相協作的循環。這個結果進一步得到驗證，即標準的脂多糖(LPS)能促進豬圓環病毒2型在PK-15細胞中的增殖滴度。而脂多糖是革蘭氏陰性細菌中主要結構成分，也是革蘭氏陽性菌細胞壁中的重要成分，可以推論，革蘭氏陰性菌或大量革蘭氏陽性菌的感染，由于LPS的刺激作用，豬體內已經感染的豬圓環病毒2型的增殖將得到促進，增加圓環病毒病發生的可能。

二、臨床癥狀

圓環病毒病是豬圓環病毒2型感染所引起的一系列疾病的總稱，也稱為圓環病毒相關疾?。≒CVAD）。但是，不同日齡豬所發生的疾病（或臨床類型）有所不同，在臨床診斷時需加以注意。

（一）先天性震顫 仔豬出生后，全身肌肉震顫，尤其是頭部震顫，嚴重時不能正常吃乳。除此之外，無其他臨床表現。如果輔助病豬能夠吃到足夠的乳汁，就能夠逐漸康復，同窩母豬也無可見癥狀。腦組織也無特征性病變，僅利用免疫組化技術發現病毒陽性信號。

（二）斷奶仔豬衰竭綜合癥 這是目前臨床上較為常見、也是造成經濟損失最大的的圓環病毒相關疾病，但其控制技術也較為成熟。主要發生在斷奶仔豬或保育豬。病豬主要表現被毛粗亂，皮膚蒼白，發熱，消瘦，呼吸困難，腹股溝淋巴結腫大等臨床表現。病程長并可見皮膚黃疸。同時，可發現豬群中，病豬與臨床健康豬相比生長明顯緩慢，嚴重時候，保育期結束時豬的體重還相差20%左右，豬群整齊度差。

病理變化肺間質增寬、水腫，腹股溝和腸系膜淋巴結腫大、水腫，少數病例在心臟冠狀溝和腸系膜水腫，脾臟腫大或邊緣梗死。當出現腸系膜水腫時，要與大腸桿菌引起的仔豬水腫病相區分。這兩個疾病雖然都發生于斷奶豬，其區別點主要是：水腫病主要見于膘情最好豬、突然出現神經癥狀、死亡快，而本病主要是見于消瘦豬，有呼吸道癥狀和衰竭死亡等。

（三）皮炎與腎病綜合癥 本病主要發生于保育階段結束進入生長階段的豬群，主要表現在臀部或后肢皮膚出現近乎圓形的紫色丘疹，與周圍健康皮膚界限清晰。病理變化是壞死性脈管炎。豬采食與精神狀況正常，如無繼發感染，幾乎沒有死亡的病例。但是，本病如與支原體肺炎并發，會增加支原體肺炎控制的難度。

本病需要與滲出性皮炎（油膩狀皮膚、被毛粘連，葡萄球菌引起）、壞死性皮炎（皮膚化膿、潰瘍、壞死桿菌引起）和鋅缺乏癥（皮膚出現裂痕，多見于耳部）相區分。病理變化主要是腎臟腫大，皮質出現密集的白色壞死灶，使腎臟外觀呈現花斑狀。在少數情況下，妊娠舍或分娩舍母豬可出現皮膚圓環斑。

（四）繁殖障礙 母豬未見明顯的臨床表現，在不同妊娠階段發生流產、產死胎等。流產和死胎呈現肝充血和心臟肥大、心肌變色。病埋變化是纖維素性或壞死性心肌炎。從流產胎兒中檢出豬圓環病毒2型，即可以作出判斷。

（五）肺炎 病豬表現呼吸困難，肺臟主要見點狀出血。在日益嚴重的呼吸道疾病綜合征（PRDC）中，豬圓環病毒2型與肺炎支原體、藍耳病毒、流感病毒、胸膜肺炎放線桿菌等，組成了PRDC的主要病原。

（六）腸炎 我們在發生腹瀉的仔豬腸道黏膜中，用免疫組化技術發現了病毒信號，用PCR方法從病豬糞便中檢測出病毒。文獻報道，病變主要是肉芽腫腸炎。因此，在當前仔豬腹瀉中，要注意鑒別是否由豬圓環病毒2型引起。

三、診斷方法

（一）現場診斷 調查發病日齡、出現癥狀的信息與觀察特征性病理變化，再結合實驗室的病原學檢測，可以作出準確的診斷。如果只根據實驗室PCR定性檢測就作出診斷，可能由于病毒感染率較高而導致誤診。

（二）實驗室診斷 血清學技術包含以PCV2感染細胞為抗原的單層過氧化物酶試驗或免疫熒光試驗、以Cap蛋白為抗原的ELISA等，均可檢測抗體。但是，隨著疫苗使用范圍不斷增加，抗體陽性不能作為感染的依據。國內使用ELISA檢測免疫抗體，中和試驗作為疫苗效果的檢測，較為可靠，而作為臨床上免疫效果的評價手段尚未取得一致意見，因為圓環病毒病的發生除了與疫苗抗體外，還與其它病原的協同作用有關。目前，區分滅活疫苗免疫動物與自然感染動物的血清學鑒別診斷方法尚未成功。

病原檢測技術方面，較為常用的是PCR方法，擴增Cap蛋白基因或全基因組，該法可用于PCV2不同基因型毒株的鑒別檢測。采集樣品主要是肺臟和淋巴結較為可靠，但對于活體檢測，可以采集發熱期的抗凝血或血清。公豬精液的帶毒狀況也能夠使用PCR監測。定量PCR用于實驗室研究。免疫組化技術能用于檢測組織中病原，但不作為常規診斷方法，該技術中需要純度和親和力高的單克隆抗體，病毒分離技術由于細胞不產生可見病變，加上不同病毒對細胞的適應性不同，分離的周期較長，因而不作為常用的方法。

四、預防控制措施

（一）采用合理的免疫程序 豬圓環病毒疫苗的免疫程序大體可以分為兩類，即母豬免疫和仔豬免疫。前者工作量低，節省勞力，后者勞動量大。母豬免疫是以法國梅里亞公司疫苗為代表，其他的產品說明書均是免疫仔豬。免疫母豬能夠為后代提供早期母源抗體保護，保護效果取決于母源抗體的水平高低，同時必須保證不同仔豬能夠獲得均衡的乳汁，避免由于吮乳的差異造成不同豬只之間的被動免疫差異，建議測定同窩中不同仔豬的豬圓環病毒疫苗抗體，分析群體整齊度，即可判斷。此外，母豬如果出現由于圓環病毒病所致的流產和死胎，那么免疫母豬就成為首選。已有資料表明(Madson DM，2009；GerberPF，2011)，母豬免疫后攻毒，母乳仍可檢出病毒核酸，胎兒可檢測到PCV2，但是組織沒有出現顯微鏡下病變；不過，與非免疫母豬相比，其病毒拷貝數明顯下降。

仔豬免疫則可以保證每個豬只獲得等量的免疫劑量，最大限度保障免疫的群體均勻度。仔豬免疫時間一般要求在3～4周齡，但在實際生產中也有在14日齡就免疫的。無論仔豬在哪個日齡開始免疫，其免疫時間原則上要求在發生病毒感染之前免疫，以保證仔豬在感染前產生足夠的保護力，疫苗一般在免疫后3～4周產生保護力。因此，免疫時間并非一成不變。至于單次免疫還是兩次免疫，必須遵照疫苗使用說明書的要求實施。在臨床上發現，有的豬場出于降低費用的考慮，通過減少劑量即仔豬只免疫0.5頭份，認為效果尚可，但由于圓環病毒的特點，疫苗效果好壞不是短期內能直接反映出來的，但是需要謹慎評估。

（二）配套控制措施

1.控制繼發感染。主要是控制副豬嗜血桿菌病和豬鏈球菌病，這是減少本病造成更大損失的措施，又是降低豬圓環病毒2型在體內增殖滴度增加的手段。另外，值得提醒的是，控制豬肺炎支原體也是減輕豬圓環病毒病嚴重性的關鍵。對此，各個豬場可以根據情況，分別同時使用豬圓環病毒疫苗與符合本地流行血清型的血清型副豬嗜血桿菌疫苗、豬鏈球菌病疫苗或豬肺炎支原體疫苗同時使用（分兩側注射），能收到一定效果。對于正在發生副豬嗜血桿菌病或鏈球菌病的豬群，應當先使用敏感藥物，如替米考星、阿莫西林與克拉維酸鉀混合制劑等，控制病情，不能在發病時注射疫苗。對下一批豬則考慮疫苗預防。

2.減少應激因素。免疫刺激是誘發豬圓環病毒病的常見誘因之一。在單獨感染豬圓環病毒2型的試驗中，給感染豬注射鑰孔血藍素，能夠促進圓環病毒病臨床癥狀的出現或增加嚴重性。同時，豬繁殖與呼吸綜合征病毒和豬細小病毒感染刺激免疫系統，也可能是引起豬圓環病毒病發生的誘因。另外，有些疫苗佐劑是否是本病的誘因，需要進一步調查。

3.增強機體免疫力。加強飼料原料的控制，減少黃曲霉菌毒素中毒的幾率；營養全面，飼料中添加免疫調節劑如寡糖、黃芪多糖等，并減少過多混群，是控制本病的管理因素之一。

（三）治療措施 嚴格說來，本病無治療措施。但是，對于疾病早期病例（如處于發熱期），使用ELISA效價高的血清，經過熱滅活后，給發病保育豬注射3～5 ml，有一定的療效。對于皮炎與腎病綜合癥的病豬，用過氧乙酸實施體表淋浴，可促進體表丘疹或潰瘍的結痂和脫落，恢復豬只正常的體表皮膚，但是，這類豬建議不作為種豬選留，因為目前對于已感染的豬圓環病毒2型，尚無有效從體內清除的方法。

（本文根據第三屆中國獸醫大會報告整理，未經本人審閱）