固相萃取超高效液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法同時(shí)檢測禽畜糞便中多種抗生素殘留

摘要：建立了固相萃取超高效液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜（SPEUPLC/MS/MS）同時(shí)測定禽畜糞便中6種磺胺類（SAs）、4種四環(huán)素類（TCs）、3種氟喹諾酮類（FQs）、3種大環(huán)內(nèi)酯類（MACs）以及1種硝基呋喃類（NFs）抗生素殘留的方法。樣品分別由McIlvaineNa2EDTA緩沖液和有機(jī)混合提取液逐次超聲提取，合并提取液，以正己烷去脂，過SAXHLB固相萃取系統(tǒng)富集凈化，經(jīng)氮吹、定容后，以乙腈和0.1%甲酸水溶液為流動相進(jìn)行UPLC/MS分離檢測，內(nèi)標(biāo)法定量。在0.1～1000 μg/kg （Dry weight）濃度范圍內(nèi)，所有目標(biāo)物標(biāo)準(zhǔn)曲線R2均大于0.99，樣品加標(biāo)回收率在42.3%～79.6%之間，相對標(biāo)準(zhǔn)偏差為1.4%～5.4%。方法檢出限為0.1～2.0 μg/kg，定量下限為0.3～6.6 μg/kg。應(yīng)用本方法檢測華北地區(qū)多個(gè)禽畜養(yǎng)殖基地糞便樣品32份，所有抗生素均有不同程度的檢出，最高檢出濃度為金霉素125 μg/kg。

關(guān)鍵詞：糞便； 抗生素； 殘留； 固相萃取超高效液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜（SPEUPLC/MS/MS）

1引言

抗生素被廣泛應(yīng)用于畜牧養(yǎng)殖業(yè)中，主要用于治療疾病，促進(jìn)生長。近年來畜牧業(yè)抗生素濫用現(xiàn)象十分嚴(yán)重[1]，進(jìn)入動物體內(nèi)的藥物約有30%～90%以原形或初級代謝產(chǎn)物的形式隨糞便排出體外[2]，相當(dāng)一部分的獸藥抗生素進(jìn)入環(huán)境中，造成環(huán)境抗生素殘留以及耐藥細(xì)菌的傳播擴(kuò)散，最終危害人體健康[3，4]。當(dāng)前，發(fā)展靈敏、可靠的分析技術(shù)是研究抗生素環(huán)境殘留的基礎(chǔ)。高效液相色譜法（HPLC）不僅耗時(shí)，且無法克服較高含量的基質(zhì)干擾效應(yīng)，尤其針對糞便中抗生素的檢測干擾更嚴(yán)重。近年有實(shí)驗(yàn)者采用超聲提取，HPLC測定中國多省份畜禽糞便中抗生素殘留[5]，選擇分類，分別提取檢測多種抗生素的方法，除增加了實(shí)驗(yàn)時(shí)間和強(qiáng)度外，方法定量限高達(dá)23～182 μg/kg。液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜（LCMS）法具有更高的靈敏度和選擇性[6，7]，而超高效液相色譜串聯(lián)多級質(zhì)譜（UPLCMS/MS）具有更高的檢測效率[8，9]。糞便樣品基質(zhì)相當(dāng)復(fù)雜[10]，需建立有效的前處理方法以減少干擾[11]。本研究采用SPEUPLC/MS/MS法提取檢測了糞便中5大類共計(jì)17種抗生素，并進(jìn)行方法優(yōu)化，通過考察提取過程中提取劑種類及pH值對目標(biāo)物分離純化的影響，對儀器條件進(jìn)行了優(yōu)化選擇，建立并完善了復(fù)雜環(huán)境樣品中多種抗生素殘留同時(shí)檢測的方法，為監(jiān)測環(huán)境中抗生素殘留提供技術(shù)保證。

2實(shí)驗(yàn)部分

2.1儀器與試劑

WATERS ACQUITY UPLC 超高效液相色譜，WATERS XEVO TQ串聯(lián)四級桿質(zhì)譜 （美國Waters公司）； ACQUITY UPLC BEH C18色譜柱（100 mm×2.1 mm， 1.7 μm，美國Waters公司）；SAX陰離子交換柱（3 mL/200 mg，美國Thermo公司）；HLB小柱 （6 mL/500 mg，美國Waters公司）；十二孔固相萃取裝置（天津恒奧公司）；TDL5A離心機(jī)（上海安亭公司）；PGC01D氮吹儀（天津艾維歐公司）。

目標(biāo)物磺胺嘧啶（SD）、磺胺甲惡唑（SMX）、磺胺二甲嘧啶（SM2）、磺胺間甲氧嘧啶（SMN）、磺胺氯噠嗪（SCP）、恩諾沙星（ENR）、環(huán)丙沙星（CIP）、氧氟沙星（OFL）、強(qiáng)力霉素（DOXY）、金霉素（CTC）、泰樂菌素（TYL）、呋喃唑酮（FUR）標(biāo)準(zhǔn)品（美國SigmaAldrich公司）；四環(huán)素（TC）、土霉素（OTC）、紅霉素（ERY）、羅紅霉素（ROX）、甲氧芐啶（TMP）購于中國藥品生物制品檢定所。替代物13C3咖啡因（JK百靈威試劑公司），13C6 磺胺嘧啶（劍橋同位素實(shí)驗(yàn)室），洛美沙星（LOMX）及甲氯環(huán)素（MECL）購于SigmaAldrich公司。內(nèi)標(biāo)物西瑪通（Simetone，Accustandards公司）。甲醇、乙腈（色譜純）；檸檬酸、甲酸、丙酮、Na2EDTA、NaH2PO4、HCl、NaOH等均為分析純；超純水經(jīng)MilliQ水凈化系統(tǒng) （Millipore公司）處理。