反相高效液相色譜法測定新咳喘寧合劑中氨茶堿含量

曹 健，王 芳，錢 青，蒲秀英

(中國人民解放軍第三軍醫大學第二臨床醫學院藥學部，重慶 400037)

新咳喘寧合劑是第三軍醫大學新橋醫院的非標準制劑(成制字2006F09026號)，其主要成分為氨茶堿、鹽酸異丙嗪、氯化銨、復方樟腦酊等，主要適應證為止咳、祛痰、平喘，適用于急、慢性氣管炎、老年性支氣管哮喘等。采用紫外法測定制劑中氨茶堿的含量，由于萃取過程容易引起操作誤差，故常常出現測定的樣品含量偏低，由于氨茶堿具有明顯的毒副作用，安全范圍小，個體差異大，進一步提高完善該制劑的質量標準，建立準確可靠的分析方法，對于保護使用者的健康，規范藥品市場具有重要意義。本試驗采用高效液相色譜法測定新咳喘寧合劑中氨茶堿的含量，取得了較滿意的效果。現報道如下。

1 儀器與試藥

Waters 600 Controller高效液相色譜儀;可變紫外檢測器;Hypersil ODS C18色譜柱(150 mm ×4．6 mm，5 μm);SH2-D(Ⅲ)循環水式真空泵(鞏義市予華儀器有限責任公司);BS1245型萬分之一天平(德國Sartorius公司);PHS-3C型精密pH計(上海雷磁精密科學儀器有限公司)。新咳喘寧合劑(新橋醫院自制，批號為110228，100521，100929);甲醇為色譜純，水為超純水，其他試劑均為分析純。

2 方法與結果

2．1 色譜條件與系統適用性試驗

色譜柱:Hypersil ODS C18柱(150 mm ×4．6 mm，5 μm);流動相:水 -甲醇(70∶30);流速:1．2 mL/min;柱溫:30℃;檢測波長:270 nm;進樣量:20 μL。在上述色譜條件下，取陰性對照品溶液、對照品溶液及供試品溶液各20 μL進樣，結果表明氨茶堿峰形良好，理論板數按氨茶堿峰計算不低于2 000，與相鄰色譜峰的分離度大于3。色譜圖見圖1，結果陰性樣品在氨茶堿峰處未見干擾色譜峰，說明本品的輔料對氨茶堿的含量測定無干擾。

圖1 氨茶堿的高效液相色譜圖

2．2 溶液制備

精密稱取氨茶堿對照品0．101 3 g，置50 mL容量瓶中，加甲醇適量使其溶解，超聲處理，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，作為對照品貯備液，精密吸取對照品貯備液2．5 mL，置25 mL容量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，作為對照品溶液。精密量取新咳喘寧合劑2．5 mL，置25 mL容量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，過濾，取續濾液作為供試品溶液。按照處方比例制備缺氨茶堿的陰性樣品，稱取氯化銨0．5005 g，量取復方樟腦酊 2．5 mL，橙皮酊 0．5mL，遠志酊 2．5 mL，加水至 25 mL，取 2．5 mL置 25 mL容量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻，作為陰性對照品溶液。

2．3 方法學考察

線性關系考察:取2．2項下對照品貯備液，精密吸取1．0，2．0，3．0，4．0，5．0 mL 分別置 25 mL 容量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻。分別精密吸取20 μL，按擬訂色譜條件進樣測定，以質量濃度(X)為橫坐標，以峰面積(Y)為縱坐標進行線性回歸。結果表明，氨茶堿質量濃度在81．0～405．20 μg/mL范圍內與峰面積呈良好線性關系，回歸方程為 Y=4．56×104X ＋8．95×104，r=0．999 9(n=5)。

精密度試驗:取對照品溶液，按擬訂色譜條件重復進樣6次，每次20 μL，記錄氨茶堿峰面積值。結果的 RSD為0．1%，表明儀器精密度良好。

穩定性試驗:取供試品溶液，分別于0，1，2，4，8 h時進樣1次，記錄氨茶堿峰面積值。結果的 RSD分別為1．19%，1．04%，1．21%，表明供試品溶液在8 h內穩定。

重復性試驗:取同一批新咳喘寧合劑，共6份，按供試品溶液制備方法制成供試品溶液并按擬訂色譜條件測定。記錄峰面積值，計算氨茶堿的含量。結果樣品中氨茶堿的平均含量為220．78 μg/mL，RSD=0．3%，表明該方法重現性良好。

回收率試驗:精密稱取氨茶堿0．107 0 g置100 mL容量瓶中，加適量水使其溶解，按處方比例加入輔料，超聲處理30 min，加水稀釋至刻度，搖勻，分別精密吸取 2．0，4．0，5．0mL各 3 份，共9 份，分別置25 mL容量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，過濾，取濾液作為供試品溶液，依法測定含量，計算回收率。結果見表1。

表1 氨茶堿回收率試驗結果(n=6)

2．4 樣品含量測定

精密量取不同批號新咳喘寧合劑，按供試品溶液制備方法制成供試品溶液，依法測定。記錄峰面積值，按外標法計算其中氨茶堿的含量。結果批號為110228，100531，100929的3批樣品中，氨茶堿的含量分別為 198．83，192．21，200．58 μg/mL。

3 討論

選擇高效液相色譜法的色譜條件，因鹽酸異丙嗪在252，275，302 nm波長處有較大紫外吸收，氨茶堿在241，270 nm波長處有較大紫外吸收，參考2010年版《中國藥典(二部)》[1]，在254 nm波長處可同時測定2個物質，但試驗結果發現，在氨茶堿的測定濃度下鹽酸異丙嗪峰信號很弱，新咳喘寧合劑中輔料在254 nm波長處背景吸收較大，而在270 nm波長處背景吸收相對較小，比較兩處波長處的回收率和檢測的靈敏度，本試驗選用270 nm作為氨茶堿的檢測波長[2]。

將高效液相色譜法測定結果與紫外法測定結果進行比較，紫外法測定，樣品前處理繁瑣，測定結果偏低，但測定相對快捷，適用于中間品的檢測，高效液相色譜法測定所需時間較長，測定結果更加準確，適用于成品的含量控制。

[1]國家藥典委員會．中華人民共和國藥典(二部)[M]．北京:中國醫藥科技出版社，2010:702-703．

[2]譚瑞成．HPLC同時測定復方鹽酸麻黃堿滴鼻液中4組分的含量[J]．中國藥學雜志，1999，32(2):82．