意外膽囊癌組織層粘連蛋白受體的表達與腫瘤轉移的關系研究

宋政煒 倪全法 蔣達峰 費建國 秦紅波

意外膽囊癌組織層粘連蛋白受體的表達與腫瘤轉移的關系研究

宋政煒 倪全法 蔣達峰 費建國 秦紅波

目的 探討意外膽囊癌組織層粘連蛋白受體（LN-R）表達與腫瘤組織學類型、分化程度、臨床分期及轉移的關系。 方法 對49例意外膽囊癌患者的臨床資料進行回顧性分析，采用免疫組織化學法（EnVision二步法）對膽囊癌組織進行LN-R的檢測。 結果 LN-R的陽性表達率為71.4%（35/49），LN-R的陽性表達與腫瘤臨床分期密切相關；59.2%（29/49）的患者術后發現腫瘤轉移；LN-R陽性組及LN-R陰性組腫瘤轉移率分別為68.6%（24/35）及35.7%（5/14），兩組比較差異有統計學意義（P＜0.05）。 結論 意外膽囊癌組織LN-R的表達與否與腫瘤臨床分期及轉移率有關，LN-R的陽性表達提示轉移可能性大，需嚴格把握再次根治手術指征。

意外膽囊癌 腫瘤轉移 層粘連蛋白受體

Unexpected gallbladder carcinoma Neoplasm metastasis Laminin receptor

膽囊癌是膽道系統常見的惡性腫瘤，由于缺乏特異性的癥狀及體癥，早期診斷困難，往往以膽囊良性病變行膽囊切除術時在術中或術后病理學檢查發現膽囊癌變，稱為意外膽囊癌（unsuspected gallbladder carcinoma, UGC）[1]。意外膽囊癌一旦發現，需再次行根治性手術，但如果發生轉移即便再次手術亦不能明顯延長患者的生存期[2]。因此，再手術前判斷是否已經發生轉移具有重要的臨床應用價值，有研究發現層粘連蛋白受體（laminin receptor,LN-R）的表達水平與膽囊癌的侵襲轉移相關[3]，但LN-R的表達與意外膽囊癌的轉移是否相關尚不明確，本研究采用免疫組化法對嘉興學院附屬第二醫院近10年來收治的49例意外膽囊癌組織進行LN-R的檢測，結合臨床資料探討LN-R的表達與其組織學類型、分化程度、臨床分期及轉移的關系，現報道如下。

1 資料和方法

1.1 一般資料 收集我院2002-01—2012-01意外膽囊癌病例的臨床資料和存檔的石蠟標本，共49例，其中男l5例，女34例，男女之比為1∶2.3，年齡36～77歲，平均61.8歲。術前B超檢查診斷為慢性結石性膽囊炎38例，膽囊息肉8例，膽囊腺肌癥3例。腹腔鏡膽囊切除術39例，開腹手術10例。術中或術后病理學檢查發現膽囊癌后均再次行手術治療，其中45例行根治性切除，4例因術中發現廣泛轉移改行姑息膽道引流或組織活檢術。術后病理學檢查提示，29例（59.2%)）發現腫瘤轉移，其中膽囊周圍淋巴結轉移13例，肝臟轉移8例，轉移至膽總管4例，廣泛轉移4例。

1.2 方法 采用EnVision二步法檢測LN-R，常規脫蠟，依次采用鼠抗人67KDa LN-R抗體（購自福州邁新公司），山羊抗兔EnVision二抗（1∶100）（購自美國DAKO公司）染色，常規脫水，透明，封片。陽性結果判定：染色陽性為棕黃色，位于胞膜和/或胞漿內，以前者為主，對免疫組化染色的每張切片隨機取5個視野，當染色陽性的膽囊癌細胞數＜30%時為陰性表達，≥30%時為陽性表達（圖1）。

圖1 膽囊癌組織中LN-R陽性表達（免疫組化EnVision法，×100）

1.3 統計學處理 應用SPSS16.0統計軟件，計數資料比較采用χ2檢驗。

2 結果

2.1 LN-R的表達與臨床、病理指標的關系 LN-R的陽性表達與膽囊癌臨床分期密切相關，晚期病例LN-R的陽性表達率高于早期病例，有統計學差異（P＜0.05）；LN-R的陽性表達在不同性別、不同年齡及是否伴膽石癥的患者中無統計學差異，在不同膽囊癌組織學類型及不同分化程度患者中亦無統計學差異（均P＞0.05），見表1。

表1 意外膽囊癌組織LN-R的表達與臨床病理指標的關系（例）

2.2 LN-R的表達與轉移的關系 本組49例意外膽囊癌組織中，35例為LN-R陽性，陽性率為71.4%，其中LN-R（+）組及LN-R（-）組腫瘤轉移率分別為68.6%（24/35）及35.7%（5/14），兩組比較差異有統計學意義（P＜0.01），見表2。

表2 意外膽囊癌組織LN-R的表達與其轉移的關系（例）

3 討論

意外膽囊癌多合并有膽囊結石或膽囊息肉，早期缺乏特異的臨床癥狀，一旦發現多數需要再次手術治療，但再次手術的方式和范圍尚存在爭議，早期膽囊癌（NevinⅡ、Ⅲ期）行根治性膽囊切除術可獲得較好的效果。Kaneoka等[4]報道根治性手術可以提高患者的3年生存率（65.6%）；而膽囊癌一旦出現肝臟、膽管、腹腔及淋巴結轉移（NevinⅣ、Ⅴ期），即便行根治性切除亦無法延長患者生存時間[5]。意外膽囊癌再手術前應盡可能明確是否發生轉移，以避免不必要的手術，減少患者的創傷和經濟負擔。但目前臨床缺乏有效的檢查指標來判斷術前意外膽囊癌有無轉移，而腹部超聲、CT等影像學檢查效果也欠佳[6]。因此期待新的檢查指標能夠在術前準確提示膽囊癌轉移。

LN-R是存在于細胞表面的跨膜糖蛋白，它廣泛存在于腫瘤細胞及某些附著于基底膜的正常細胞表面。腫瘤細胞表面的LN-R則散布于整個細胞表面，數量異常增高，且大多數沒有被LN所飽和，使細胞能結合更多LN，為腫瘤細胞的粘著和侵襲過程提供了分子基礎。LN-R不僅促進細胞在LN基質上的粘著，而且促進細胞的趨化性遷移和Ⅳ型膠原酶的分泌。LN-R在多種活體癌組織中的表達及其與腫瘤的轉移和預后的關系引起人們高度重視[7]。國內趙欣松等[3]報道肝內浸潤和/或淋巴結轉移組LN-R染色陽性指數明顯高于無肝內浸潤轉移組，提示LN-R在人膽囊癌組織中的表達上調與腫瘤細胞的侵襲轉移能力及惡性表型有關聯，LN-R或許能成為判斷意外膽囊癌轉移的重要輔助指標之一。本研究對收集的49例意外膽囊癌組織標本檢測LN-R的表達，結果顯示LN-R的表達率為71.4%，其大部分存在于細胞膜，少部分胞漿內亦有表達，有研究報道[3]在正常膽囊組織、膽囊良性病變組織中表達陽性率分別為3.33%和10%，這提示LN-R的表達與膽囊癌密切相關。LN-R與膽囊癌發生及侵襲轉移的機制正處于研究過程中，通過干預LN與其受體的結合作為治療手段已用于臨床,但具體效果有待觀察。同時本研究發現LN-R陽性表達組的意外膽囊癌轉移率明顯升高，達68.6%；LN-R陰性表達者，轉移率僅為35.7%，兩組差異有統計學意義。LN-R在意外膽囊癌再手術前判斷是否發生轉移方面有潛在的臨床應用價值。由此可見LN-R陽性表達的意外膽囊癌患者，絕大多數已出現肝臟和或淋巴結轉移，再次根治手術創傷大、預后差，對這部分患者再次手術前應完善相關影像學檢查，充分評估病情及預后情況，行再次根治性手術或擴大根治性手術方案時要慎重。而LN-R陰性表達的患者，絕大多數尚未出現轉移，應盡快行根治性切除。本研究回顧性地研究了意外膽囊癌組織LN-R的表達情況及其與腫瘤轉移的關系，進一步需要前瞻性研究來證實以上結論，同時為膽囊癌的治療提供新的思路及方法。

綜上所述，本研究通過回顧性分析意外膽囊癌組織中LN-R的表達及與腫瘤轉移的關系，說明LN-R在意外膽囊癌的轉移判斷上有潛在的應用價值，但尚需前瞻性研究進一步證實。

[1]Romano F,Franciosi C,Caprotti R,et al.Laparoscopic cholecystectomy and unsuspected gallbladder cancer[J].Eur JSurg Oncol, 2001,27(3):225-226．

[2]毛志海,鄭民華,李建文,等.腹腔鏡膽囊切除術后膽囊癌的臨床分析[J].外科理論與實踐,2005,10(6):332-334．

[3]趙欣松,閏立成,劉茜.層粘連蛋白及其受體的表達與膽囊癌分化、侵襲及轉移的相關性研究[J].現代預防醫學,2009,36(19):3782-3786.

[4]Kaneoka Y,Yamaguchi A,Isogai M,et al.Hepatoduodenal ligament invasion by gallbladder carcinoma:histologic patterns and surgical recommendation[J].World J Surg,2003,27(4):260-265.

[5]Behari A,Sikora S S,Wagholikar G D,et al.Long term survival after extended resections in patients with gallbladder cancer[J].J Am Coil Surg,2003,196(8):82-88．

[6]Kokudo N,Makuuchi M,Natori T,et al.Strategies for surgical treatment of gallbladder carcinoma based on information available before resection[J].Arch Surg,2003,138(11):741-750．

[7]鄭世曦,阮幼冰,武忠弼,等.層粘連蛋白受體在人肝細胞癌中的表達及其與轉移的關系[J].中華外科雜志,1998,36(11):701.

2012-07-20）

（本文編輯：胥昀）

314000 嘉興學院附屬第二醫院肝膽外科

宋政煒，E-mail:xiaoguangwangs@163.com

【 Abstract】 ObjectiveTo investigate the expression of laminin receptor(LN-R)and its relation to clinicopathological features of unexpected gallbladder carcinoma (UCG).Methods The expression of LN-R was detected by immunohistochemical assay in 49 patients with UCG;its relation to clinicopathological features of UCG patients was analyzed. Results The positive rate of LN-R expression was 71.4%in 49 cases.The expression of LN-R was correlated with the clinical stage of carcinoma．The metastasis rate of UGC accounted for 59.2%(29/49)after surgery;68.6%(24/35)patients with LN-R expression had metastasis compared to 35.7%(5/14)in those without LN-R expression(P＜0.05). Conclusion The expression of LN-R may predict postoperative metastasis in patients with UCG and suggests the necessity of secondary radical resection.