大腸癌組織中Ezrin和PTEN蛋白的表達及相關性研究

錢賢忠 施紅旗

大腸癌組織中Ezrin和PTEN蛋白的表達及相關性研究

錢賢忠 施紅旗

目的 探討大腸癌組織中Ezrin和PTEN蛋白表達的意義。 方法 采用免疫組化SP法檢測80例大腸癌組織中Ezrin和PTEN蛋白的表達，并分析其與臨床和病理特點的關系。 結果 大腸癌組織中Ezrin蛋白表達陽性率為77.5%（62/80），顯著高于正常大腸黏膜組織（P＜0.01）；PTEN蛋白表達的陽性率為46.3%（37/80），顯著低于正常大腸黏膜組織（P＜0.01）；Ezrin蛋白高表達PTEN蛋白低表達與大腸癌Dukes分期、漿膜浸潤、淋巴結轉移有關（均P＜0.01），而與年齡和組織學類型無關（均P＞0.05）；Ezrin和PTEN蛋白表達呈負相關（P＜0.01）。 結論 Ezrin和PTEN蛋白表達與大腸癌臨床病理特征和生物學行為有密切關系，聯合檢測Ezrin和PTEN蛋白的表達，可用于評估大腸癌侵襲轉移能力，對大腸癌的預后判斷具有一定意義。

大腸腫瘤 腫瘤抑制基因 Ezrin蛋白 免疫組織化學

Colorectal neoplasms Tumor suppressor gene Ezrin Immunohistochemistry

腫瘤的發生、發展是多因素、多階段和多基因改變的過程，其中抑癌基因的突變和原癌基因功能增強是主要的原因之一。大腸癌是最常見的消化道惡性腫瘤之一，其侵襲和轉移是影響患者預后的重要因素，深入研究其機制對改善大腸癌患者總體預后有重要作用。因此，從抑癌基因和腫瘤轉移相關基因著手研究腫瘤的發生和發展有著重要意義。本研究對大腸癌組織中Ezrin蛋白和PTEN蛋白表達進行了聯合檢測，比較了不同臨床和病理特點者Ezrin、PTEN的表達情況，并分析兩者的關系，現報道如下。

1 資料和方法

1.1 一般資料 收集2009—2011我院80例大腸癌患者手術切除的石蠟包埋組織塊（術前已行化療或放療者除外），其中男63例，女17例；年齡28～72歲，平均58.9歲；高、中分化腺癌58例，低分化腺癌22例；有漿膜浸潤55例，無漿膜浸潤25例；有淋巴結轉移39例，無淋巴結轉移41例。臨床Dukes分期：A、B期38例，C、D期42例。另擇15例正常大腸黏膜標本作為對照。

1.2 檢測方法 免疫組化染色采用SP法。標本經10%甲醛溶液固定，常規石蠟切片（厚4μm），HE染色。鼠抗人Ezrin免疫組化單克隆抗體（工作濃度1∶50）、兔抗人PTEN多克隆抗體（即用型）和SP免疫組化試劑盒均購自福州邁新公司。以已知陽性切片作為陽性對照，用PBS代替一抗作空白對照。

1.3 判斷標準 細胞質內見清晰棕褐色顆粒者為Ezrin或PTEN蛋白表達陽性。每例切片觀察5個高倍視野，計算陽性細胞數占計數細胞總數的百分比。Ezrin和PTEN蛋白表達結果判斷標準以陽性細胞數＜10%為陰性，≥10%為陽性。

1.4 統計學處理 采用SPSS12.0統計軟件，組間率的比較采用χ2檢驗，相關性檢驗采用Kendall相關分析。

2 結果

2.1 Ezrin和PTEN蛋白的表達 80例大腸癌中Ezrin蛋白表達陽性62例（77.5%），15例正常大腸黏膜組織Ezrin蛋白表達均為陰性，兩者的差別有統計學意義（χ2=33.4659，P＜0.01）。PTEN蛋白表達陽性 37例（46.3%），15例正常大腸黏膜組織PTEN蛋白表達均為陽性，兩者的差別有統計學意義（χ2=14.7296，P＜0.01）。不同臨床和病理特點的大腸癌患者Ezrin和PTEN蛋白表達情況的比較，見表1及圖1-4（見插頁）。

表1 大腸癌患者Ezrin和PTEN蛋白表達情況[例（%）]

從表1可見，不同年齡和組織學類型大腸癌患者Ezrin、PTEN蛋白表達陽性率的差別均無統計學意義（均P＞0.05）；而不同Dukes分期、有無漿膜浸潤和淋巴結轉移的大腸癌患者，其Ezrin、PTEN蛋白表達陽性率的差別均有統計學意義（均P＜0.01）。

2.2 Ezrin和PTEN蛋白表達的關系 Ezrin蛋白表達陰性者的PTEN蛋白表達陽性率為100%，Ezrin蛋白表達陽性者的PTEN蛋白表達陽性率為30.6%，兩者的表達呈負相關（r=-0.582，P＜0.01）。

3 討論

Ezrin是ERM（Ezrin/Radixin/Moesin）家族的重要成員，對細胞膜區域的結構和功能起到整合和穩定的調控作用。Ezrin蛋白參與微絨毛形成，維持細胞形態，重塑細胞骨架，調節細胞運動，并參與細胞信號傳導過程[1-2]。有研究表明，Ezrin通過與腫瘤細胞表面的黏附分子發生作用來調節腫瘤細胞的特性，影響腫瘤的分化、侵襲和轉移，被認為是新近發現的腫瘤轉移相關基因[3]。本研究顯示，Ezrin蛋白在77.5%的大腸癌中呈陽性表達，顯著高于正常大腸黏膜組織；Ezrin蛋白高表達與大腸癌Dukes分期、漿膜浸潤和淋巴結轉移有關，表明Ezrin參與了大腸癌浸潤和淋巴轉移的過程?？梢?，Ezrin是一種具有正性調控的因子，Ezrin蛋白的異常表達賦予了腫瘤細胞的高轉移活性，通過改變腫瘤細胞極性與細胞運動、調節腫瘤細胞間黏附及細胞與細胞外基質黏附參與腫瘤細胞內信號傳導而影響惡性腫瘤轉移[4]。

PTEN是第1個被發現具有磷酸酶活性的抑癌基因，它的主要功能是使第二信使PIP3去磷酸化、抑制整合素下游分子焦點黏附激酶（Focal adhesion kinase，FAK）及FAK下游分子P130Cas的酪氨酸磷酸化使細胞因子誘導的細胞分裂素活化蛋白激酶（mitogen activated protein kinase,MAPK）磷酸化水平明顯下降而抑制腫瘤的發生發展，從而抑制腫瘤細胞的浸潤和轉移[5-6]。本研究顯示，PTEN蛋白在46.3%的大腸癌中呈陽性表達，顯著低于正常大腸黏膜組織；PTEN蛋白低表達與大腸癌Dukes分期、漿膜浸潤和淋巴結轉移有關，表明PTEN蛋白陰性表達的腫瘤更具有侵襲性和轉移性。文獻報道[7]PTEN蛋白高表達的大腸癌細胞系，其黏附和遷移能力顯著降低，在PTEN缺失的細胞內重新轉染PTEN，可抑制細胞的遷移和鋪展。PTEN抑制黏著斑形成可能主要通過抑制FAK-P130通路及通過改變細胞內PI3，4，5P3的水平從而影響黏著斑的結構來實現的。

本研究還發現，Ezrin蛋白表達陰性的18例大腸癌中PTEN蛋白表達陽性率為100%，而Ezrin蛋白表達陽性的62例大腸癌中 PTEN蛋白表達陽性率為30.6%，兩者的表達呈負相關（P＜0.01），提示在大腸癌的發生、發展過程中，Ezrin和PTEN具有反向協同作用，共同參與大腸癌的發病機制和演進過程。最近有學者[8]認為，Ezrin和PTEN可能通過FAK相互影響。FAK是與細胞黏附關系密切的非受體型酪氨酸激酶，在整合素及生長因子受體介導的信號傳導通路中起樞紐作用。而過度表達的Ezrin蛋白能促進FAK磷酸化位點的自動磷酸化；另外，Ezrin蛋白還通過活化FAK和MAPK途徑，促進黏著斑形成及腫瘤細胞與其他細胞黏附，促進腫瘤細胞的遷移[9]。另一方面，PTEN通過逆轉FAK的磷酸化或作用于FAK下游的效應分子來調控細胞的遷移[10]。可見，Ezrin和PTEN均可通過黏著斑相互聯系，可通過共同的信號傳導通路發生作用，影響腫瘤的發生、浸潤與轉移。由此認為：大腸癌組織中Ezrin蛋白的高表達和PTEN蛋白的低表達可能通過黏著斑和細胞骨架連接參與細胞表面復合物的形成，共同影響腫瘤細胞的遷徙能力；Ezrin通過促進酪氨酸磷酸化后，其FAK能部分對抗PTEN的作用，而PTEN也通過這種負性調控FAK介導的信號傳導通路，發揮其抑癌作用，Ezrin和PTEN正是通過改變細胞黏附及細胞運動能力等途徑參與大腸癌發生、發展的全過程。因而，聯合檢測Ezrin和PTEN蛋白的表達可作為判斷大腸癌侵襲轉移能力的一項客觀指標，對大腸癌的預后判斷具有重要意義。

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（本文編輯：胥昀）

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本刊編輯部

2012-03-09）

321000 金華市中心醫院肝胰膽外科

【 Abstract】 ObjectiveTo investigate the expression of Ezrin and PTEN proteins in colorectal adenocarcinoma and its significance.Methods The expression of Ezrin and PTEN proteins was examined immunohistochemically with SP method in 80 cases of colorectal adenocarcinoma,and the relationships of the expression with clinicopathological characteristics of tumor was analyzed. Results The positive rates of Ezrin and PTEN protein expression in 80 cases of colorectal adenocarcinoma were 77.5% (62/80)and 46.3%(37/80)respectively.They were not correlated with age or histological type(P＞0.05).The high level of Ezrin protein expression and the low level of PTEN protein expression were correlated significantly with the Dukes'stage,serosa infiltration, lymph node metastasis of colorectal adenocarcinoma(P＜0.01).The expressions of Ezrin protein was negatively correlated with that of PTEN protein(P＜0.01).Conclusion The expressions of Ezrin and PTEN are correlated with the clinicopathological characteristics and biologic behaviors of colorectal adenocarcinoma.The combined detection of Ezrin and PTEN proteins may be helpful in evaluation of prognosis and aggressive potential of colorectal adenocarcinoma.