液相色譜-示差折光法測定蜂蜜中果糖、葡萄糖、蔗糖、麥芽糖的改進研究

汪良清，胡桂標(biāo)

（東莞市養(yǎng)生源蜂業(yè)有限公司，廣東 東莞 523216）

蜂蜜是一種天然食品，味道甜蜜，所含的單糖不需要經(jīng)消化就可以被人體吸收，對婦、幼特別是老人更具有良好保健作用。目前我國蜂蜜消費需求遠超蜂蜜產(chǎn)量，不法商販為了牟取更大暴利，往往在蜂蜜中添加淀粉類、代糖類等物質(zhì)，嚴重的損害了廣大消費者的利益。目前，食品安全國家標(biāo)準蜂蜜GB 14963-2011[1]以及中華人民共和國供銷合作行業(yè)標(biāo)準蜂蜜GH/T 18796-2012[2]中仍然采用GB/T 18932.22 液相色譜示差折光檢測法測定蜂蜜中果糖、葡萄糖、蔗糖、麥芽糖含量[3]。但按照此方法檢測，在樣品前處理的時候操作比較繁瑣且容易發(fā)生分層現(xiàn)象，對檢測結(jié)果的準確性有一定的影響，同時修正了蔗糖、麥芽糖標(biāo)準工作溶液濃度。另外，短波近紅外光譜法[4]、毛細管電泳電化學(xué)檢測法[5]、離子色譜脈沖安培法[6]、液相色譜蒸發(fā)光散射檢測法（HPLC-ELSD）[7]等方法測定食品中的糖也略有報道。本實驗在國家標(biāo)準以及行業(yè)標(biāo)準的基礎(chǔ)上，分析蜂蜜中的果糖、葡萄糖、蔗糖、麥芽糖含量的測定方法。

1 材料與方法

1.1 試劑與儀器

乙腈：色譜純；水：重蒸餾水；果糖、葡萄糖、蔗糖、麥芽糖標(biāo)準物質(zhì)：純度≥99%西格瑪奧德里奇（上海）貿(mào)易有限公司提供；RID-10A示差折光檢測器：島津公司生產(chǎn)；柱溫箱：精度±0.1℃；電子天平：感量0.0001g；過濾膜：0.45μm。

1.2 色譜分析條件

色譜柱：碳水化合物分析柱（5μm，4.0mm×300mm）；流動相：乙腈+水（75+25）；流速：1.0mL/min；柱溫：25℃；示差折光檢測器池溫度：35℃；進樣量：15μL。

1.3 配制標(biāo)準工作溶液

1.3.1 果糖、葡萄糖標(biāo)準儲備溶液

準確稱取5g果糖標(biāo)準物質(zhì)，4g葡萄糖標(biāo)準物質(zhì)，精確至0.0001g，放入同一個100mL容量瓶中，加入60mL水溶解，再用乙腈定容，搖勻備用。

1.3.2 蔗糖、麥芽糖標(biāo)準儲備溶液

準確稱取2g蔗糖標(biāo)準物質(zhì)，2g麥芽糖標(biāo)準物質(zhì)，精確至0.0001g，放入同一個100mL容量瓶中，加入60mL水溶解，再用乙腈定容，搖勻備用。

1.3.3 果糖、葡萄糖、蔗糖、麥芽糖標(biāo)準工作溶液

標(biāo)準儲備溶液的用量，用乙腈+水（40+60）稀釋定容體積，見表1。

2 測定方法

2.1 測定原理

試樣用乙腈+水（40+60）溶解并定容，搖勻后，用0.45μm濾膜過濾，經(jīng)示差折光檢測器測定，外標(biāo)法定量。

表1 標(biāo)準工作溶液的配制Table 1 Preparation of standard working solution

2.2 試樣的制備

稱取5g樣品，精確至0.001g。置于100mL燒杯中，用乙腈+水（40+60）溶解均勻并定容至100mL容量瓶，搖勻后，用0.45μm濾膜過濾進入液相色譜測定。

3 分析

國標(biāo)法：用一定量水溶解樣品，再用乙腈定容，經(jīng)常出現(xiàn)分層現(xiàn)象。特別是含水量越低的樣品，分層現(xiàn)象越明顯。見表2。

表2 不同蜂蜜含水量與分層程度比較Table 2 Hierarchical levels and water content comparison in different honey

改進法：現(xiàn)流動相為乙腈+水（75+25）測定結(jié)果跟國家標(biāo)準方法的測定樣品結(jié)果接近，見表3。

現(xiàn)用乙腈+水（40+60）直接溶解樣品并搖勻，能有效地解決分層現(xiàn)象，見表4。

表3 不同流動相的對比結(jié)果Table 3 Comparison results of different mobile phases

表4 采用乙腈+水（40∶60）溶解樣品對比結(jié)果Table 4 Comparison results of dissolve the sample by acetonitrile and water (40∶60)

4 精密度及回收率

4.1 精密度

從1.3.1、1.3.2標(biāo)準儲備溶液取果糖（C=5.0g/100mL）、葡萄糖（C=4.0g/100mL）、蔗糖（C=2.0g/100mL）、麥芽糖（C=2.0g/100mL）溶液測定6次，在此濃度下測定結(jié)果的相對標(biāo)準偏差均小于1%，即本方法的重現(xiàn)性良好，試驗結(jié)果見表5。

4.2 回收率

通過表3蜂蜜加標(biāo)物實驗來驗證該方案的可行性，在加標(biāo)濃度分別為0.4g/100mL，0.8g/100mL，1.5g/100mL時，均獲得了較理想的回收率，試驗結(jié)果見表6～表9。

5 結(jié)果討論

跟GB/T 18932.22對比結(jié)果，原國家標(biāo)準中第5點中蔗糖、麥芽糖標(biāo)準工作溶液濃度各為0.60g/100mL，現(xiàn)修正為0.56g/100mL。保證結(jié)果的準確性；

降低乙腈的使用量，流動相：乙腈+水（75+25），測定結(jié)果跟國家標(biāo)準方法的結(jié)果一致。這樣可以降低企業(yè)成本，減少環(huán)境的污染；

表5 測定結(jié)果精密度Table 5 Precision of measurement results

表6 蜂蜜中果糖加標(biāo)物實測結(jié)果Table 6 Measured results of spiked fructose in honey

表7 蜂蜜中葡萄糖加標(biāo)物實測結(jié)果Table 7 Measured results of spiked glucose in honey

表8 蜂蜜中蔗糖加標(biāo)物實測結(jié)果Table 8 Measured results of spiked sucrose in honey

表9 蜂蜜中麥芽糖加標(biāo)物實測結(jié)果Table 9 Measured results of spiked maltose in honey

用乙腈+水（40+60）直接溶解樣品，并用其定容至體積。此操作方法有效地解決分層現(xiàn)象；

本方法操作簡單快速，重復(fù)性好，靈敏度高，準確性好，回收率高。

[1]GB14963-2011 蜂蜜[S].

[2]GH/T 18796-2012 蜂蜜[S].

[3]GB/T 18932.22-2003 蜂蜜中果糖、葡萄糖、蔗糖、麥芽糖含量的測定方法液相色譜示差折光檢測法[S].

[4]饒震紅，李民贊，吉海彥.短波近紅外光譜法同時定量分析水溶液中葡萄糖、果糖和蔗糖[J].光譜學(xué)與光譜分析，2006，26（4）：633-635.

[5]單瑞峰.毛細管電泳電化學(xué)檢測法測定南瓜中糖類物質(zhì)[J].山東化工，2006，35（2）：33-35.

[6]崔 鶴，李戈登.離子色譜脈沖安培法測定蜂蜜中的葡萄糖、果糖、蔗糖[J].化學(xué)分析計量，2001（1）：25-26.

[7]YOUNG C S.用HPLC 和蒸發(fā)光散射檢測對糖類分析的方法學(xué)[J].國外分析儀器，2002（2）：26-29.