骨骼維生素K水平在不同年齡段小兒骨代謝評價體系中的應用價值

金軼

【摘要】 目的 通過比較不同年齡段小兒骨骼維生素K的營養(yǎng)狀況，進一步了解骨代謝在兒童期的特點及演變趨勢。方法 將于2012年1月——2012年6月于我院進行常規(guī)體檢的0-14歲兒童隨機抽取80例，按照年齡分為四組：0-1歲為A組22例，-3歲為B組18例，-9歲為C組20例，9歲以上為D組20例。采用ELISA法，檢測血清未羧化骨鈣蛋白及總骨鈣蛋白的含量，計算出骨鈣蛋白的未羧化率，并對其結果作進一步的評價與分析。結果 1 A、 B、 C、 D組之間的血清未羧化的骨鈣蛋白水平比較p<0.001，存在統(tǒng)計學差異。2四組之間的血清總骨鈣蛋白水平比較p<0.001，存在統(tǒng)計學差異。 3 四組的血清未羧化骨鈣蛋白/總骨鈣蛋白*100之間比較p<0.001（F=15.65），存在統(tǒng)計學差異。4血清未羧化骨鈣蛋白及總骨鈣蛋白均與年齡呈正相關，即年齡越大，未羧化骨鈣蛋白及骨鈣蛋白的含量越高。而小兒年齡與體內未羧化骨鈣蛋白/骨鈣蛋白的比率無相關性，r=-0.48，P=0.709。結論 1不同年齡段小兒骨鈣蛋白未羧化率不同，這意味著骨骼維生素K水平在兒童期隨年齡的增長呈現(xiàn)出動態(tài)演變過程。20-1歲小兒骨鈣蛋白未羧化率最高；1-3歲小兒次之，而后為3-9歲、9歲-14歲。這表明0-1歲小兒成骨細胞的維生素K的相對缺乏程度最重，并進一步證明維生素K可以作為評價小兒骨代謝的又一客觀指標。

【關鍵詞】 骨骼維生素K；骨鈣蛋白未羧化率；骨代謝；兒童

過去人們認為骨在細胞水平上是不活躍的，但事實上骨的細胞在不停地進行著細胞代謝，骨代謝主要包括兩個過程，一個是成骨細胞合成骨基質，使骨量增加，即骨形成的過程，另一個是破骨細胞吸收骨基質的過程，無論是骨形成或骨吸收均會釋放及分泌多種代謝產物，這些進入血液或尿液中的代謝產物，既可作為評價骨代謝的生化標志物，其中骨鈣蛋白是唯一在礦化組織中大量存在的骨代謝標志物，是骨形成的最直接反映^[1]。而維生素K作為一種古老的營養(yǎng)素，除了在凝血方面發(fā)揮重要作用外，其又是骨鈣蛋白中谷氨酸r位羧化的重要輔酶，因此維生素K參與了骨代謝，關于兩者之間相關性的研究近年來成為各個醫(yī)學領域的熱門話題，本研究則著眼于0-14歲兒童，將其分為不同的年齡段，通過測定骨鈣蛋白未羧化率來評價維生素K與兒童骨代謝的密切關系，具體方法如下：

1 材料與方法

1.1 臨床資料分組 將2012年01月——2012年6月于我院進行常規(guī)體檢的0-14歲兒童隨機抽取80例（均無血液系統(tǒng)疾病、肝臟系統(tǒng)疾病史，未服用過影響維生素K代謝藥物史）。按照年齡分為四組：0-1歲為A組22例，-3歲為B組18例，-9歲為C組20例，9歲以上為D組20例

1.2 標本采集 所有入選兒童均在上午8-9時采集清晨空腹靜脈血4ml，待血液充分凝固后，3000r/min離心5min，分別留取血清，置-20℃冰箱保存待測。

2 儀器及試劑盒

2.1 儀器 全自動酶標儀（Wellscan MK3，芬蘭），全自動洗板機（DEM-II，北京）。

2.2 試劑盒 骨鈣蛋白試劑盒為美國DSL公司的骨鈣蛋白酶聯(lián)免疫測定盒；未羧化的骨鈣蛋白試劑盒為日本TakaRa公司的未羧化的骨鈣蛋白酶聯(lián)免疫測定盒（Glu-OC EIA Kit）。

3 對待測標本進行檢測并計算

總骨鈣蛋白= 羧化骨鈣蛋白+ 未羧化骨鈣蛋白。以未羧化骨鈣蛋白/ 總骨鈣蛋白計算出骨鈣蛋白未羧化率。

4 統(tǒng)計學分析

應用SPSS13.0統(tǒng)計軟件進行統(tǒng)計學分析，計量資料用均數(shù)±標準差（χ±s）表示，進行正態(tài)性和方差齊性檢驗。兩組比較應用t檢驗，多組比較用方差分析（one-way ANOVA），兩組之間比較用SNK-q檢驗；兩變量之間相關性用Pearson相關分析。設定α=0.05。若P≤0.05為差異有統(tǒng)計學意義，P≤0.01為差異有顯著統(tǒng)計學意義。

5 結 果

5.1 0-1歲組（A組），-3歲組（B組），-9歲組（C組），9歲以上組（D組）的血清未羧化的骨鈣蛋白水平分別為2.17±0.59 ng/mL、1.65±0.82 ng/mL、1.96±0.91 ng/mL和2.59±0.80 ng/mL，四組之間比較p<0.001（F=17.58），存在統(tǒng)計學差異，兩組之間比較均存在統(tǒng)計學差異。

5.2 A、B、C、D組的血清總骨鈣蛋白水平分別為33.38±19.69 ng/mL、26.07±17.62 ng/mL、35.66±15.10 ng/mL和63.13±35.60ng/mL，四組之間比較p<0.001（F=22.56），存在統(tǒng)計學差異，兩組之間比較均存在統(tǒng)計學差異。

5.3 A、 B、 C、 D組的血清未羧化骨鈣蛋白/總骨鈣蛋白*100分別為6.38±2.75、4.87±3.22、5.16±2.31、4.35±1.63.四組之間比較p<0.001（F=15.65），存在統(tǒng)計學差異。

5.4 血清未羧化骨鈣蛋白與年齡呈正相關，r=0.49，p<0.01；血清骨鈣蛋白與年齡呈正相關r=0.38，p<0.01；即年齡越大，未羧化骨鈣蛋白及骨鈣蛋白的含量越高。而小兒年齡與體內未羧化骨鈣蛋白/骨鈣蛋白的比率無相關性，r=-0.48，P=0.709，見表1。

6 討 論

兒童骨骼是一個新陳代謝非常旺盛的器官，通過合成和吸收兩個過程對骨進行不斷的塑造和重建，在這兩個過程中成骨細胞合成的酶類及有機基質以及破骨細胞作用下的降解產物均會進入血液循環(huán)及尿液中，檢測這些物質在血或尿中的濃度即可用于評價骨的生長及進行疾病研究^[2]，因此它們可以作為骨的生化代謝標志物動態(tài)地反映骨的形成及吸收情況。

骨鈣蛋白作為目前公認的一種骨生化代謝標志物，其由成熟的成骨細胞分泌，主要作用于骨基質的礦化階段，是反映骨形成的特異性指標^[1]。骨鈣蛋白分子中含有3個谷氨酸殘基，只有當谷氨酸殘基羧化為羧化谷氨酸時，骨鈣蛋白才會被激活促進骨的礦化，而谷氨酸殘基的羧化過程需要有維生素K作為輔酶才能完成，維生素K缺乏將會導致骨鈣蛋白不能被羧化，預示著骨礦物質密度減低及高風險髖骨骨折^[3]。細胞培養(yǎng)同時證實骨鈣蛋白的合成受維生素D與維生素K的共同調節(jié)，維生素D直接在基因轉錄水平發(fā)揮作用，維生素K參與蛋白質的翻譯后羧化修飾過程^[4]，因此可以通過測定血清骨鈣蛋白的未羧化率來評價機體的骨骼維生素K營養(yǎng)狀況，本研究即以以上病生理基礎作為實驗原理，將80名0-14歲兒童按照年齡分為4組，大體為嬰兒組、幼兒組、學齡前組及學齡期組，通過ELISA法測定以上各組小兒血清骨鈣蛋白及未羧化骨鈣蛋白的濃度，并計算出骨鈣蛋白的未羧化率，進一步了解在兒童期骨代謝與維生素K的相關性。實驗結果顯示小兒血清骨鈣蛋白及未羧化骨鈣蛋白的濃度隨年齡增長整體呈現(xiàn)出上升趨勢，而不同年齡段小兒骨鈣蛋白的未羧化率不同，這意味著骨骼維生素K水平在兒童期隨年齡的增長呈現(xiàn)出動態(tài)演變過程。其中0-1歲小兒骨鈣蛋白未羧化率最高；1-3歲小兒次之，而后為3-9歲、9歲-14歲。這表明0-1歲小兒成骨細胞的維生素K的相對缺乏程度最重，這正與我們臨床觀察到的嬰兒期最易發(fā)生佝僂病等骨代謝異常的特點相吻合，同時提醒我們兒童期尤其是嬰兒期補充維生素K對改善骨代謝，減少佝僂病等的發(fā)病有著重要的意義。

骨代謝是一個受多種維生素、激素和細胞因子調節(jié)的復雜的生理過程，而在兒童期又受年齡增長、性別、生長速率、營養(yǎng)狀況以及青春期階段等更多因素的影響，因此對兒童期的骨代謝進行評價及判斷難度更大，因樣本量有限，迄今為止，國內還沒有兒童骨代謝標志物的正常參考值，同時本研究提醒我們兒童期在不同的年齡段應確立不同的參考值，由于單個骨代謝標志物在兒童骨骼發(fā)育中的敏感性和預測價值有限，因此在兒童骨骼發(fā)育的縱向檢測中除需監(jiān)測骨合成及吸收的指標，同時需監(jiān)測骨代謝的調節(jié)指標^[5]，而骨骼維生素K水平即可作為評價骨代謝的一項重要生化指標，但對其更準確、簡便的檢測手段以及正常值的建立，還需要我們在以后的臨床工作和實驗中作更深一步的探討及研究。

參考文獻

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