白酒中微量氰化物的測定方法的改進

唐瑩等

摘要：氰化物是酒類的一項重要安全檢測指標。隨著食品安全問題日益受到國家和公眾的普遍關注，氰化物的檢測顯得尤為重要。本文主要介紹了利用紫外可見分光光度計檢測白酒中氰化物的方法的改進和探討。此方法中由于酒樣在一系列化學反應中產生混濁現象影響檢測結果，經過利用真空泵對其進行抽濾即可消除影響。經過此法酒中氰化物測定其準確度很好。

關鍵詞：白酒 氰化物 紫外可見分光光度計 真空泵

1 概述

氰化物是一種有害物質，白酒中的氰化物主要是原料（如木薯、代用品、豆類及其它果核或混入一些野生植物）中含有的氰苷類在發酵生產過程中水解產生的氫氰酸[1]。氫氰酸（別名氰化氫）是一種具有苦杏仁特殊氣味的無色液體。易溶于水、酒精和乙醚。易在空氣中均勻彌散，在空氣中可燃燒[2]。氰化氫在空氣中的含量達到5.6%～12.8%時，具有爆炸性。氰化氫為氣體，其水溶液稱氫氰酸。氫氰酸屬于劇毒類。能抑制呼吸酶，造成細胞內窒息，導致人體呼吸停止而死亡[3]。因此，氰化物是酒類的一項重要檢測指標。雖然大部分氫氰酸在釀造過程中可以揮發，但是在酒中仍然會有微量殘留。國家標準《蒸餾酒及配制酒的衛生標準》GB2757[4]中明確規定，白酒中以木薯為原料的酒中氰化物的含量≤5mg/l，以代用品為原料的酒中氰化物的含量2mg/l。雖然目前市售眾多白酒中標識其原料多為糧食類，其氰化物含量相對較低，但為了保證引用酒的安全，加強對這一指標的檢測具有重要的意義。

2 實驗部分

2.1 原理 氰化物在酸性溶液中蒸出后被吸收于堿性溶液中，在中性（PH7.0）緩沖溶液中，與氯胺T反應生成氯化氰，后者與異煙酸反應并水解生成戊烯二醛，再與吡唑啉酮生成穩定的淡粉紅色化合物，在波長638nm下測定吸光值。

2.2 儀器 TU-1901普析紫外可見分光光度計

移液槍20-200ul

移液槍100-1000ul

HH-6數顯恒溫水浴鍋（國華電器）

震蕩器

HP-01真空泵

0.45um混合纖維素濾膜

2.3 化學試劑 ①氰化物標準液：1g/l，使用前稀釋成50mg/l。②氫氧化鈉溶液：20g/l和2g/l。③酚酞指示劑：10g/l。④乙酸：1+6。⑤磷酸鹽緩沖溶液：0.5mol/l，PH7.0。⑥氯胺T溶液 （10g/l）：現配現用，要求氯胺T有效氯含量應在11%以上。⑦異煙酸-吡唑啉酮溶液：稱取1.5g異煙酸溶于24ml氫氧化鈉（20g/l）中，加水至100ml，另稱取0.25g吡唑酮，溶于20mlN-二甲基甲酰胺中，合并上述兩種溶液，混勻。

2.4 實驗方法

2.4.1 氰化物標準樣的制備。用100-1000uL的移液槍吸取0.5ml氰化物標準溶液于25ml的容量瓶中，加2g/l的氫氧化鈉溶液定容到25ml，充分混合均勻后，用移液槍分別吸取其溶液0ml、0.5ml、1.0ml、1.5ml、2.0ml于10ml的比色管中，然后加2g/l的氫氧化鈉溶液至5ml，充分混合均勻。

2.4.2 樣品的處理。取1ml的白酒酒樣于10ml的具塞比色管中加氫氧化鈉溶液（2g/l）到5ml，放置堿解10min。

2.4.3 溶液的PH值的調節。在標準樣管和白酒樣品管中依次加入兩滴酚酞指示劑，然后加入乙酸（1+6）直至紅色褪去，用20g/l的氫氧化鈉溶液調至微紅色[5]。

2.4.4 顯色和測定。對中依次加入磷酸鹽緩沖溶液2 ml（如果室溫低于20℃，需將標準樣管和白酒樣品管放入恒溫水浴鍋中，在溫度27℃水浴10min），然后用移液槍（20-200ul）加入氯胺T溶液（10g/l）0.2ml，充分混勻后靜置3min，再加入異煙酸- 吡唑啉酮溶液2.0ml，加水稀釋至刻度，在震蕩器上震勻，在27℃左右水浴放置30min，取出后利用真空泵過濾。

用1cm石英比色皿，以空白標準試樣調節零點，然后在波長638nm處測定4種不同濃度下空白溶液與標準溶液的吸光度。儀器根據濃度與吸光度自動繪制標準曲線。測定白酒樣品中氰化物的含量步驟同上，同時做空白樣。

3 實驗的結果

3.1 標樣標準曲線見圖1

標準曲線濃度與吸光度的關系式：Abs=K0+K1C

式中K0=0.00022；K1=0.23293；

通過標準曲線可以得出此次試驗的相關性系數r為 0.9998，由此得到結論：此次試驗標準曲線的準確性很好。

3.2 白酒樣品加標回收試驗 用加標回收試驗來檢驗此法所測標準曲線的準確性：取不同酒樣0.9ml置于10ml比色管中（氰化物的含量為0.210ug），用移液槍（20-200ul）加入氰化物標準溶液（氰化物的含量為0.1ug）0.1ml，步驟同白酒樣品測定，結果見表1。

從表1可以看出，回收率在92.9%-102.1%之間，由此可以得出實驗的回收率很好，說明用此方法所得到的標準曲線準確性很高。

4 討論

4.1 調節溶液的PH值 國家標準《蒸餾酒與配制酒衛生標準的分析方法》GB5009.48規定：用乙酸（1+6）調至紅色褪去，然后加入2g/l氫氧化鈉溶液至微紅色。由于所用氫氧化鈉溶液的濃度相對較低，PH值控制時，最終溶液的體積很難控制在10ml以內，這樣就會無法進行后續操作。在本方法中用20ml/l的氫氧化鈉溶液調節就會使最終溶液的體積很容易控制在10ml以內，以便后續操作，保證結果的準確性。

4.2 白酒樣品出現渾濁時的處理 在白酒樣品中加入異煙酸- 吡唑啉酮溶液時有時會出現白色渾濁的現象，產生渾濁的主要原因是白酒中高級醇類、醛類等物質與異煙酸- 吡唑啉酮溶液反應生成白色的渾濁物質。對此，在用紫外可見分光光度計測定前，我們利用真空泵對氰化物的標準樣和白酒樣品進行過濾，從而達到處理白色渾濁的作用。但對空白試驗，可以不用真空泵進行過濾。

參考文獻：

[1]夏金池，牟文俐，譯.食品中的有害物質[M].北京：中國輕工業出版社，1992，10-13.

[2]徐向陽，翟鳳蘭.杏仁露中氰化物測定方法的研究[J].中國食品衛生雜志，2002，14（6）：20-22.

[3]中華人民共和國衛生部藥典委員會.中華人民共和國藥典[M].北京：化學工業出版社，1995.

[4]GB5009.48-2003蒸餾酒與配制酒衛生標準的分析方法[S].2004.

[5]GB2757-81.蒸餾酒及配制酒的衛生標準[S].1982.