酸棗多糖的提取及對免疫功能影響的初探

郎杰

（河北經貿大學生物科學與工程學院，河北石家莊050061）

酸棗（Ziyphus spinesu（Bunge）Hu.）為鼠李科棗屬植物，原產于中國，多分布于北方。酸棗種仁（酸棗仁）是常用的中藥材。酸棗除去果核的果肉部分仍具有豐富的營養成分和保健功能。對酸棗果肉部分有待深入研究與開發。近年來對植物多糖的研究報道日趨增多，多糖具有多種生物活性[1]。尤其是多糖在免疫方面的作用研究的更為深入，發現了很多多糖具有促進免疫器官的發育和促進免疫細胞的生成以及促進免疫細胞的吞噬功能，甚至還促進細胞因子的產生等[2]。為了對酸棗果肉部分進行綜合利用，本文對酸棗多糖進行了提取研究以及對酸棗多糖的免疫調節功能進行了動物實驗。

1 材料與方法

1.1 酸棗多糖的制備

新鮮酸棗剝離果核，將果肉于105℃烘30 min滅其酶活性，于75℃烘干后粉碎過100目篩，放入索氏提取器中，用甲醇-乙酸乙酯混合液在80℃恒溫中回流抽提色素至抽提液顏色呈微黃色。將回流后的酸棗果肉粉取出，加入蒸餾水（1∶10），分別調至 pH5.0、6.5、8.0 浸泡 10 h，放入 60、70、80、90 ℃恒溫水浴中浸提2 h，冷卻后離心（4 000 r/min）20 min，取上清液加入木瓜蛋白酶（1 U/mL）37℃水浴加熱1 h脫蛋白[3]，再分別加入2、3、4、5倍量無水乙醇，4℃下靜置后再離心20 min，棄去上清液，沉淀物以蒸餾水溶解后加入10%活性炭，60℃脫色30 min，過濾除去活性炭，得到微黃色多糖溶液，用苯酚硫酸法測定含量后[4]，再減壓干燥用于下一步實驗。

1.2 酸棗多糖對小鼠免疫影響實驗

小白鼠（昆明種）：購于河北醫科大學動物室，體重25 g～30 g雄性小鼠64只，隨機分為空白對照組、小劑量組、中劑量和大劑量組各2組，一組用于測定免疫器官指數（10只重復），另一組用于測碳粒廓清指數（6只重復）。

將酸棗多糖配成所需濃度，每日灌胃一次。大、中、小劑量分別為每千克體重500、350、200 mg多糖，空白對照組灌以蒸餾水。連續灌胃60 d。

1.2.1 免疫器官重量的測定

末次給藥24 h后，將小鼠用乙醚麻醉，迅速取出胸腺和脾臟，用濾紙吸干血液后稱重，計算出脾臟、胸腺指數單位。

1.2.2 吞噬細胞的吞噬指數測定

末次給藥24 h后對小鼠用烏拉坦麻醉，將印度墨汁用含1%明膠的生理鹽水稀釋5倍，由尾靜脈注射（1.0 mL/100 g），注射后15 min、24 h分別由眼后靜脈叢取血，用比色法測血漿中碳粒濃度（μL/mL），計算吞噬指數[5]。

2 結果與分析

2.1 不同提取條件對酸棗多糖的提取效果比較

在不同溫度、不同提取pH及對提取物用不同比例乙醇沉淀其效果見表1。

表1 不同提取條件對酸棗多糖的提取效果比較Table 1 Comparison on extraction effect of jujube polysaccharide of different conditions μg/mL

不同溫度下對酸棗多糖的浸提液進行吸光度測定并折算為多糖含量，結果表明多糖提取量隨溫度增高而增加，經方差分析顯示，90℃與80℃提取差異不顯著。而90℃和80℃提取效果與70℃及60℃差異顯著。提取液pH對浸提效果影響較為明顯，在pH5.0、6.5、8.0條件之間差異顯著，其中以pH8.0效果最好。對酸棗多糖提取液用不同體積比例乙醇進行沉淀結果表明乙醇比例增大沉淀量增加。四種乙醇比例之間差異顯著。由此認為在90℃的中性偏堿（pH8）條件提取效果較好及5倍乙醇沉淀較好。

2.2 酸棗多糖對小鼠免疫功能的影響

用酸棗多糖給小鼠灌胃60 d后，小鼠胸腺和脾重與對照相比結果如表2，對小鼠免疫細胞吞噬能力的影響結果如表3。

表2 酸棗多糖對小鼠免疫器官的影響Table 2 The index of thymus and thymus of mice after taking jujube polysaccharide for 60 d

通過表2數據分析比較，酸棗多糖灌胃處理，可增加實驗小鼠的免疫器官重量，提高小鼠的胸腺指數和脾指數。經統計分析（T－檢驗）表明，中劑量組、大劑量組與空白對照組之間胸腺指數差異顯著；小劑量組、大劑量組與空白對照組比較，脾臟指差異也達顯著水平，大劑量組和小劑量組之間差異不顯著。

通過碳粒廓清指數測定結果分析（表3），酸棗多糖灌胃處理各劑量組碳粒廓清指數均高于對照組，差異顯著。從灌胃劑量效果來看，大劑量效果明顯高于小劑量。由此表明酸棗多糖具有提高小鼠免疫細胞吞噬能力的作用。

表3 酸棗多糖灌胃小鼠60 d后的碳粒廓清指數Table 3 The carbon clearance index of mice after taking jujube polysaccharide for 60 days

3 討論與結論

對于多糖類物質可提高免疫系統功能，過去已有很多報道[6]。本研究以小鼠為實驗動物，利用提取的酸棗多糖進行灌胃，結果表明酸棗多糖具有提高小鼠免疫器官重量和提高碳粒廓清指數的作用，由此可初步認為酸棗多糖在增強免疫方面具有一定的作用。

在本實驗中多糖大劑量效果大于小劑量。其效應是否為直接作用還有待進一步研究。推測其效應不是直接的，可能是間接作用。胸腺對淋巴T細胞增殖分化有重要作用，脾臟對T淋巴細胞和B淋巴細胞，以及巨噬細胞增殖分化作用較大。本實驗中酸棗多糖能增加胸腺和脾的重量，可能酸棗多糖具有促使T淋巴細胞及B淋巴細胞增值的作用，從而進一步提高了吞噬能力。

[1] 章棟梁,郭向瑩,余南靜,等.多糖生物活性及應用研究新進展[J].湖北農業科學,2009,48(9):2282-2285

[2] 謝明勇,聶少平.天然產物活性多糖結構與功能研究進展[J].中國食品學報,2010,10(2):1-11

[3] 楊世平,孫潤廣.陜北紅棗中多糖的酶加水法提取工藝研究[J].武漢植物學研究2005,23(4):373-37

[4] 徐志祥,李剛,李寶健.苯酚-硫酸法測定靈芝多糖含量的條件研究[J].食用菌,2000(3):6-8

[5]陳奇主編.中藥藥理研究方法學[M].北京：人民衛生出版社,1993:712-759

[6] 管敏強.多糖與動物免疫的研究現狀[J].中獸醫學雜志,2006,129(2):43-46