金黃色葡萄球菌顯色培養(yǎng)基在細菌性食物中毒中的應用

林金麗 梁玉潮 梁衛(wèi)橋 馮婉麗 李銀鳳

金黃色葡萄球菌是常見的食物中毒病原菌之一，為有效控制病原菌的發(fā)生和擴散，準確及時的檢測手段是預防和控制金黃色葡萄球菌傳播的關鍵。目前金黃色葡萄球菌傳統(tǒng)的檢驗方法(國標法) 需要分離培養(yǎng)、鏡檢觀察、生化鑒定等多個步驟，檢測周期長，整個過程大約需要4～7 d，且操作復雜，已不能滿足細菌性食物中毒中病原菌快速檢測的現(xiàn)實需要[1]。而金葡菌顯色培養(yǎng)基中添加了針對金葡菌的選擇性色素，因而具有較高的特異性和靈敏度[2]。而且同常規(guī)培養(yǎng)基相比，能較好地消除假陽性。金葡菌顯色培養(yǎng)基僅需通過單一菌落的典型色彩即可進行初步鑒定，大大提高了對金葡菌的檢出率。為探討顯色法的實用價值，本研究在用傳統(tǒng)方法處理細菌性食物中毒時，使用金葡菌顯色培養(yǎng)基同時進行檢測，為金葡菌顯色培養(yǎng)基的應用提供借鑒。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取自2011年3月-2012年3月間廣東省江門市新會區(qū)124 例可疑細菌性食物中毒患者作為研究對象，其中男性患者為73 例，女性患者為51 例，其中年齡最大的患者為72 歲，年齡最小的患者為5 歲。其中兒童患者為12 例。

1.2 材料 金黃色葡萄球菌顯色培養(yǎng)基由法國科瑪嘉公司提供，快速革蘭氏染色液由環(huán)凱公司提供。

1.3 方法

1.3.1 金黃色葡萄球菌顯色培養(yǎng)基平板制備 稱取一定量的金黃色葡萄球菌顯色培養(yǎng)基干粉，倒入三角燒瓶中，緩慢倒入一定量的蒸餾水，攪拌均勻至瓊脂粉完全溶解，加熱至100℃,并按常規(guī)不斷攪拌，直至瓊脂完全溶解。將培養(yǎng)基水浴冷卻至48℃，在無菌操作臺中將培養(yǎng)基倒入已滅菌的培養(yǎng)皿中，待液體凝固后用封口膜將平皿封好，放置在4℃冰箱留用。

1.3.2 患者嘔吐物等樣品金黃色葡萄球菌顯色培養(yǎng)的檢驗 將采集送檢食物中毒患者的嘔吐物等樣品用滅菌后的生理鹽水進行10 倍遞次稀釋，使用不同稀釋濃度的樣品進行劃線接種，放置在37℃培養(yǎng)箱中倒置培養(yǎng)24 h。肉眼觀察菌落顏色，然后挑取菌落涂片，使用快速革蘭氏染色液染色后進行鏡檢和血漿凝固酶試驗，進一步確認結果。

2 結果

2.1 中毒患者資料 對發(fā)生食物中毒的患者資料進行整理，結果發(fā)現(xiàn)，在家里就餐中毒的情況比在外邊多，在家里發(fā)生中毒的情況一般是食用了存放過久的食物造成的中毒，而發(fā)生食物中毒例數(shù)最多的季節(jié)為夏季。見表1。

表1 發(fā)生食物中毒患者的資料

2.2 金黃色葡萄球菌顯色培養(yǎng)基檢測結果

2.2.1 金黃色葡萄球菌顯色培養(yǎng)基菌落生長特征及診斷例數(shù) 葡萄球菌在金黃色葡萄球菌顯色培養(yǎng)基上菌落生長特征各有不同，單個菌落呈現(xiàn)的顏色也不相同，金黃色葡萄球菌在顯色培養(yǎng)基上菌落生長特征為紫紅色，其他細菌為藍色、無色或奶油色。在124 例細菌性食物中毒患者中，檢測到金黃色葡萄球菌的患者例數(shù)為25 例。

2.2.2 血漿凝固酶試驗結果 使用血漿凝固酶試驗驗證結果，將血漿凝固酶驗證試驗與金黃色葡萄球菌顯色培養(yǎng)基方法所得結果進行比較，兩者的準確率均為100%，可以得出金黃色葡萄球菌顯色培養(yǎng)基方法準確率較高，見表2。

表2 血漿凝固酶驗證實驗與顯色培養(yǎng)基方法比較

2.2.3 金黃色葡萄球菌顯色培養(yǎng)基在不同樣品中金葡菌的檢出率 使用金葡菌顯色培養(yǎng)基檢測細菌性食物中毒患者的不同樣品，嘔吐物、咽拭子和肛拭子均檢出金葡菌，其中嘔吐物的檢出率最高，見表3。

表3 金黃色葡萄球菌顯色培養(yǎng)基在不同樣品中金葡菌的檢出率

3 討論

使用金黃色葡萄球菌顯色培養(yǎng)基方法檢測，金黃色葡萄球菌呈紫紅色，其他細菌為藍色、無色或奶油色，肉眼容易區(qū)分和鑒別，124 例可疑細菌性食物中毒患者的金葡菌檢測傳統(tǒng)法與顯色培養(yǎng)基法結果一致，鑒定的靈敏度和特異性與葡萄球菌血平板法這種常規(guī)檢驗方法無顯著差異。金葡菌顯色培養(yǎng)基對患者的不同樣品均能檢出，說明這種培養(yǎng)基受不同樣品中其他物質(zhì)的干擾較少。這種方法不但簡化了分離培養(yǎng)鑒定程序，而且加快了檢測的速度，對細菌性食物中毒患者得到及時和正確的治療爭取了時間，顯色培養(yǎng)基是有價值的分離鑒定平板，可以作為傳統(tǒng)平板的補充，顯色培養(yǎng)基在微生物檢測中的應用，可大大提高測效率，滿足應急需要[3-5]。

綜上所述，金葡菌顯色培養(yǎng)基有易于鑒別，選擇性好，優(yōu)勢遠大于普通培養(yǎng)基的選擇性，特別是突發(fā)公共衛(wèi)生事件處理中和有混合菌的金葡菌處理中，顯色培養(yǎng)基是首選的，并能取得較好的結果。將顯色培養(yǎng)基與傳統(tǒng)檢測方法結合對食源性致病菌進行快速檢驗已成為微生物快速檢測技術發(fā)展的重要方向。

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