糖尿病合并缺血性腦卒中患者NF-κB、IL-6及TNF-α水平的變化及臨床意義

魏 巍，周穎奇，張 征，徐爾理，李 嵐，單培佳，謝 濤

缺血性腦卒中是2型糖尿病常見且危重的大血管并發(fā)癥，死、殘率較高，患者生活質量低。研究發(fā)現，糖基化終末產物(AGEs)與其受體RAGE相結合，導致細胞內氧化應激，活化血清核因子-κB(NF-κB)，進而誘導炎癥因子趨化和細胞黏附因子募集與滯留，引起糖尿病大血管病變[1-2］。本研究檢測了2型糖尿病合并缺血性腦卒中患者NF-κB、白細胞介素-6(IL-6)、腫瘤壞死因子-α(TNF-α)的變化，探討上述細胞因子與腦卒中發(fā)病、發(fā)展和轉歸的關系，以及在2型糖尿病合并缺血性腦卒中患者預后中的預測價值，有助于篩查該類患者的高風險指標，幫助識別預后欠佳的高風險患者，進而加強針對性治療。

1 資料與方法

1.1 一般資料 2008年9月至2010年9月，我院收治的24例2型糖尿病合并缺血性腦卒中患者為糖尿病+腦缺血組，22例非2型糖尿病但伴急性缺血性腦卒中患者為腦缺血組，另有26例既無糖尿病、又無腦卒中的健康者為對照組，分析各組的臨床資料。糖尿病診斷均符合1999年WHO提出的糖尿病診斷標準，并且在入院前就確診為2型糖尿病，排除應激性血糖升高;腦卒中診斷均經頭顱MRI證實，符合1996年第2次全國腦血管病學術會議制定的診斷標準[3］。各組年齡、性別以及前2組的病情差異無統(tǒng)計學意義(P＞0.05)。見表1。

表1 各組一般資料(例)

1.2 標本收集與保存 2組患者均在腦卒中發(fā)病當天(0 d)，第1、2、3 天及1、4、26 周采集肘靜脈血，對照組在體檢后采血1次。標本采集后放入抗凝管，離心分離血清，－80℃保存待測。

1.3 檢測試劑與方法 用解放軍總醫(yī)院東亞放免技術研究所提供的人IL-6、TNF-α定量ELISA試劑盒測定外周血中IL-6、TNF-α水平;免疫化學方法檢測顯色的NF-κB在全部細胞中的百分含量(%)。采用免疫化學染色法檢測所有受試者外周血單核細胞中NF-κB水平。一抗選用兔抗NF-κB p65亞單位的多克隆抗體(美國Santa Cruz公司產品)，用SABC法試劑盒，DAB顯色試劑(北京中杉金橋生物公司)，操作按試劑盒說明書進行。每張切片隨機選取5個高倍視野，共計數500個細胞，百分含量(%)=100% ×胞核陽性的細胞數/細胞總數。

1.4 統(tǒng)計學處理 采用SPSS 11.0軟件進行統(tǒng)計學處理，計量資料以均數±標準差(±s)表示，計量資料組間比較采用t檢驗，多組間計量資料應用單因素方差分析及進一步的多重比較(LSD方法)，不同時點比較采用配對t檢驗，指標與病情程度的關系采用直線相關分析以及多元線性逐步回歸分析。P＜0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結果

糖尿病+腦缺血組和腦缺血組于發(fā)病初期(0 d至1周)IL-6含量均高于正常對照組，差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。發(fā)病2～26周時，IL-6水平緩慢下降，逐漸接近對照組。腦缺血組血漿TNF-α和NF-κB水平呈現相似的變化趨勢，即患病初期TNF-α和NF-κB水平明顯高于正常對照組，差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05);2周時水平逐漸降低，4周時接近正常水平。發(fā)病0 d至1周時，糖尿病+腦缺血組上述細胞因子水平均高于腦缺血組，2組比較差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。發(fā)病4周后，糖尿病+腦缺血組上述細胞因子含量與腦缺血組比較，差異無統(tǒng)計學意義(P＞0.05)。見表2。

表2 各組患者不同時間細胞因子水平(±s)

表2 各組患者不同時間細胞因子水平(±s)

注:與對照組比較a P＜0.05;與同期腦缺血組比較b P＜0.05

時間 組別 IL-6(μg/L) TNF-α(μg/L) NF-κB陽性(%)0 d 糖尿病 +腦缺血組 104±19ab 1.98±0.38ab 30.17±2.30ab腦缺血組 86±15a 1.30±0.29a 25.40±2.29a對照組 52±10 1.02±0.15 18.51±1.85 1 d 糖尿病 +腦缺血組 109±18ab 1.87±0.33ab 29.02±2.17ab腦缺血組 85±14a 1.31±0.21a 26.67±2.16a 2 d 糖尿病 +腦缺血組 102±16ab 1.41±0.29ab 27.91±2.06ab腦缺血組 83±13a 1.28±0.22a 24.33±1.89a 3 d 糖尿病 +腦缺血組 99±16ab 1.29±0.26ab 24.79±2.00ab腦缺血組 81±13a 1.27±0.20a 22.01±1.80a 1 周 糖尿病 +腦缺血組 89±13ab 1.19±0.18ab 22.58±1.97ab腦缺血組 77±12a 1.13±0.20a 19.97±1.83a 4 周 糖尿病 +腦缺血組 80±14 1.08±0.08 20.41±1.90腦缺血組 61±12 1.09±0.19 18.66±1.85 26周 糖尿病 +腦缺血組 73±13 1.07±0.12 19.55±1.81腦缺血組60±11 1.05±0.13 18.62±1.80

從表2可見，糖尿病+腦缺血組與腦缺血組血清 NF-κB、IL-6、TNF-α 表現相似的變化趨勢，發(fā)病初期顯著增高，發(fā)病2周時開始緩慢下降，腦缺血組4周時、糖尿病+腦缺血組26周時接近正常水平。血清 NF-κB、IL-6、TNF-α 水平與病情呈正相關(r=0.52、0.61、0.55)。

3 討論

隨著人們生活習慣和飲食結構的改變，2型糖尿病和缺血性腦卒中發(fā)病率均逐漸升高，合并2型糖尿病的缺血性腦卒中患者也顯著增多。2型糖尿病是影響缺血性腦卒中患者預后的主要危險因素之一，缺血性腦卒中則是糖尿病患者致殘、死亡的重要原因。兩者互相作用，相互關聯(lián)，成為威脅人們健康的主要因素。

NF-κB是廣泛存在于真核細胞中、能將信息從胞漿傳至髓核引起相應基因表達的重要轉錄因子，在機體免疫和炎癥反應、生產、發(fā)育和死亡等有關基因轉錄過程中具有重要的調控作用。研究發(fā)現，缺血性腦卒中與血漿炎性指標密切相關，炎癥在血管壁損傷中發(fā)揮著重要作用[4］。作為炎癥的重要指標，NF-κB 在血管中的重要作用已經得到公認[5］。已有研究[6］表明，NF-κB 激活后可促進分泌 IL-6、TNF-α、CRP等炎癥因子，從而誘導內皮細胞表達一系列黏附分子及趨化因子，又進一步導致外周血單核細胞激活，侵入血管內膜形成泡沫細胞，加速血管形成，誘發(fā)或加重腦卒中的發(fā)生與變化。此外，糖基化終末產物與其受體結合，可激活c-jun NH2-terminal kinase(c-JNK)，進而激活 NF-κB，引發(fā)一系列病變[7］。目前，糖尿病合并急性缺血性腦卒中患者NF-κB水平的變化情況與病情的關系尚缺乏詳細的臨床研究。本研究通過對2型糖尿病和/或腦缺血與 NF-κB、IL-6、TNF-α 水平關系的探討，分析與這些風險因子的關聯(lián)性，進而評價其臨床意義和評判價值。

IL-6是體內許多細胞產生的具有多種生物活性的刺激因子，是機體內復雜的細胞因子網絡中的重要成員，參與機體的各種病理生理過程，既具有促炎作用，也具有抗炎作用。IL-1、TNF-α、INF-γ 均可誘導IL-6的合成。在腦缺血或腦梗死急性發(fā)病期，由于患者血管內皮細胞損傷，腦組織破壞，聚集于內皮下活化的單核巨噬細胞、膠質細胞和神經元均可表達和合成IL-6及TNF-α，致使其在血液中的表達大量增加。故測定細胞炎癥因子IL-6和TNF-α的含量變化可判斷腦出血患者免疫反應的活性和應激反應的強度。

TNF-α不但能夠參與抗腫瘤及調節(jié)機體的免疫功能，介導炎癥介質的產生，參與機體的免疫反應，而且在凝血和血管內皮損傷反應中發(fā)揮重要作用，在缺血性腦卒中炎癥反應參與缺血性腦損傷[8］。TNF-α可上調血管內皮細胞和白細胞上的黏附分子的表達，加速活化的淋巴細胞進入腦內，加劇腦內炎癥反應。中性粒細胞與內皮細胞之間的黏附作用增強，附于微血管表面，堵塞微循環(huán)通道，影響組織的血供;活化的白細胞可釋放大量氧自由基蛋白水解酶，損傷局部血管，導致血管通透性增加，促進腦缺血與水腫的發(fā)生。

NF-κB、IL-6、TNF是急性期缺血性腦卒中的危險因素，它們的表達水平與病情發(fā)生、發(fā)展和轉歸以及應激反應的體溫、血糖、血纖維蛋白原水平呈正相關[1］。提示上述細胞因子在糖尿病伴缺血性腦卒中發(fā)病機制中具有重要作用。本研究入組病例樣本量相對較少，隨訪時間有限，今后還需加大樣本量進一步深入研究。

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