百會透曲鬢對腦出血急性期大鼠血清中VEGF、ICAM-1含量的影響

鄒偉,劉思妤,韓海偉,蔣大偉

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百會透曲鬢對腦出血急性期大鼠血清中VEGF、ICAM-1含量的影響

鄒偉1,劉思妤2,韓海偉2,蔣大偉2

(1.黑龍江中醫藥大學附屬第一醫院,哈爾濱 150040;2.黑龍江中醫藥大學,哈爾濱 150040)

通過觀察百會透刺曲鬢針刺法對腦出血急性期模型大鼠血清中血管內皮生長因子(VEGF)、細胞間黏附分子-1(ICAM-1)的動態變化的影響,探討頭穴透刺治療腦出血可能的作用機制。選取60只健康雄性Wistar大鼠,將其中54只隨機分為模型組、模型＋針刺組(針刺組)、模型＋茴拉西坦組(西藥組)3組。每組再分為出血后1 d、3 d和7 d3個時間點,每個時間點隨機分配6只大鼠,制備腦出血(ICH)大鼠模型,剩余6只大鼠作為備用。采取酶聯免疫吸附法(ELISA)測定血清中VEGF和ICAM-1水平。針刺組與模型組相比,大鼠血清內VEGF在3 d、7 d均有顯著上調(均＜0.05)。針刺組與西藥組相比,出血后1 d,西藥組對大鼠血清內VEGF上調顯著大于針刺組(＜0.05);出血后7 d,針刺組對大鼠血清內VEGF上調顯著大于西藥組(＜0.05)。針刺組與模型組相比,大鼠血清內ICAM-1在不同時間點均有顯著下調(＜0.05)。針刺組在出血后3 d、7 dICAM-1較西藥組有顯著下調(＜0.05)。百會透曲鬢針刺法可以調整腦出血大鼠血清中VEGF、ICAM-1的含量,是針刺百會透刺曲鬢治療腦出血的可能機理之一。

針刺療法;腦出血;穴,百會;穴,曲鬢;腦出血;血管內皮生長因子;細胞間黏附分子-1;大鼠

腦出血(ICH)指原發性非外傷性腦實質內出血,發病率約為每年60～80/10萬,在我國約占全部腦卒中的20%～30%[1],是腦血管病中病情較重、發病較急、變化多端的疾病,病死率與致殘率均較高。因此,尋找有效的治療方法顯得格外重要。血管內皮生長因子(VEGF)是一種具有肝素活性的生長因子,可以特異性地促進血管內皮細胞增殖,參與血管生成并提高血管通透性,是對血管新生有特異作用的生長因子。細胞間黏附分子-1(ICAM-1)是一種介導細胞相互黏附的膜表面糖蛋白,是一種促炎因子,可導致血管堵塞及損傷,在正常狀態下僅有低水平表達。本實驗采用自體血注入法制備腦出血大鼠模型,以針刺百會透曲鬢為干預方法,觀察針刺后腦出血急性期大鼠血清中VEGF、ICAM-1含量的變化規律,從腦出血區腦血管修復與損傷的角度,探討百會透曲鬢治療腦出血的作用機制,現報告如下。

1 材料與方法

1.1 實驗動物與分組

健康清潔級雄性Wistar大鼠60只,體重為(350±20)g,由黑龍江中醫藥大學實驗動物中心提供,實驗前適應性飼養l星期。造模前禁食12 h,禁水6 h。將其中54只隨機分為模型組、針刺組、西藥組3組。每組再分為1 d、3 d和7 d3個時間點,每個時間點隨機分配6只大鼠,制備ICH大鼠模型,剩余6只大鼠備用。

1.2 腦出血模型的制備

參照Rosenberg等[2]報道的方法制作ICH大鼠模型,將大鼠用10%水合氯醛(350 mg/kg)腹腔注射麻醉,俯臥位固定于立體定位儀上,取頭皮正中,備皮消毒,正中切口,骨膜剝離器剝離骨膜,暴露前囟及冠狀縫,取前內點旁開3.5 mm,后O.2 mm定點,用牙科鉆鉆開直徑為1.0 mm的圓孔,深達硬腦膜表面,鼠尾乙醇消毒,距尾端3 cm處剪斷鼠尾,用微量注射器取血50mL,將微量注射器固定于立體定位儀上,沿鉆孔垂直進針約6 mm,將未肝素化的自體血50mL以25mL/min速度推進尾殼核,留針約2 min,緩慢出針。留針期間乙醇棉球包扎鼠尾斷端傷口,術后局部噴灑慶大霉素,用牙科水泥封閉顱骨傷口,縫合頭皮,局部皮膚采用碘酚消毒,防止局部感染影響指標觀察。

1.3 篩選成功模型的方法

大鼠造模完成待大鼠清醒后,采用Berderson評分法[3]篩選成功模型動物,即輕抓大鼠尾巴,提起高于桌面10 cm,正常大鼠前爪伸直。0分為無神經功能缺損;1分為腦部病變對側腕關節、肘關節屈曲,肩內收屈曲;2分為上述體征＋向麻痹側推阻力下降;3分為活動時向麻痹側打圈(呈追尾狀)。以1～3分為準,將不符合者剔除,且增補相應數量大鼠。

1.4 實驗動物干預方法

1.4.1 模型組

于ICH造模后,給予類西藥組生理鹽水1 mL灌胃,每日3次。此外,類針刺組相同捆綁,每日30 min。

1.4.2 針刺組

于ICH造模后,大鼠捆綁固定。采用0.35 mm×25 mm毫針針刺患側百會透曲鬢穴,取穴方法參照華興邦等[4]制定的大鼠穴位圖譜,進針0.8寸,留針30 min,期間捻轉3次,每次5 min,要求以每分鐘200轉的速度捻針。針刺患側百會透曲鬢穴,每次30 min,每日1次。此外,給予類西藥組生理鹽水1 mL灌胃,每日3次。

1.4.3 西藥組

于ICH造模后,給予類針刺組相同捆綁每日30 min,并給予茴拉西坦稀釋液1 mL灌胃(按人:大鼠體重為200:1配置)治療,每日3次。

1.5 標本的采集

各腦出血組均于發病后1 d、3 d、7 d抽取大鼠在相應時相點過量水合氯醛麻醉,將大鼠仰臥固定在固定板上,剪去心前區部位的被毛,用碘酒、乙醇消毒皮膚,切開動物胸部,將注射器直接刺入心臟抽吸血液。取血至離心管后,將離心管室溫靜置1 h,后將其置于4℃冷藏過夜。于次日將離心管取出,于4℃、5000 r/min冷凍離心10 min后將上清液吸至新的離心管。

1.6 指標測定

采取酶聯免疫吸附法(ELISA)測定VEGF和ICAM-1水平。應用固相夾心法測定標本中VEGF和ICAM-1水平。先將VEGF和ICAM-1和生物素標記的抗體同時溫育。洗滌后,加入親和素標記的HRP。在經過溫育和洗滌,去除結合的酶結合物,然后加入底物AB,與酶結合物同時作用后產生顏色,顏色的深淺和樣品中的VEGF和ICAM-1的濃度成正比例關系。

1.7 統計學方法

采用SPSS17.0統計軟件包進行統計。所有數據采用(均數±標準差)表示,各組組間差異采用兩因素方差分析,兩兩比較采用檢驗。以＜0.05表示差異有統計學意義。

2 結果

表1 兩組不同時間點血清VEGF及ICAM-1比較 (±s)