膠體金法快速篩查HIV抗體的應用研究

李 雪 姚 勇 漆兆李 蔣 玲

（大英縣疾病預防控制中心，四川 大英 629300）

膠體金法快速篩查HIV抗體的應用研究

李 雪 姚 勇 漆兆李 蔣 玲

（大英縣疾病預防控制中心，四川 大英 629300）

目的探討膠體金法快速篩查HIV抗體的可行性和適用性。方法用膠體金法快速篩查測試對象口腔黏膜滲出液中HIV抗體，與ELISA法檢測相同測試對象血樣HIV抗體作對照。結果本組研究對象150例，用膠體金法快速篩查其口腔黏膜滲出液樣本的HIV抗體，陰性127例（陰性率84.7%），陽性23例（陽性率15.3%）；再用ELISA法檢測研究對象的血漿標本的HIV抗體，陰性129例（陰性率86.0%），陽性21例（陽性率14.0%），二者結果無顯著差異（P＞0.05）。結論用膠體金法檢測人類口腔黏膜滲出液樣本作為快速篩查HIV抗體是可行的，值得基層醫療機構推廣應用。

ELISA法；膠體金法；HIV抗體；口腔黏膜滲出液

艾滋病，即獲得性免疫缺陷綜合癥，英文名稱Acquired Immune Deficiency Syndrome，AIDS，是人類因為感染人類免疫缺陷病毒（Human Immunodeficiency Virus，HIV）后導致免疫缺陷，并發一系列機會性感染及腫瘤，嚴重者可導致死亡的綜合征。目前，艾滋病已成為嚴重威脅世界人民健康的公共衛生問題。抗HIV病毒抗體檢測、病毒培養、核酸檢測和抗原檢測是作為診斷手段使用的主要檢測方法[1]，采集測試對象的血清、血漿、濾紙干血斑、唾液和尿液樣品，應用ELISA方法檢測血清血漿中HIV抗體是最常用的方法。長期經靜脈注射吸毒者因淺表靜脈廣泛堵塞、娛樂場所女性因怕痛常拒絕抽血、3歲以下的嬰幼兒不配合采血等諸多原因導致采集血液標本相當困難，給監測工作帶來困難，甚至存在監測盲區。選用唾液和尿液作為初篩檢測樣本已成為許多學者探索的課題。作者采用膠體金法檢測150例測試對象口腔黏膜HIV抗體，與ELISA法檢測血樣標本HIV抗體作對照，兩種檢測方法的結果無顯著差異（P＞0.05），現分析報道如下。

1 材料與方法

1.1 標本

本組選擇我中心管理的HIV確認病例20例，轄區內娛樂場所100名女性工作人員和30名艾滋病自愿咨詢篩查者作為研究對象。

1.2 檢測試劑

見表1。

表1 檢測試劑一覽表

1.3 檢測儀器

見表2。

表2 使用檢測儀器一覽表

1.4 方法

采集150例研究對象口腔黏膜滲出液樣本，用膠體金法作HIV抗體檢測；對娛樂場所100名女性工作人員、30名艾滋病自愿咨詢篩查者再抽血用ELISA法檢測HIV抗體。對口腔黏膜滲出液HIV抗體陽性者再用ELISA法檢測血樣；ELISA法檢測HIV抗體陽性者按全國艾滋病檢測技術規范（2009年修訂版）規定復試和送上級艾滋病確認實驗室確認。

2 結 果

本組20例已確認的艾滋病感染者用膠體金法檢測口腔黏膜滲出液均呈HIV抗體陽性，對照線和陽性檢測線均清晰明顯可見。娛樂場所100名女性工作人員和30名自愿咨詢檢測者用膠體金法檢測口腔黏膜滲出液檢測出HIV抗體陽性3份，HIV抗體陰性127份；用ELISA法檢測HIV抗體陰性129份，HIV抗體陽性1份；陽性病例送上級實驗室做艾滋病確認，確認為HIV-1抗體陽性。檢測結果及分析詳見表3、表4。

3 討 論

3.1 原理及方法

本試驗是利用側向流動免疫反應的原理進行的。試劑主要由檢測試紙條，樣本緩沖液組成。在硝酸纖維膜的檢測區包被了HIV-1 gp41和HIV-2 gp36重組抗原，在對照區包被了羊抗人IgG F（ab，）2片段多抗。檢測時，用口腔拭子擦拭受試者的上、下牙齦線，然后將口腔拭子放入約1000uL樣本緩沖液的試管里，在試管內混合均勻，將口腔拭子內的液體擠干后，扔掉拭子。將檢測試紙條檢測端垂直插入裝有樣本混合液的試管里，試紙上的淡紅色蛋白A-膠體金標記物會溶解，樣本中的IgG同蛋白A/膠體金粒子結合在一起，形成“IgG-蛋白A-金”復合物，“IgG-蛋白A-金”復合物沿著試紙條向上方移動，首先到達包被了HIV抗原的檢測區。如果樣本中含有HIV抗體，“IgG-蛋白A-金”復合物將同抗原結合，并在檢測線上滯留下來，形成一條淡紅色的線，這表示陽性結果。線條顏色的深淺同樣本的抗體數量沒有比例關系。檢測區如果沒有帶顏色的線條表示樣本中不含HIV抗體，游離的“IgG-蛋白A-金”復合物繼續向紙條上方移動，到達試紙的對照區。對照區包被了羊抗人IgGF（ab’）2片段，固定在試紙條的對照線上。“IgG-蛋白A-金”復合物將同羊抗人IgGF（ab’）2片段結合在一起而富集在對照線上，形成一條淡紅色的線。對照線的出現證明試紙條檢測功能正常。無論樣本中是否含有HIV-1/2抗體，在有效實驗中，試紙條的對照區都應當出現淡紅至紫色的對照線。樣本繼續移動，通過對照區進入吸收區。吸收區的作用是吸附剩余的“IgG-蛋白A-金”復合物，使其在試紙條內移動，并消除本底的顏色[2]。

表3 ELISA法和膠體金法檢測150例樣本結果統計表

表4 膠體金法快速篩查HIV抗體結果分析表

3.2 優勢及適用性

本品是基于免疫層析技術通過手工操作、肉眼讀取結果、20～45min即可定性得出檢測結果的快速診斷試劑。有學者研究表明：膠體金法采用層析免疫技術，標記物不是酶而是膠體金，同時檢測標本不需要儀器，因而影響檢測效果的條件比較少，其敏感性和特異性較高[3-4]。本組資料表明人類免疫缺陷病毒抗體口腔黏膜滲出液診斷試劑（膠體金法）敏感性和特異性分別為：91.3%、98.5%，且在歷次質控考核中均未出現過假陰性結果。作者認為：人類口腔黏膜滲出液檢測HIV抗體具有：不需要專業設備和固定場所；使用方便、快速，敏感性、特異性均高；人群普遍容易接受，既適合大規模普查，又適合特殊人群篩查，也適合基層醫院和基層實驗室快速篩查，具有廣闊應用前景；對初篩陽性者仍然要取血樣按全國艾滋病檢測技術規范做復試和確認實驗。

[1] 蔣巖,汪寧,李敬云,等.全國艾滋病檢測技術規范(2009年修訂版)[S].2009:1.

[2] 金玉星.聊城市艾滋病篩查實驗室HIV抗體檢測資料分析[J].中國醫藥導報,2010,7(8):129-130.

[3] 張帥清.膠體金快速檢測試劑篩查HIV抗體效果觀察[J].中國衛生檢驗雜志,2008,18(5):935,940.

[4] 劉萃紅,朱琳,宋一帆.HIV早期檢測的應用研究[J].中國現代醫生,2008,46(34):7-8.

The Study of Practical HIV-Antibody for Rapid Screening with Colloidal Gold Method

LI Xue, YAO Yong, QI Zhao-Li, JIANG Ling

(Daying Center for Disease Control and Prevention, Daying 629300, China)

ObjectivesThis article is aimed to study the adaptability and feasibility of HIV-antibody for rapid screening with colloidal gold method.MethodsCompared with the method of ELISA to the blood sample for HIV-antibody, we collected the sample from the exudation of the oral mucosa with colloidal gold method for rapid screening to the HIV-antibody.ResultsAll cases of 150, we had analyzed with the method of ELISA and colloidal gold for the HIV-antibody, which were negative in 127 cases (84.7%) and positive in 23 cases (15.3%) in rapid screening with colloidal gold method for the exudation of oral mucosa while were negative in 129 cases (86.0%) and positive in 21 cases (14.0%) in the method of ELISA for the blood samples, found there is no obvious difference (P＞0.05).ConclusionThe method of rapid screening HIV-antibody with colloidal gold for the exudation of oral mucosa is worth to popularize and is feasibility in the basic medical unit.

The method of ELISA；Colloidal gold method；HIV-antibody；Exudation of oral mucosa

R512.91

B

1671-8194（2013）18-0043-02