鈣劑和硒對飲茶型氟中毒小鼠肝、腎病理形態學改變的影響

李全亮 譚 霞 楊湘彬 黃 巍 劉 麗

（長沙醫學院科研實驗中心，湖南 長沙 410219）

鈣劑和硒對飲茶型氟中毒小鼠肝、腎病理形態學改變的影響

李全亮 譚 霞 楊湘彬 黃 巍 劉 麗

（長沙醫學院科研實驗中心，湖南 長沙 410219）

目的 研究鈣劑和硒對飲茶型氟中毒小鼠肝、腎病理形態改變的影響，從而為防治飲茶型氟中毒提供科學依據。方法以常規飼料飼養小鼠，并給予含氟量為100mg/L的磚茶水，為期3個月，建立飲茶型氟中毒小鼠的病理模型；去除自然死亡的小鼠，按體質量隨機分成4組：對照組，磚茶組，鈣劑組，硒組。對照組飲用自來水，磚茶組飲用含氟量為100mg/L的磚茶浸出液，鈣劑組飲用2mg/L的鈣劑和磚茶浸出液，硒組飲用2mg/L的亞硒酸鈉溶液和磚茶浸出液，一個月后處理實驗動物，通過組織病理學觀察鈣劑和硒對飲茶型氟中毒小鼠肝、腎病理形態學改變的影響。結果硒組小鼠肝、腎細胞組織的后繼損傷較輕，而鈣劑組肝，腎病理損傷較重。結論硒對飲茶型氟中毒小鼠的肝、腎細胞的后繼損傷有一定的保護作用，但不能明顯減輕已造成的小鼠肝、腎病理形態的改變，證明和在一定程度上可拮抗氟的毒性作用，減輕氟中毒病情，減緩氟中毒的進一步的發展。而鈣劑加重氟中毒的發展。

鈣劑和硒；飲茶型氟中毒

飲茶型氟中毒是我國特有的一種氟中毒類型。主要是由于攝入大量的含氟量極高的磚茶而引起的一種慢性中毒[1]。飲茶型氟中毒癥狀的出現及對人體的損害是一個緩慢而不易為人察覺的過程。主要與少數民族的飲茶習慣有關。少數民族的飲茶方式是將高氟含量的磚、邊茶用水或奶進行煎煮，每餐必用其伴食。磚、邊茶是用茶的粗老葉片、葉梗加工而成的，其氟的含量是一般商品的100～200倍[2]。茶葉經沸水浸泡后，葉片中的氟迅速溶出[3]。這使得茶氟的溶出量和攝入量均顯著增加。若長期飲用，再加上飲水中的氟，攝入體內的氟就會超過標準（＞50mmol/L或＞4mg/d），引起慢性中毒，而氧自由基在這個過程中起著重要的作用，它的增加會導致或加劇氟中毒的產生，甚至導致氧中毒[4]，從而影響人體各個器官系統的結構和功能。通過復制飲茶型氟中毒小鼠病理模型進行動物實驗，研究小鼠在應用鈣劑和硒劑處理后肝腎組織病理形態的變化及差別，從而了解硒劑是否可以對抗氟中毒的氧自由基，為臨床預防和治療飲茶型氟中毒提供實驗依據和理論基礎。

1 材料與方法

1.1 實驗動物

長沙醫學院機能實驗室提供的大鼠58只，體質量60～100g，雌雄各半。基礎飼料和自來水適應性飼養1周，去除自然死亡的大鼠后按體質量隨機分為4組，每組10只，分籠飼養。

1.2 飼料

飼料是由長沙醫學院科研實驗室提供的。飼料的營養保證值是：水分≤10%、粗蛋白≥21%、粗脂肪≥4%、粗纖維≤5%、粗灰分≤8%、鈣1.0～1.8、磷0.6～1.2、賴氨酸≥1.32%、蛋氨酸±胱氨酸≥0.78%、飼料含氟量為6.32mg/kg。

1.3 飲水

實驗組小鼠飲用含氟量為100mg/L。每天進行灌胃。對照組飲用自來水，氟含量為0.425 mg/L。

1.4 實驗方法

圖1 小鼠肝細胞×400（A：對照組，B：磚茶組，C：鈣劑組，D：硒組）

表1 動物分組及處理因素

1.4.1 動物分組及處理因素見表1。實驗期間全部動物均自由進食水，實驗期限為期3個月。

1.4.2 光鏡標本制備

取小鼠肝臟和腎臟，10%甲醛固定，梯度蔗糖溶液脫水，冰凍切片包埋劑，冰凍切片，HE染色后供組織學觀察。

2 結 果

2.1 光鏡下肝臟和腎臟組織器官的病理形態學改變

2.1.1 肝臟

肝細胞鎖排列紊亂，肝細胞濁腫變性，部分肝細胞胞漿透明，成氣球樣變，可見大量脂肪空泡，肝細胞輪廓不清，有的細胞膜消失并有核碎裂。各實驗組肝細胞受損情況見圖1，與對照組相比統計結果見表2。

結合圖1各實驗組肝細胞受損情況：鈣劑組＞氟茶組＞水組＞硒組與對照組相比，在應用鈣劑和硒處理后肝細胞受損情況統計結果見表2。

表2 鈣劑和硒對飲茶型氟中毒小鼠肝細胞受損情況的比較

在應用鈣劑和硒后小鼠肝細胞損傷差異有統計學意義（根據Fisher確切概率法計算P＜0.05）

2.1.2 腎臟

磚茶組小鼠腎小球和腎小管尚能分清，但是近曲小管上皮細胞核明顯萎縮，漿核比例增大。細胞核形態不一，呈橢圓形，腎形，三角形，排列紊亂，個別可見核固縮，部分細胞核向官腔突出，有的已位于官腔內，鈣劑組小鼠近曲小管上皮細胞核改變同磚茶組，但是程度略重。細胞核形態較磚茶組好。硒組小鼠近曲小管上皮細胞核形態較好，細胞輕度腫脹。如圖2所示，統計結果見表3。

圖2 小鼠腎細胞×400（A：對照組，B：磚茶組，C：鈣劑組，D：硒組）

結合圖2各實驗組肝細胞受損情況：鈣劑組＞氟茶組＞水組＞硒組與對照組相比，在應用鈣劑和硒處理后肝細胞受損情況統計結果見表3。

表3 鈣劑和硒對飲茶型氟中毒小鼠腎細胞受損情況的比較

在應用鈣劑和硒后小鼠腎細胞損傷差異有統計學意義（根據Fisher確切概率法計算P＜0.05）

3 討 論

氟中毒的治療是當今氟中毒研究領域中一個較為關注的問題。飲茶型氟中毒已成為嚴重危害我國西部少數民族地區人群健康的公共衛生問題。解決該類型的氟中毒主要從兩個方面入手：①降低茶的含氟量；②加強營養。本實驗主要從營養方面出發，研究鈣劑與硒兩種微量元素對中毒小鼠肝腎病理形態學的影響。與對照組相比，通過光鏡下的對比觀察可以看到硒組對肝腎組織的損傷最小，自來水次之，氟茶組較小，鈣劑最甚。其原因可能是因為氟中毒時，氟通過自由基的作用造成肝腎損害，硒是抗氧化劑，可以是自由基減少，減輕氟對組織的損害。而鈣劑加重自由基的作用對肝腎造成損傷，其具體作用機制還有待進一步研究。

[1] 高彥輝,孫殿軍,周令望,等.亞慢性氟中毒對大鼠骨組織誘導型一氧化氮合酶表達的影響[J].中國地方病學雜志,2008,27(2):124.

[2] 孫玉富,滕國興,趙新華.地方性氟中毒病區劃分指標和標準的研究進展[J].中國地方病學雜志,1996,15(3):169-170.

[3] Duck worth SC,Duck worth RM.The ingestion of fluoride in tea [J].BrDentJ,1978,145(12):368-370.

[4] Rzeuski R,chlubek D,Machoy Z.Interaction of fluoride and biological free radicals reaction[J].Fluoride,1998,31(1):43-45.

R155.3

B

1671-8194（2013）18-0094-02

湖南省教育廳大學生研究性學習和創新性實驗資助項目（編號：2012441）