假藿香不同入藥部位中齊墩果酸的含量測定

呂錫亮姬生國*

（1 河南省職工醫(yī)院，河南 鄭州 450002；2 廣東藥學院中藥學院，廣東 廣州 510006）

假藿香不同入藥部位中齊墩果酸的含量測定

呂錫亮1姬生國2*

（1 河南省職工醫(yī)院，河南 鄭州 450002；2 廣東藥學院中藥學院，廣東 廣州 510006）

目的對民間中草藥假藿香不同入藥部位中齊墩果酸的含量進行進行比較，以確定適宜的入藥部位。方法采用RP-HPLC法測定。色譜柱：ODS-C18色譜柱（4.6mm×250mm），流動相：甲醇-0.5%磷酸水（90∶10）；流速：1.0mL/min；柱溫：25℃；檢測波長：210nm。結(jié)果其根、莖、葉中含量分別為0.02106%，0.02681%，0.03206%。結(jié)論葉中含量比根中高0.011%，比莖中高0.00525%，莖和根含量相近，在藥材重量上莖和根占85%以上，故建議以葉入藥為佳。該方法快速、準確、靈敏度高、重現(xiàn)性好。

蛇百子；齊墩果酸；HPLC

1 儀器與材料

1.1 儀器及試劑

LC-2010AHT高效液相色譜儀（日本島津公司），1/10萬分析天平（日本島津公司）SK250LH超聲波清潔器（超聲功率為100W，上海科導(dǎo)超聲儀器有限公司），齊墩果酸對照品（中國藥品生物制品檢定所，批號：110709-200505），試驗所用試劑除流動相為色譜純外其余均為分析純。

1.2 藥材

實驗材料采集于廣州市廣州大學城廣東藥學院藥用植物園，經(jīng)廣東藥學院中藥學院姬生國教授鑒定為山香Hyptis suaveolens (L.) Poit。藥材陰干，打粉，過篩備用。

2 方法與結(jié)果

表1 齊墩果酸加樣回收率數(shù)據(jù)表（n=6）

2.1 色譜條件[3,4]

色譜柱：迪馬Kromasil ODS柱（4.6mm×250mm，5μm）；流動相：甲醇-0.5%磷酸水（90∶10）；檢測波長：210nm；流速：1mL/min；柱溫：30℃；進樣量：20μL。

2.2 方法學考察

2.2.1 線性范圍考察

精密量取上述對照品溶液0.25、0.5、1.0、1.5、2.0、2.5mL，定容至5mL容量瓶中，配成系列濃度為0.05、0.1、0.2、0.3、0.4、0.5mg/mL的齊墩果酸對照品溶液。以齊墩果酸濃度為橫坐標(x)，峰面積為縱坐標(y)作標準曲線,得回歸方程：y=107x-1832.3，r=0.9996，齊墩果酸含量在0.05～0.5mg/mL范圍內(nèi)呈良好線性關(guān)系。

2.2.2 精密度考察

儀器精密度度實驗：取齊墩果酸對照品貯備液，在上述色譜條件下，連續(xù)重復(fù)進樣5次，以對照品峰面積計算偏差，RSD=0.40%。方法重現(xiàn)性實驗：按供試品溶液的制備方法配制齊墩果酸樣品溶液，連續(xù)重復(fù)進樣5次，測定齊墩果酸峰面積值，RSD=0.40%。

2.2.3 穩(wěn)定性考察

將上述齊墩果酸中等濃度的對照品溶液在第0、1、4、8、12、24h連續(xù)進樣3次，分別測定峰面積，RSD=0.30%，齊墩果酸在24h內(nèi)基本穩(wěn)定。

2.2.4 加樣回收率試驗

精密量取已測定含量齊墩果酸含量的葉樣品溶液6份，分別精密加入同一濃度的齊墩果酸對照品溶液，按供試品溶液的制備方法制備，在上述色譜條件下，測得齊墩果酸的回收率平均為98.93%，RSD為0.81%（表1）。

2.3 供試品溶液的制備與測定

2.3.1 對照品溶液的制備

精密稱取齊墩果酸對照品0.0100g，加甲醇（色譜純）溶解并定容至10mL，即為1mg/mL的對照品溶液。

2.3.2 供試品溶液的制備

精密稱取藥材根、莖、葉粗粉各5g，加95%乙醇45mL超聲提取，過濾，濾液于旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀上蒸干后直接加甲醇定容至5mL。

2.3.3 樣品的測定

取根莖葉三部位的樣品，按2.4.2項下制備樣品溶液，根據(jù)測定成分的線性范圍進樣，測定峰面積，由對應(yīng)的線性方程計算其含量，結(jié)果見表2。對照品溶液及樣品溶液的HPLC圖見圖1。

3 討 論

3.1 假藿香中含有齊墩果酸和熊果酸，齊墩果酸和熊果酸是同分異構(gòu)體，由于結(jié)構(gòu)的相似性，性質(zhì)極為相近，在進行液相分離時其保留時間基本一致，因此會出現(xiàn)很難分離。通過大量的實驗，我們優(yōu)選了齊墩果酸的HPLC條件。

3.2 樣品提取方法的選擇：用超聲波提取法提取齊墩果酸，溶劑性質(zhì)、溶劑量、溶劑濃度、超聲時間、所加藥材的質(zhì)量和藥材的粉碎度對齊墩果酸含量均有影響。本實驗采用95%乙醇9倍的量作為根、莖、葉的提取溶劑，均超聲提取2h，提取效果良好。

表2 樣品中測定的齊墩果酸含量結(jié)果（n=6）

圖1 對照品及蛇百子樣品高效液相色譜圖

3.3 色譜條件的選擇及優(yōu)化[5,6]：熊果酸和齊墩果酸是同分異構(gòu)體，蛇百子同時含有這兩個成分，在葉中較難分離。本實驗嘗試了三種色譜柱：①在Phenomenex Luna C18（2）150×4.6mm；②在Waters MS C185μm 250×4.6mm；③Dikma PLATISIL ODS 5μm 250×4.6mm。結(jié)果前兩種色譜柱分離效果均不理想，因此，選用Dikma PLATISIL ODS 5μm 250×4.6mm。試驗考察了以下色譜系統(tǒng)：甲醇-水，甲醇-磷酸水，乙腈-水，乙腈-磷酸水，所得的色譜圖以甲醇-0.5%磷酸（90∶10）洗脫為最佳。

3.4 假藿香為一年生草本植物，植株高可到達2米，其莖、根粗壯，莖和根的重量占整株植物重量的85%以上，由實驗結(jié)果可見，其根、莖、葉中含量分別為0.02106%，0.02681%，0.03206%。葉中含量比根中高0.011%，比莖中高0.00525%，由于，齊墩果酸為其主要有效成分，故此，建議入藥用葉。

[1] 全國中草藥匯編編寫組.全國中草藥匯編(下冊)[M].北京:人民衛(wèi)生出版社,1978:65-66.

[2] 國家醫(yī)藥管理局中草藥情報中心站編.植物藥有效成分手冊[M].北京:人民衛(wèi)生出版社,1986:427-428.

[3] 江記武,肖慶祥.植物藥有效成分手冊[M].北京:人民衛(wèi)生出版社,1986.

[4] 王天勇,楊文遠.反相高效液相色譜法測定七種中藥中齊墩果酸[J].分析測試學報,1995,14(4):82-84.

[5] 鄭茂,范博,丁紅,等.高效液相色譜法測定不同產(chǎn)地白花蛇舌草中齊墩果酸和熊果酸的含量[J].中國藥物與臨床,2010,10(3): 261-262.

[6] 劉偉,丁海杰.HPLC測定夏枯草中熊果酸、齊墩果酸、迷迭香酸的含量[J].中成藥,2008,30(4):577-580.

Determination of Oleanolic Acid in Hyptis Suaveolents Different Vegetative Organs

LV Xi-liang1, JI Sheng-guo2

(1 Henan Province Worker's Hospital, Zhengzhou 450002, China; 2 School of Traditional Chinese Medicine, Guangdong Pharmaceutical University, Guangzhou 510006, China)

ObjectiveTo determinate the content of oleanolic acid in Hyptis suaveolents by RP- HPLC, and Choose appropriate medicinal organs.MethodsThe oleanolic acid was determined by HPLC, Column: ODS-C18(250×4.6mm), mobile phase: methanol-water (with 0.5% H3PO4), detection at 210nm, flow rate: 1.0mL/min, column temperature: 25℃.ResultsThe determination of oleanolic acid was 0.02106% in roots,0.02681% in stems, 0.03206% in leaves.ConclusionThe content in leaf than root high 0.011%, more than 0.00525% of the stem, high content of stems and roots. Stem and root content close, in medicinal materials on stem and root weight 85%, therefore, Suggest to clinical medicinal leaves as well. The established method is quick, accurate, sensitive and well repeated.

Hyptis suaveolents; Oleanolic acid; HPLC假藿香為唇形科植物山香Hyptis suaveolens (L.) Poit的干燥全草，別名逼死蛇、毛老虎，黃黃草、大還魂，主產(chǎn)于廣東、廣西、臺灣等地。全草入藥，是我國南方地區(qū)廣泛使用的中草藥。其性辛、溫，味苦，有疏風散瘀，解毒定痛之功效，用于治療感冒，風濕，濕疹，跌打創(chuàng)傷等癥[1,2]。我院以此藥材為主藥，正在研制治療濕疹的外用制劑，由于該植物植株高大，莖和根較重，大量運輸成本較大，故此，對其不同入藥部位中的齊墩果酸進行測定，為入藥部位的選擇以及以后研究制劑的質(zhì)量控制提供參考。

R927.2

B

1671-8194（2013）17-0056-02

*通訊作者：E-mail：shengguo_ji@yahoo．cn