石榴茶提取物對(duì)小鼠抗疲勞抗氧化作用的研究

劉志國，趙文亞，劉洪波，張清，鮑娟，杜文婭

（1.棗莊學(xué)院體育學(xué)院，山東棗莊 277160；2.棗莊學(xué)院生命科學(xué)學(xué)院，山東棗莊 277160）

近年來有研究證明，很多植物性食品如綠茶、普洱茶等的提取物能有效地清除運(yùn)動(dòng)時(shí)機(jī)體產(chǎn)生的自由基，提高體內(nèi)糖原含量，增強(qiáng)機(jī)體的運(yùn)動(dòng)能力。

茶是一種常見的飲品，有關(guān)抗疲勞抗氧化作用的研究，杜云研究了茶多酚對(duì)運(yùn)動(dòng)大鼠抗疲勞作用的實(shí)驗(yàn)研究[1]，張冬英等研究了普洱茶熟茶抗疲勞作用研究[2]，梁勇等研究了云南綠茶抗疲勞作用的研究[3]。作為茶葉中的的一個(gè)特有品種，石榴茶以其清香醇厚的口感和良好的保健功能深受廣大消費(fèi)者的喜愛[4]。用水把石榴茶中的有效成分提取出來即石榴茶提取物，目前對(duì)于石榴茶提取物抗氧化抗疲勞作用的研究文獻(xiàn)還比較少。本實(shí)驗(yàn)擬以石榴茶提取物為原料，研究其對(duì)小鼠運(yùn)動(dòng)能力和心肌抗氧化能力的影響，為深入研究石榴茶的保健作用，推動(dòng)石榴茶產(chǎn)業(yè)的發(fā)展提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 石榴茶提取物

采用購至兩個(gè)廠家的石榴茶（山東棗莊榴園榴葉茶廠和嶧縣榴茶廠）進(jìn)行制備。

1.1.2 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

昆明種小鼠，雌雄各40 只，體重（20±2）g，購自濟(jì)南立秋實(shí)驗(yàn)動(dòng)物繁殖中心，動(dòng)物合格證號(hào)SCXK（魯）20110024。

1.1.3 試劑

SOD 試劑盒、MDA 試劑盒、GSH-Px 試劑盒、LG試劑盒、MG 試劑盒，均購自上海恒遠(yuǎn)生化試劑有限公司。

1.2 方法

1.2.1 石榴茶提取物的制取

將石榴茶粉碎，沸水浸提，茶水之比為1 ∶20，然后進(jìn)行減壓濃縮，制成石榴茶提取液，其濃度為1 ∶1，降至室溫后低溫冷藏[5]。

1.2.2 動(dòng)物給藥及分組

小鼠進(jìn)行群養(yǎng)，每日喂食專用鼠飼料（山東大學(xué)醫(yī)學(xué)院動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心提供），自由飲用純凈水。6 d 后，按照每組20 只進(jìn)行實(shí)驗(yàn)把小鼠隨機(jī)分為4 組：對(duì)照組、石榴茶提取物低、中、高劑量組，雌雄各半。根據(jù)《保健食品功能學(xué)評(píng)價(jià)程序和檢驗(yàn)方法》的要求，在小鼠實(shí)驗(yàn)中其中一個(gè)劑量組的劑量應(yīng)當(dāng)是人體推薦劑量的5 倍，且最高劑量不超過人體推薦劑量的30 倍[6]。低、中、高劑量組分別給予石榴茶提取物0.5、1.0、2.0 g/kg，相當(dāng)于推薦人體劑量的5 倍、10 倍、20 倍。采取灌胃法，在每天11：00～12：00 間，對(duì)照組小鼠每天分別一次性灌胃蒸餾水，低、中、高實(shí)驗(yàn)組灌服和相應(yīng)量的石榴茶提取物溶液，其余時(shí)間自由進(jìn)食飲水。每5 d 稱體重一次，然后根據(jù)體重灌胃，持續(xù)30 d。

1.2.3 力竭游泳時(shí)間及心肌生化指標(biāo)的測(cè)定

小鼠在末次灌胃20 min 后，按各自體重的5%負(fù)重（尾部細(xì)棉繩系上相應(yīng)重量的鉛皮）游泳，投入溫度（25±1）℃，深35 cm 的水池中，記錄小鼠從入水至不再浮出水面所持續(xù)的時(shí)間。第一批4 個(gè)組別的實(shí)驗(yàn)各取10 只小鼠平行進(jìn)行，以減少系統(tǒng)誤差。采用斷頭法迅速處死力竭小鼠，生理鹽水沖洗取出的心臟、然后濾紙吸干水分，再用生理鹽水制成10%的均勻漿液，倒入離心管，3 000 r/min 離心12 min，然后冷藏，按照標(biāo)準(zhǔn)測(cè)定方法嚴(yán)格操作，測(cè)定心肌中GSH-Px、SOD、MDA 的含量。

1.2.4 運(yùn)動(dòng)后肝臟和后腿肌肉中生化指標(biāo)的測(cè)定

第二批每組10 只小鼠在末次灌胃20 min 后，在水溫（25±1）℃的水中游泳10 min，然后立即斷頭處死，迅速取出小鼠的肝臟和后腿肌肉，用生理鹽水沖洗、濾紙吸干水分，然后用生理鹽水制成10%的勻漿液，倒入離心管，3 000 r/min 離心12 min，取上清液，按照試劑盒說明嚴(yán)格操作，測(cè)定肝臟中LG 和后腿肌肉中MG 的含量。

1.3 統(tǒng)計(jì)分析

2 結(jié)果與分析

2.1 石榴茶提取物對(duì)小鼠力竭游泳時(shí)間的影響

石榴茶提取物對(duì)小鼠力竭游泳時(shí)間的影響，見表1。

表1 石榴茶提取物對(duì)小鼠力竭游泳時(shí)間的影響（，n=10）Table 1 The influence of pomegranate tea extract on the swimming time in exhausted rats

小鼠負(fù)重游泳能力與抗疲勞效果呈正相關(guān)，能反映小鼠運(yùn)動(dòng)水平的高低。由表1 可知，小鼠負(fù)重游泳時(shí)間較對(duì)照組要長。低劑量組和對(duì)照組相比有顯著性差異（P＜0.05），中劑量組和高劑量組與對(duì)照組相比有極顯著性差異（P＜0.01）。表明石榴茶提取物能不同程度延長小鼠游泳的時(shí)間，提高抗疲勞能力，其中以高劑量組效果最好。

2.2 石榴茶提取物對(duì)小鼠運(yùn)動(dòng)后SOD、MDA 和GSHPx 含量的影響

石榴茶提取物對(duì)小鼠運(yùn)動(dòng)后SOD、MDA 和GSHPx 含量的影響，見表2。

表2 石榴茶提取物對(duì)小鼠運(yùn)動(dòng)后SOD、MDA 和GSH-Px 含量的影響（，n=10）Table 2 The influence of pomegranate tea extract on SOD，MDA and GSH-Px in post-exercise rats

有研究證明，小鼠體內(nèi)SOD、GSH-Px 的含量與抗疲勞效果呈正相關(guān)，MDA 的含量與抗疲勞效果呈負(fù)相關(guān)。實(shí)驗(yàn)結(jié)果從表2 可以看出，SOD 在實(shí)驗(yàn)組中小鼠心肌中的含量與低、中、高劑量組相比均有增高趨勢(shì)，分別增加了4.15%、8.99%和19.09%，其中低劑量組和對(duì)照組呈顯著性差異（P＜0.05），中、高劑量組均和對(duì)照組呈極顯著性差異（P＜0.01）；與對(duì)照組相比，實(shí)驗(yàn)組中MDA 的含量依次降低了0.35%、4.95%、12.01%，其中，中、高劑量組和對(duì)照組相比分別呈顯著性差異（P＜0.05）和極顯著性差異（P＜0.01）；與對(duì)照組相比，低、中、高劑量組中GSH-Px 的含量依次提高了10.94 %、44.53%、74.22%，其中低劑量組和對(duì)照組呈顯著性差異（P＜0.05），中、高劑量組和對(duì)照組呈極顯著性差異（P＜0.01）。實(shí)驗(yàn)表明，石榴茶提取物對(duì)于提高心肌的抗氧化能力有較好地促進(jìn)作用。

2.3 石榴茶提取物對(duì)小鼠運(yùn)動(dòng)后LG 和MG 含量的影響

石榴茶提取物對(duì)小鼠運(yùn)動(dòng)后LG 和MG 含量的影響，見表3。

表3 石榴茶提取物對(duì)小鼠運(yùn)動(dòng)后LG 和MG 含量的影響（，n=20）Table 3 The influence of pomegranate tea extract on LG and MG in post-exercise rats

體內(nèi)糖的主要儲(chǔ)備形式是肝糖原和肌糖原，其量的多少反映小鼠的運(yùn)動(dòng)能力，決定抗疲勞效果。實(shí)驗(yàn)證明，由表3 所示，與對(duì)照組相比，實(shí)驗(yàn)組中小鼠肝臟中LG 的含量依次增高，其中低劑量組呈顯著性差異（P＜0.05），中、高劑量組均呈極顯著性差異（P＜0.01）；與對(duì)照組相比，實(shí)驗(yàn)組低、中、高劑量組后腿肌肉中MG 的含量均有增高，其中低劑量組呈顯著性差異（P＜0.05），中、高劑量組和對(duì)照組均呈極顯著性差異（P＜0.01）。實(shí)驗(yàn)表明，石榴茶提取物能較好地提高肝臟中LG 和后腿中MG 的含量，提高小鼠的運(yùn)動(dòng)和抗疲勞能力。

3 討論

運(yùn)動(dòng)性疲勞是機(jī)體運(yùn)動(dòng)能力下降的現(xiàn)象。大強(qiáng)度運(yùn)動(dòng)后小鼠生理生化指標(biāo)會(huì)發(fā)生變化，產(chǎn)生大量自由基，是造成運(yùn)動(dòng)性疲勞的重要因素。為了提高運(yùn)動(dòng)能力，可從增加體內(nèi)抗氧化劑和糖原含量來抑制運(yùn)動(dòng)性疲勞[7-8]。通過石榴茶提取物對(duì)小鼠抗疲勞作用的研究，根據(jù)《保健食品功能學(xué)評(píng)價(jià)程序和檢驗(yàn)方法》結(jié)果判定原則，“若1 項(xiàng)以上（含1 項(xiàng)）運(yùn)動(dòng)試驗(yàn)和2 項(xiàng)以上（含2 項(xiàng)）生化指標(biāo)為陽性，即可以判斷該受試物具有抗疲勞作用。”，實(shí)驗(yàn)顯示：石榴茶提取物能增強(qiáng)小鼠游泳能力，提高心肌中SOD 和GSH-Px 的含量并降低MDA 含量，增強(qiáng)肝糖原和肌糖原的儲(chǔ)備能力，顯示石榴茶提取物能提升小鼠抗氧化抗疲勞能力，為石榴茶的推廣應(yīng)用提供了依據(jù)。

[1]杜云.茶多酚對(duì)運(yùn)動(dòng)大鼠抗疲勞作用的實(shí)驗(yàn)研究[J].西北大學(xué)學(xué)報(bào)：自然科學(xué)版,2012,42(5)：783-786

[2]張冬英,黃業(yè)偉,汪曉娟,等.普洱茶熟茶抗疲勞作用研究[J].茶葉科學(xué),2010,30(3)：218-222

[3]梁勇,邵宛芳,黃業(yè)偉,等.云南綠茶抗疲勞作用研究[J].食品工業(yè)科技,2011,32(1)：271-272

[4]劉金勇,李秀娟.嶧城區(qū)石榴茶產(chǎn)業(yè)發(fā)展戰(zhàn)略[J].中國林副特產(chǎn),2004,71(4)：65-66

[5]黃業(yè)偉,邵宛芳,冷麗影,等.普洱茶生茶抗疲勞作用研究[J].西南農(nóng)業(yè)學(xué)報(bào),2010,23(3)：801-804

[6]國家衛(wèi)生部衛(wèi)生法制與監(jiān)督司.保健食品功能學(xué)評(píng)價(jià)程序和檢驗(yàn)方法[M].北京：國家衛(wèi)生部,1996：6-7

[7]曲綿域,高云秋,浦鈞宗,等.實(shí)用運(yùn)動(dòng)醫(yī)學(xué)[M].北京：北京科學(xué)技術(shù)出版社,2003：198-201

[8]Coyle C H,Philips B J,Morrisroe S N,et al.Antioxidant effects of green tea and its polyphenols on bladder cells[J].Life sci,2008,83(1/2)：12-18