無細胞百日咳脫毒PT抗原超濾工藝研究

黃 鍇，胡慧瓊，楊國友，張 華，唐朝暉，梁淑芳，秦 敏

（1．四川大學生物治療國家重點實驗室，四川 成都610041；2．成都生物制品研究所有限責任公司，四川 成都610023）

百日咳是一種嚴重威脅嬰幼兒健康的急性呼吸道傳染病，傳染性強，且人群普遍易感。百日咳的病原體為百日咳桿菌，是引起百日咳的病原苗，會產生百日咳毒素（PT）、絲狀血凝素（FHA）、百日咳桿菌粘著素（Prn）、凝集原（AG）、內毒素、腺苷環化酶（AC）、纖毛（Fim）、支氣管細胞毒素（TC）等多種具有生物學活性的物質，它們在百日咳桿菌的致病與免疫中發揮著不同的作用［1］。百日咳桿菌的主要毒力因子為PT，具有多種生物學活性，導致多種多樣的百日咳臨床癥狀［2］。經過化學脫毒的PT也是疫苗中唯一沒有爭議的保護性抗原［3］。

目前，國內計劃免疫所用的無細胞百日咳疫苗是由百日咳桿菌的培養物經硫酸銨鹽析和密度梯度離心法提取的多組分抗原（含有PT和FHA等有效成分），經戊二醛脫毒后超聲勻化制成。PT抗原脫毒后呈紅棕色，有大量的絮狀沉淀，因此，難以用超濾方法去除色素、戊二醛等小分子，而普遍通過透析袋透析，存在大量弊端：需更換大量透析液；透析時間長；需加入防腐劑，對環境和人體造成危害；透析袋的材質和性能缺乏嚴格的驗證等［4］。隨著無細胞百日咳工藝的發展，新的純化工藝已經能制備出單組分PT抗原；且新的脫毒工藝能有效控制其絮狀沉淀的產生。PT抗原是具有高疏水性的蛋白，容易形成聚集體吸附在超濾膜上［5］，便于使用快捷方便的超濾方式去除小分子，解決了透析袋透析的諸多弊端。……