北極海泥來源抗菌活性真菌的篩選及菌株H5的初步研究

倪孟祥，胡 穎

（中國藥科大學生命科學與技術學院，江蘇 南京210009）

從海洋微生物尋找新藥已成為開發藥物資源的重要策略之一［1，2］。國內外對海洋細菌和放線菌的活性天然產物的研究起步較早，發現的新化合物數量也較多，相比之下對海洋真菌的系統研究起步較遲，直到20世紀90年代才進入較快速的發展階段［3］。目前，人們已經從海洋真菌的發酵產物中發現了1000多種新的次生代謝產物，這些代謝產物呈現出良好的抗腫瘤、抗菌、抗病毒等生物活性，成為當前海洋藥物研究的熱點［4，5］。

作者從北極海泥中分離真菌，采用其發酵液進行抗菌活性篩選，并鑒定其種類、研究其活性代謝產物的性質，以期發現具有顯著抗菌活性的菌株，為建設海洋真菌種質資源庫、開發新的微生物藥物奠定基礎。

1 實驗

1．1 材料

1．1．1 樣品來源

北極海泥來自北極黃河站附近海域潮間帶。

1．1．2 指示菌

金黃色葡萄球菌 （Staphyloccus aureus）ATCC 25925、大腸桿菌（Escherichia coli）ATCC25922、多株金黃色葡萄球菌臨床分離耐藥菌、枯草芽孢桿菌（Bacillus subtilis）、白色念珠菌（Candida albicans），均由中國藥科大學微生物學實驗室提供。

1．1．3 主要試劑

DNA Marker、Taq MasterMix，康為；引物由上海生工合成；其它試劑均為國產分析純。

1．2 培養基

1．2．1 分離培養基

馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養基：馬鈴薯去皮，200g切成小塊，加水煮沸30min，4～6層紗布過濾，加20g葡萄糖、20g海鹽、15～20g瓊脂，蒸餾水1000mL。

察氏培養基：NaNO32g，K2HPO41g，MgSO4·7H2O 0．5g，KCl 0．5g，FeSO4·7H2O 0．01g，蔗糖30g，海鹽20g，瓊脂15～20g，蒸餾水1000mL。

沙氏培養基：蛋白胨10g，葡萄糖4g，瓊脂15～20g，蒸餾水1000mL。

改良的馬丁培養基：葡萄糖20g，蛋白胨5g，酵母粉2g，K2HPO41g，MgSO4·7H2O 0．5g，海鹽20g，瓊脂15～20g，蒸餾水1000mL。

葡萄糖酵母膏蛋白胨瓊脂培養基：葡萄糖10g，蛋白胨2g，酵母膏0．5g，海鹽20g，瓊脂15～20g，蒸餾水1000mL?！?br>