明目疏脈片對眼氧化損傷大鼠抗氧化作用的影響

姜春英 李亞萍 楊 健 楊 麗 李銀花 劉早霞

(吉林大學(xué)第二醫(yī)院眼底一科，吉林 長春 130000)

白內(nèi)障占世界致盲因素首位，也是我國第一位致盲眼病。國外學(xué)者提出晶狀體氧化損傷是白內(nèi)障形成的啟動因素〔1〕。尋求有效的抗氧化物質(zhì)拮抗晶狀體的氧化損傷，延緩晶狀體氧化損傷的發(fā)生、發(fā)展，已成為預(yù)防白內(nèi)障的重要手段。本文采用實(shí)驗(yàn)性氧化損傷大鼠模型，以和血明目片為陽性對照藥，進(jìn)行明目疏脈片對實(shí)驗(yàn)性氧化損傷大鼠的抗氧化作用研究，以期為白內(nèi)障的預(yù)防和治療提供新的途徑。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 動物 Wistar大鼠，體重60～80 g，雌雄各半，動物合格證號:(吉)2003-0001，購自吉林大學(xué)醫(yī)學(xué)部實(shí)驗(yàn)動物中心。常規(guī)飼料，自由飲水。

1.1.2 藥物 明目疏脈片由當(dāng)歸、丹參、赤芍、牛膝、土鱉蟲、水蛭組成，0.3 g/片，為本課題組研制，批號070401。臨用前用蒸餾水配成含生藥0.2 g/ml的混懸液。和血明目片，0.3 g/片，批準(zhǔn)文號國藥準(zhǔn)字Z20025067，西安碑林藥業(yè)股份有限公司，批號070901;美多麗(托吡卡胺)，10 ml，日本參天制藥株式會社，制造號碼MP0770，進(jìn)口藥品注冊證號X970459。

1.1.3 試劑 D-半乳糖，上海恒信化學(xué)試劑有限公司(原上海試劑二廠)產(chǎn)品，批號20031030。超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、谷胱甘肽過氧化物酶(GSH-Px)、谷胱甘肽(GSH)試劑盒均購自南京建成生物工程研究所。

1.1.4 儀器 紫外可見分光光度計(jì)(美國Beckman公司)，YZ-5E型裂隙燈顯微系統(tǒng)(蘇州醫(yī)療器械廠)。

1.2 方法

1.2.1 大鼠實(shí)驗(yàn)性氧化損傷(白內(nèi)障)模型的建立及給藥裂隙燈顯微鏡檢查后取雙側(cè)晶狀體均無白內(nèi)障的大鼠60只，隨機(jī)分為正常對照組、模型組、明目疏脈片高、中、低劑量組(2、1、0.5 g·kg－1·d－1)及陽性藥組(和血明目片 1 g·kg－1·d－1)，每組10只，雌雄各半。大鼠白內(nèi)障模型的建立參照文獻(xiàn)〔2〕方法，除正常對照組外，其余各組大鼠每日按15 g/kg腹腔注射50%D-半乳糖無菌液(分2次注射)，連續(xù)注射4 w，正常對照組腹腔注射等量生理鹽水。

于誘發(fā)模型當(dāng)日開始，正常對照組和模型組灌胃生理鹽水，陽性藥組、明目疏脈片高、中、低劑量組動物按上述劑量連續(xù)灌胃給藥4 w。

1.2.2 晶狀體檢查 從實(shí)驗(yàn)開始起，除正常對照組外，其余各組大鼠每日用1%阿托品液散瞳，裂隙燈顯微鏡下檢查晶狀體混濁情況，并記錄出現(xiàn)I級混濁的時(shí)間。

1.2.3 晶狀體勻漿制備與生化指標(biāo)測定 實(shí)驗(yàn)結(jié)束后，將大鼠處死，摘出眼球，分離出晶狀體，用4℃PBS緩沖液(pH7.4)制備勻漿，離心15 min，取上清液，羥胺法測定SOD活性，二硫代二硝基苯甲酸法測定GSH-Px活性及GSH含量，硫代巴比妥酸(TBA)法測定丙二醛(MDA)含量，上述生化指標(biāo)均嚴(yán)格按試劑盒要求進(jìn)行操作。同時(shí)取血，按上述方法測血清SOD活性和MDA含量。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 采用秩和檢驗(yàn)等級序值法，其他數(shù)據(jù)以x±s表示，進(jìn)行 t檢驗(yàn)。

2 結(jié)果

2.1 明目疏脈片對大鼠白內(nèi)障晶狀體混濁發(fā)生時(shí)間的影響見表1。明目疏脈片按高、中、低劑量灌胃給藥能明顯延緩大鼠晶狀體混濁的發(fā)生時(shí)間〔分別為(19.3±2.76)、(18.4±2.65)、(17.2±2.35)d〕，與模型組〔(15.8±1.92)d〕比較有顯著性差異(P＜0.01，P＜0.05)。并且在同等劑量下(1.0 g/kg)，明目疏脈片的作用強(qiáng)于陽性藥〔(16.2±1.86)d〕(P＜0.05)。

2.2 明目疏脈片對大鼠白內(nèi)障晶狀體SOD、GSH-Px活性及GSH、MDA含量的影響 見表1。明目疏脈片能明顯降低大鼠白內(nèi)障晶狀體MDA的含量，明顯提高白內(nèi)障晶狀體SOD、GSHPx活性及GSH的含量，與模型組比較有顯著性差異;與陽性藥(和血明目片)比較也有顯著性差異。而和血明目片的上述作用不明顯，表明明目疏脈片具有明顯的抗氧化作用，并且上述抗氧化作用明顯強(qiáng)于和血明目片。

表1 明目疏脈片對大鼠白內(nèi)障晶狀體SOD、GSH-Px活性及GSH、MDA含量的影響(x ± s，n=10)

2.3 明目疏脈片對白內(nèi)障大鼠血清SOD活性和MDA含量的影響 見表2，明目疏脈片能明顯降低白內(nèi)障大鼠血清MDA含量，明顯提高SOD活性，與模型組比較有顯著性差異(P＜0.01，P＜0.001);與陽性藥(和血明目片)比較，也有顯著性差異。而和血明目片的上述作用不明顯，表明明目疏脈片的抗氧化作用明顯強(qiáng)于和血明目片。

表2 明目疏脈片對白內(nèi)障大鼠血清SOD活性及MDA含量的影響(x ± s，n=10)

3 討論

許多研究表明，自由基氧化損傷是白內(nèi)障的主要發(fā)病機(jī)制之一，自由基可造成晶狀體細(xì)胞膜的脂質(zhì)過氧化，破壞損傷晶狀體纖維結(jié)構(gòu)而形成白內(nèi)障〔2〕;并且，脂質(zhì)過氧化產(chǎn)物MDA是白內(nèi)障病理變化的主要產(chǎn)物〔3〕。此外，白內(nèi)障晶體中抗氧化酶(SOD、GSH-Px)活性和抗氧化劑(CSH含量)明顯減少〔4〕。

本實(shí)驗(yàn)證明，明目疏脈片能顯著延緩大鼠白內(nèi)障的發(fā)生，顯著降低白內(nèi)障大鼠血清和晶狀體MDA含量，增強(qiáng)血清和晶狀體SOD活性，提高晶狀體GSH-Px活性及GSH的含量，作用明顯強(qiáng)于對照藥(和血明目片)。表明明目疏脈片具有顯著的抗氧化作用，很可能是其防治眼氧化損傷的作用機(jī)制之一。

1 Spector A.Oxidative stress-induced cataract mechanism of action〔J〕.Faseb J，1995;9(12):173-4，179.

2 季 暉，濮祖茂，龔國清，等.豚鼠D-半乳糖性白內(nèi)障的實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ脱芯俊睯〕.眼科研究，1996;14(4):236-9.

3 Girao H，Mota C，Pereia P.Cholesterol may act as an antioxidant in lens membranes〔J〕.Cur Eye Res，1999;18(6):448-54.

4 韓秀嫻，陳集敏，王 翔，等.探討氧化應(yīng)力與半乳糖誘導(dǎo)白內(nèi)障之間的關(guān)系〔J〕.眼科研究，1999;17(1):34-7.