原發性高血壓患者子代人群載脂蛋白E基因多態性與高血壓的關系

容春莉，于 薇，姚文靜，李如意，曹東平，彭應心

(河北省人民醫院，石家莊 050051)

載脂蛋白E(ApoE)是一種多態性蛋白，參與脂蛋白的轉化與代謝過程，其基因可以調節許多生物學功能。研究表明，ApoE基因多態性與原發性高血壓的發生、發展有關，但其與血壓正常的原發性高血壓患者子代人群的關系國內外鮮見報道。2009年3月～2010年2月，我們對原發性高血壓患者子代人群ApoE基因多態性與高血壓的關系進行了分析。現報告如下。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 同期選擇我院健康體檢者120例，經相關檢查未發現糖尿病、高血壓、冠心病及其他影響血脂代謝的全身性疾病。根據有無高血壓家族史分為2組:原發性高血壓子代組60例(研究組)，男39 例、女21 例，年齡(48.7 ±10.8)歲;入選標準:父母雙方或一方有原發性高血壓，高血壓診斷標準符合1999年WHO/ISH規定的標準，除外繼發性高血壓、冠心病、缺血性腦病及肝腎系統疾病者。正常對照組60例(對照組)，男36例、女24例，年齡(46.6±9.3)歲，入選標準:父母雙方均無高血壓、冠心病、缺血性腦病及肝腎系統疾病者。兩組性別、年齡具有可比性。研究對象均為無血緣關系的中國北方漢族人。

1.2 方法

1.2.1 臨床資料收集 詳細記錄所有研究對象的年齡、性別等，并測量身高、體質量，計算BMI;采用臺式血壓計于每日10:00測量右上肢血壓3次，取其平均值作為收縮壓、舒張壓。采血前12 h禁食煙、酒、茶、咖啡等，于清晨空腹抽取肘靜脈血5 mL，置入含有1/10體積0.109 mol/L枸櫞酸鈉抗凝液的試管中，分離血清，用于測定血脂指標，血細胞用于測定ApoE基因型。

1.2.2 ApoE基因型的檢測 ①DNA提取:采用經典法分離提取血細胞DNA。②目的序列PCR擴增:PCR擴增DNA，PCR引物參照Tsai等［1］的報道設計(上游引物序列:5'-AACAACTGACCCCGGTGGCG-3';下游引物序列:5'-ATGGCGCTGAGGCCGCGCTC-3')。將擴增反應體系以6000 r/min離心5 min，97℃預變性180 s，95℃變性45 s，68℃退火30 s，72℃延伸30 s，共循環35次，最后72℃延伸120 s。③PCR產物測序:經酶切后在凝膠成像分析系統下觀察ApoE基因型:在48、72 bp處顯現2條區帶者為E4/4，在81、91 bp處顯現2條區帶者為E2/2，在48、91 bp 處顯現 2 條區帶者為 E3/3，在 48、72、91 bp處顯現3條區帶者為E3/4，在48、81、91 bp處顯現3 條區帶者為 E2/3，在48、72、81、91 bp 處顯現4條區帶者為E2/4。

1.2.3 血脂水平檢測 血標本處理后，采用同一臺Beckman全自動生化分析儀檢測兩組血脂水平。以膽固醇氧化酶法測定總膽固醇(TC)、甘油激酶法測定甘油三酯(TG)，直接法測定低密度脂蛋白膽固醇(LDL-C)、高密度脂蛋白膽固醇(HDL-C)。以上4項指標均由專人操作。

1.2.4 統計學方法 采用 SPSS11.0統計軟件，計量資料以表示，結果比較采用t檢驗和方差分析;基因頻率用基因計數法計算，比較采用χ2檢驗。P≤0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 兩組臨床資料比較 兩組BMI、血壓、血脂指標比較差異均無統計學意義(P均＞0.05)。見表1。

2.2 兩組ApoE基因型及等位基因比較 所有研究對象的PCR片段均得到滿意擴增，檢測到6種ApoE基因型，與用Hardy-Weinberg平衡推導出的預期基因型頻率基本一致，均達到連鎖平衡(χ2=4.26，P ＞ 0.05)，具有群體代表性。見圖 1。將ApoE基因型分為三組:ε2等位基因攜帶者E2/X(E2/3+E2/2基因型)、ε3等位基因攜帶者(E3/3基因型)、ε4等位基因攜帶者E4/X(E3/4+E4/4基因型)，E2/4因中性作用而排除在外。兩組ApoE基因型及等位基因頻率的分布見表2。兩組均以ApoE3/3基因型為優勢基因型，與對照組相比，研究組 ApoE4/4基因型高于對照組(χ2=4.68，P＜0.05)。兩組均以ε3等位基因頻率最高，ε2等位基因頻率最低。研究組ε4等位基因頻率高于對照組(χ2=12.42，P ＜0.05)。

表1 兩組臨床資料比較()

表1 兩組臨床資料比較()

組別 n BMI(kg/m2)收縮壓(mmHg)舒張壓(mmHg)TC(mmol/L)TG(mmol/L)HDL-C(mmol/L)LDL-C(mmol/L)研究組 60 20.08 ±0.17 128 ±10 82 ±7 4.42 ±0.92 1.39 ±0.30 1.41 ±0.44 2.87 ±0.59對照組 60 24.60 ±0.34 124 ±11 76 ±9 4.28 ±0.67 1.28 ±0.54 1.17 ±0.30 2.98 ±0.87

圖1 ApoE各基因型凝膠電泳圖

表2 兩組ApoE基因型及等位基因頻率的分布

3 討論

ApoE具有轉運膽固醇和調節脂質代謝的作用，在血脂代謝中具有重要意義。ApoE基因位于人類第19號染色體p13～q13區，并與ApoCⅠ、CⅡ共同形成基因簇，在功能上發揮協同作用。ApoE基因多態性與高脂血癥、動脈粥樣硬化及高血壓的發生密切相關［2，3］。因此，ApoE 基因多態性與原發性高血壓的關系越來越受到人們的關注［4］。

ApoE的合成是由位于同一基因位點上的3個等位基因(ε2、ε3、ε4)所控制，分別編碼血漿中 3 種主要異構體(E2、E3、E4)，構成6種不同的基因型，即3 種純合子(E2/2、E3/3、E4/4)、3 種雜合子(E3/2、E4/3、E4/2)。不同人群ApoE等位基因最常見的是E3，E2和E4可能是母體形式在人類進化過程中單一核苷酸點突變的結果。不同國家、民族ApoE等位基因頻率不同，存在明顯的種族差異［5］。有研究顯示，在中國人群中 ε2、ε4等位基因頻率為0.084、0.064，而 ε3 為 0.852。本研究發現，研究組與對照組均以E3/3表型及ε3等位基因最為常見，ε2和ε4相對少見，與多數研究結果相符，說明中國北方漢族人群，無論有無高血壓家族史，ApoE ε3等位基因頻率的分布最高。

有研究表明，ApoE4/4基因型和ε4等位基因頻率在原發性高血壓患者中是增加的，提示ε4可能是高血壓相關的遺傳因素之一。Yilmaz等［6］對88例高血壓患者和63例正常健康者研究發現，ε4等位基因攜帶者的高血壓患者有很高的靶器官損害危險，如左室肥厚和左房擴大，且與血壓高低相平行。但到目前，關于原發性高血壓患者子代人群ApoE基因多態性的研究鮮見報道。本研究測定了60例血壓正常的原發性高血壓患者子代的ApoE基因型，并計算ApoE等位基因頻率。結果顯示，原發性高血壓患者子代的ε4等位基因頻率高于對照組，推測原發性高血壓患者子代人群高血壓的易感基因為ApoE ε4等位基因。但高血壓病是一種多因素、多基因疾病，ApoE基因多態性與血壓之間的關系頗為復雜，可能通過基因—基因及基因—環境間的相互作用［7］，以某些直接或間接的方式影響血壓，故原發性高血壓患者子代人群是否發生高血壓受遺傳、環境等多種因素的影響。

總之，進一步擴大樣本量，研究遺傳易感因素在血壓正常的原發性高血壓患者子代人群中的作用，盡早發現高血壓，早期干預治療，有助于減少高血壓在這些人群中的發病率，提高生活質量。

［1］Tsai MY，Suess P，Schwichterberg K，et al.Determination of apolipoprotein E genotypes by single-strand conformational polymorphism［J］.Clin Chem，1993，39(10):2121-2124.

［2］Viitanen L，Pihlajamaki J，Miettinen R，et al.Apolipoprotein E gene promoter(-219G/T)polymorphism is associated with premature coronary heart disease［J］.J Mol Med(Berl)，2001，79(12):732-737.

［3］Imazu M，Yamamoto H，Toyofuku M，et al.Association of apolipoprotein E phenotype with hypertension in Japanese-American:data from the Hawaii--Los Angeles-Hiroshima Study［J］.Hypertension Res，2001，24(5):523-529.

［4］Li X，Du Y，Du Y，et al..Association of apolipoprotein E gene polymorphism with essential hypertension and its complications［J］.Clin Exp Med，2003，2(4):175-179.

［5］Seet WT，Mary Anne TJ，Yen TS.Apolipoprotein E gene genotyping in the Malay，Chinese and Indian ethnic groups in Malaysia-a study on the distribution of the different apoE alleles and genotypes［J］.Clin Chim Acta，2004，340(1-2):201-205.

［6］Yilmaz H，Isbir T，Agachan B，et al.Is epsilon4 allele of apolipoprotein E associated with more severe end-organ damage in essential hypertension［J］.Cell Biochem Funct，2001，19(3):191-195.

［7］Hagberg JM，Ferrell RE，Dengel DR，et al.Exercise training-induced blood pressure and plasma lipid improvements in hypertensives may be genotype dependent［J］.Hypertension，1999，34(1):18-23.