方氏頭皮針對血管性癡呆大鼠海馬組織中炎性因子IL－6表達(dá)的影響＊

黃琳娜 安軍明 田文靜 董 博 白赟軒 趙靖宇 楊曉波

西安市中醫(yī)醫(yī)院針灸科（西安 710001）

隨著人類社會(huì)年齡比例的老齡化和腦卒中治療存活率的提高，血管性癡呆（Vascular dementia，VaD）的發(fā)病率呈逐年上升的趨勢，已成為繼阿爾茨海默氏病（Alzheimer＇s Disease，AD）后另一大類最常見的癡呆疾病，常導(dǎo)致患者嚴(yán)重的記憶和認(rèn)知功能缺損，不僅給患者造成長期的痛苦，嚴(yán)重影響其生活質(zhì)量，也給家庭、社會(huì)帶來沉重負(fù)擔(dān)。但目前臨床治療VaD尚缺乏行之有效的方法，筆者長期的臨床研究表明，方氏頭皮針對VaD具有良好的治療作用［1～4］，在此基礎(chǔ)上，本研究通過觀察方氏頭皮針對VaD大鼠海馬組織中炎性因子IL－6的影響，闡明方氏頭皮針治療VaD的作用機(jī)制。

1 材料與方法 1.1 材 料 1.1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 健康雄性SD大鼠60只，由西安交通大學(xué)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心提供，體重280～300g，SPF級鼠房飼養(yǎng)，實(shí)驗(yàn)過程中各組大鼠自由攝食和飲水（術(shù)前禁食除外），室外20℃～22℃，相對濕度為60%～70%，光照周期為12h（7：00～19：00光照；19：00～7：00黑暗）。

1.1.2 主要儀器與藥品 SDQ－30雙極射頻電凝器（上海手術(shù)器械廠），一次性無菌華佗牌針灸針（蘇州醫(yī)療用品廠提供，規(guī)格：￠0.40mm×13mm，執(zhí)行標(biāo)準(zhǔn)號：GB2024－1994），大鼠IL－6ELISA試劑盒（武漢博士德生物工程有限公司）。

1.2 方 法 1.2.1 動(dòng)物分組 將60只健康雄性SD大鼠隨機(jī)分為6組，每組各10只，分別為：Ⅰ組：模型組（VaD組）；Ⅱ組：模型加頭針組（VaD＋SA組）；Ⅲ組：假手術(shù)組（Mock組）；Ⅳ組：假手術(shù)加頭針組（Mock＋SA組）；Ⅴ組：正常組（Normal組）；Ⅵ組：正常加頭針組（Normal＋SA組）。

1.2.2 模型制備 根據(jù)改良Pulsinelli四血管阻斷（4－vo）法制作VaD模型［5］：大鼠術(shù)前禁食12h，禁水6h。VaD組、VaD＋SA組大鼠用3.5mL／kg10% 的水合氯醛腹腔麻醉，手術(shù)期間保證大鼠能自主呼吸。大鼠俯臥位固定于操作臺(tái)上，局部去毛、聚維酮碘（碘伏）消毒后，于背部第一頸椎水平作1～2cm長的正中縱形切口，在正中線兩側(cè)約2mm處逐層鈍性分離至第一頸椎翼突，暴露左右兩側(cè)的翼突孔，用直徑為0.5mm SDQ－30雙極射頻電凝器插入雙側(cè)翼小孔燒灼雙側(cè)椎動(dòng)脈，造成永久性閉塞。再將大鼠仰臥位固定，頸部去毛、聚維酮碘（碘伏）消毒后，行腹側(cè)頸正中切口，鈍性分離雙側(cè)頸總動(dòng)脈，以“4”號絲線穿線備用，用微動(dòng)脈夾夾閉雙側(cè)頸總動(dòng)脈5min，間隔1h后再夾閉5min，共夾閉3次，術(shù)中大鼠肛溫保持在36.5～37.5℃，術(shù)后每只動(dòng)物皮下注射給予8萬單位青霉素鈉預(yù)防細(xì)菌感染，待大鼠完全清醒后送至溫度為21～23℃的動(dòng)物房飼養(yǎng)，觀察。Mock組及Mock＋SA組，除雙側(cè)椎動(dòng)脈不電凝，雙側(cè)頸總動(dòng)脈不結(jié)扎外，余處理皆同VaD組，Normal組及Normal＋SA組常規(guī)飼養(yǎng)。

1.2.3 治療方法 1.2.3.1 頭針組選穴：造模10d后，參照方氏針灸創(chuàng)新體系之一《頭皮針》［6］選穴：倒臟上焦（取雙側(cè)）、記憶穴（取雙側(cè)）、信號穴（取雙側(cè)）、思維穴。根據(jù)華氏等［7］介紹的大鼠穴位圖譜，模擬人體經(jīng)穴定位。

1.2.3.2 操作：穴位常規(guī)消毒，采用飛針直刺法。用拇指、食指、中指緊持針柄，以肩肘帶動(dòng)腕力，針體平直，垂直快速刺入，立即松手，深達(dá)骨膜，可聽到?jīng)_擊骨膜的響聲。頭針治療均在每日9：00～11：00之間進(jìn)行，每日1次，每次留針30min，每15min使用重壓、震顫手法行針1次，確定5d為1個(gè)療程，休息2d，共進(jìn)行2個(gè)療程，非頭針干預(yù)組大鼠常規(guī)飼養(yǎng)直至規(guī)定的頭針療程結(jié)束。

1.2.4 指標(biāo)檢測 在冰臺(tái)上迅速分離大鼠一側(cè)的海馬，按2.5mL／g腦重量加入相當(dāng)體積的冰生理鹽水，在冰浴中用勻漿器將組織充分研磨，隨后超聲波粉碎進(jìn)一步將組織進(jìn)行破碎，接著10000r／min 4℃ 離心10min，取上清液。實(shí)驗(yàn)嚴(yán)格按照IL－6ELISA法說明書步驟進(jìn)行，在酶標(biāo)儀上讀取各孔的OD值，測量波長為450nm。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 所有數(shù)據(jù)采用SPSS17.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行單因素方差分析（One－way－ANOVA），繼以LSD檢驗(yàn)，實(shí)驗(yàn)結(jié)果以平均值±標(biāo)準(zhǔn)差（）表示，以P＜0.01差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果 各組大鼠海馬組織中炎性因子IL－6含量變化 見表1。

表1 各組大鼠海馬組織中IL－6含量（）

表1 各組大鼠海馬組織中IL－6含量（）

注：與正常組及假手術(shù)組相比，模型組及模型加頭針組大鼠海馬組織中炎性因子IL－6明顯增加（P＜0.01），而頭皮針治療后，模型加頭針組大鼠海馬組織中IL－6較模型組顯著性降低（P＜0.01），正常加頭針組及假手術(shù)加頭針組大鼠海馬組織中IL－6含量較正常組及假手術(shù)組比較均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.01）。提示：方氏頭皮針可明顯抑制海馬組織中炎性因子IL－6的釋放。

3 討 論 血管性癡呆（vascular dementia，VaD）系指在缺血性、出血性及急慢性缺血缺氧性腦血管疾病引起的腦組織損害基礎(chǔ)上產(chǎn)生的以高級神經(jīng)認(rèn)知功能障礙為主的一組獲得性智能損害的臨床綜合征，是一種慢性的進(jìn)行性疾病，據(jù)國內(nèi)外資料報(bào)道，VaD是迄今為止唯一可防治的癡呆，如早期治療會(huì)具有可逆性，因此探索VaD發(fā)病的相關(guān)因素及發(fā)病機(jī)制，以期尋求早診斷、早預(yù)防、早治療的有效措施，已成為醫(yī)學(xué)基礎(chǔ)研究和臨床研究的重要課題。

方氏頭皮針是結(jié)合中醫(yī)經(jīng)絡(luò)學(xué)說與大腦生理解剖學(xué)基礎(chǔ)上產(chǎn)生的新的治療方法，我們在長期的臨床研究中發(fā)現(xiàn)：方氏頭皮針在改善VaD患者記憶、認(rèn)知功能方面具有顯著療效。本研究結(jié)果表明，血管性癡呆發(fā)生后，模型組及模型加頭針組大鼠海馬組織中炎性因子IL－6的水平較正常組及假手術(shù)組明顯升高（P＜0.01），而方氏頭皮針治療后，模型加頭針組大鼠海馬組織中IL－6水平趨向于正常，且正常加頭針組及假手術(shù)加頭針組大鼠海馬組織中的IL－6水平均較正常及假手術(shù)組有所增加，說明方氏頭皮針可通過顯著性抑制大鼠海馬組織中炎性因子IL－6的釋放從而達(dá)到治療血管性癡呆的目的。

血管性癡呆的發(fā)病機(jī)制十分復(fù)雜，目前尚未完全闡明，本研究只是從在急慢性腦缺血缺氧發(fā)病機(jī)制中起重要作用的炎性因子IL－6這單一方面分析方氏頭皮針可能治療血管性癡呆的作用機(jī)制，而闡明方氏頭皮針是如何通過抑制大鼠海馬組織中炎性因子IL－6的釋放而延緩神經(jīng)元的變性壞死，尚需期待進(jìn)一步的研究。

［1］黃琳娜，安軍明，蘇同生，等.頭針治療血管性癡呆隨機(jī)對照臨床研究［J］.上海針灸雜志，2010，29（2）：79－82.

［2］黃琳娜，安軍明，蘇同生，等.頭針治療血管性癡呆（肝腎虧虛兼痰疲阻絡(luò)證）的隨機(jī)對照臨床研究［J］.中國針灸學(xué)會(huì)臨床分會(huì)第十七屆全國針灸臨床學(xué)術(shù)研討會(huì)論文集，2009：126－132.

［3］安軍明，黃琳娜.針灸治療血管性癡呆臨床研究進(jìn)展［J］.現(xiàn)代中醫(yī)藥，2009，29（3）：85.

［4］安軍明，黃琳娜.血管性癡呆中醫(yī)臨床研究觀察指標(biāo)的選擇［J］.上海針灸雜志，2010，29（4）：258.

［5］Pulsinelli WA，Brierley JB，plum F.Temporal profile of neuronal damagein a model of transient forebrain ischemia.Ann Neurol，1982，11：491.

［6］方本正.頭皮針［M］.西安：陜西科學(xué)技術(shù)出版社，1994：100－103.

［7］華興邦.大鼠穴位圖譜的研制［J］.實(shí)驗(yàn)動(dòng)物與動(dòng)物實(shí)驗(yàn)，1991，3（1）：1－5.