茯磚茶與紅茶對酒精性肝損傷的保護作用研究

瞿紹明劉仲華劉 揚

QU Shao－ming1，2 LIU Zhong－hua1，2 LIU Yang1，2

（1.國家植物功能成分利用工程技術研究中心，湖南 長沙 410128；2.湖南農業大學茶學教育部重點實驗室，湖南 長沙 410128）

大量研究［1－5］表明茶葉具有減肥、降血壓、降血糖、降血脂、抗氧化等多種保健功效。茯磚茶和紅茶同屬發酵茶，近年來越來越受到人們的喜愛。茯磚茶是湖南主產的一種黑茶，在加工過程中其兒茶素、黃酮類及茶多酚的含量有一定的降低［6］，但其降血脂、抗氧化、減肥的功效依舊明顯，能降低高脂血癥大鼠血清TC、TG的含量［7］。茶多酚具有很強的抗氧化性［8，9］，紅茶中茶多酚的含量較高。酒精性肝損傷屬于臨床中常見的肝臟疾病，是由于長期飲酒而導致的肝臟損傷疾病，包括酒精性脂肪肝、酒精性肝炎、酒精性肝纖維化、酒精性肝硬化，這幾種形式可以單獨存在也可以同時存在［10，11］。酒精對肝臟的長期作用可導致肝細胞內的脂質代謝紊亂，造成肝臟脂質積累［12］。ALT、AST、TC、TG廣泛存在于肝細胞中，當肝細胞受損時，血清中ALT、AST、TC、TG的含量就會升高，肝臟受損傷的程度常用ALT、AST、TC、TG的含量來衡量。本實驗室之前對茯磚茶的降脂減肥功能進行了一系列的研究［13－15］，但目前茶對酒精性肝病的保護作用研究報道還比較少。本研究擬通過對茯磚茶提取物和速溶紅茶提取物對試驗小鼠谷丙轉氨酶（ALT）、谷草轉氨酶（AST）、總膽固醇（TC）、甘油三酯（TG）、超氧化物歧化酶（SOD）、谷胱甘肽過氧化物酶（GSH－Px）、丙二醛（MDA）、肝系數等指標的影響，探究茯磚茶和紅茶對酒精致小鼠肝損傷的保護作用效果并比較其保護作用，旨在為茯磚茶和速溶紅茶的進一步開發和利用提供參考依據。

1 材料與方法

1.1 儀器

全自動生化分析儀：TBA－40FR型，日本株式會式三廣醫療公司；

全波長多功能酶標儀：Thermo VARIOSKAN FLASH型，美國Thermo Scientific公司；

超低溫冰箱：NU－6613w35型，美國Nuaire Receo公司；

電子天平：PB302－N型，瑞士 Mettler Toledo公司；

高速冷凍離心機：MIKRO.22R型，德國Hettich公司。

1.2 試劑材料

白酒：55%（V／V），吉林東北坊酒業有限公司；

茯磚茶提取物、紅茶提取物（速溶紅茶）：長沙飛拓植物制品有限公司；

凱西萊：河南省新誼制藥；

ALT、AST、TC、TG、GSH－Px、SOD、MDA 檢測試劑盒：南京建成生物工程研究室；

喂養試驗小鼠的基礎飼料：湖南斯萊克景達實驗動物有限公司。

1.3 動物試驗

1.3.1 試驗動物 SPF級昆明小鼠，雄性，體質量28～32g，由湖南斯萊克景達實驗動物有限公司提供，衛生許可證號：SCXK（湘）2009－0003。

1.3.2 灌胃造模劑量 灌胃劑量設定：茶葉的成人（按60kg標準）推薦劑量為9.0g／d，折合為每千克體重劑量為0.15g／kg，本研究選擇人體推薦劑量的一定倍數為給藥劑量，設定試驗所用低濃度劑量為70mg／kg，中濃度劑量為140mg／kg，高濃度劑量為280mg／kg，凱西萊陽性對照組為60mg／kg劑量。每只小鼠的不同劑量的茯磚茶和紅茶提取物的灌胃體積均為0.5mL／d。

1.3.3 動物分組與處理 根據前期確定的劑量標準和灌胃時間情況90只小鼠在室溫19～26℃，光照12h／d及相對濕度45%～70%的環境下飼養，5d后隨機分成9組，每組10只，首次稱重并開始進行造模試驗，以后每隔5d稱量1次體重，觀察外形及毛色，分組的9組試驗組別分別為正常組、模型組、陽性對照組、茯磚茶低劑量組、茯磚茶中劑量組、茯磚茶高劑量組、紅茶低劑量組、紅茶中劑量組、紅茶高劑量組，試驗前15d陽性組、茯磚茶和紅茶各劑量組每次灌胃設定濃度的試劑，正常組和模型組灌胃等量的蒸餾水，15d后先進行前面相同的灌胃處理，1h候后，模型組，陽性對照組和各給藥組用55%（V／V）的東北坊白酒灌胃，灌胃體積為0.4mL／d，正常對照組灌胃等量的蒸餾水。灌胃2周，定期稱量體重。

1.3.4 測定指標 末次灌胃12h后，禁食不禁水，12h后摘眼球取血，血液于4℃以2 000r／min離心10min，分離血清，取上清測定AST、ALT、TC、TC。采血后，迅速斷頸處死小鼠，解剖小鼠，觀察肝臟，稱量總肝臟重量，計算肝系數，取肝臟右葉，常規制取肝勻漿測定SOD、GSH－Px、MDA，血清ALT、AST、TC、TG，按照試劑盒要求進行測定，肝臟SOD、GSH－Px、MDA按照試劑盒進行測定。

1.4 數據處理與分析

所有試驗數據利用 EXCEL 2007和SPSS 19.0統計軟件進行數據的統計及方差分析，結果計數以平均值±標準差（x±s）表示，組間差異及特性比較采用LSD法。

2 結果與分析

2.1 對酒精性肝損傷小鼠體重的影響

圖1為各組試驗小鼠體重變化的情況。各試驗組小鼠在試驗過程中體重總體呈上升趨勢，其中正常組小鼠體重增長最明顯，其次為模型組和陽性對照組，給藥試驗組中，各組別小鼠體重變化有明顯區別，從一開始灌胃造模，小鼠的體重增長就顯示出明顯不同，從低、中、高劑量組增長速度依次變緩，其中茯磚茶低劑量組、紅茶低劑量組小鼠體重增長和正常組相比緩慢，茯磚茶中劑量組、紅茶中劑量組次之，茯磚茶高劑量組、紅茶高劑量組最緩慢，這說明茯磚茶和紅茶有抑制小鼠體重增長的效果，并且這種效果不是由于食物的原因引起的。灌胃15d后，試驗小鼠增加灌胃酒精造模后，除未灌胃酒精的正常組外，其他灌胃酒精的試驗組，體重都呈一定量的減輕情況，茯磚茶高劑量組、紅茶高劑量組減輕的最明顯，茯磚茶中劑量組、紅茶中劑量組次之，茯磚茶低劑量組、紅茶低劑量組變化更弱，而陽性對照和模型組的變化最弱，說明酒精的攝入一定程度上導致了小鼠體重的減小。結合表2，與模型組比較茯磚茶紅茶各劑量組均能明顯降低小鼠肝系數（P＜0.01），表明各劑量組小鼠體重變化情況與小鼠肝系數、肝臟受損程度有一定關系。

圖1 各組試驗小鼠體重變化情況Figure 1 Different groups of mice weight changes

2.2 對酒精性肝損傷小鼠血清AST、ALT、TC、TG的影響

試驗結果表明（見表1），與正常組比較，模型組小鼠血清AST、ALT、TC、TG均顯著性增高（P＜0.01），與模型組比較，茯磚茶、紅茶、陽性對照組在一定程度上都能明顯降低小鼠血清AST、ALT、TC、TG的含量，其中茯磚茶低、中劑量組，紅茶高劑量組對ALT的降低作用極其明顯（P＜0.01），茯磚茶高劑量組、紅茶高劑量組中ALT的含量與模型組比較有顯著性降低（P＜0.05）；茯磚茶高、中劑量組，紅茶高劑量組對AST的降低作用明顯（P＜0.01）；茯磚茶高、中劑量組對TC的降低作用明顯（P＜0.01），紅茶高劑量組中TC的含量比模型組明顯的低（P＜0.05）；茯磚茶高，中劑量組對TG的降低作用明顯（P＜0.01），紅茶高、中劑量組中TG的含量明顯降低（P＜0.05）。

表1 造模期各組小鼠血清AST、ALT、TC、TG的比較?Table 1 AST，ALT，TC and TG of each group in the period of model building ／（mmol·L－1）

2.3 對酒精性肝損傷小鼠肝臟SOD、GSH－Px、MDA和肝系數的影響

試驗結果表明（見表2），與正常組比較，模型組小鼠肝臟中SOD和GSH－Px的含量顯著性降低（P＜0.01），MDA和肝臟系數均含量顯著升高（P＜0.01），與模型組比較，茯磚茶、紅茶、陽性藥組在一定程度上均能降低小鼠肝臟MDA的含量和肝臟系數，升高SOD和GSH－Px的含量。紅茶高劑量組對SOD和GSH－Px的含量的升高作用極其明顯（P＜0.01），茯磚茶高劑量組、紅茶中劑量組與模型組比較SOD和GSH－Px的含量顯著升高（P＜0.05）；茯磚茶高劑量 MDA的含量有顯著的降低（P＜0.01），紅茶高、中劑量組對 MDA的含量降低作用明顯（P＜0.05）；茯磚茶與紅茶各劑量組對肝臟系數的降低作用明顯（P＜0.01）。

表2 造模期各組小鼠肝臟SOD、GSH－Px、MDA和肝系數的比較?Table 2 SOD、GSH－Px、MDA and liver index in the liver of each group in the period of model building

3 討論

酒精進入人體內后，其轉移路徑除了少部分經肺、腎排出體外，大部分在肝臟中代謝，酒精在機體內的代謝途徑主要有：① 微粒體乙醇氧化體系（MEOS）；② 乙醇脫氫酶（ADH）乙醇氧化體系；③ 黃嘌呤氧化酶－過氧化氫酶體系；④NADPH氧化酶－過氧化氫體系。其中前兩種途徑為最主要代謝途徑［16］。酒精性肝病的發病機理情況還比較復雜，目前最廣泛接受的是Day和James提出的酒精性肝病和非酒精性脂肪性肝病共同存在作用的“二次打擊”機制學說［17］，該學說指出對酒精性肝病的形成起重要作用的因素有脂質過氧化、氧化應激和多種炎癥細胞因子的釋放等。

酒精性肝損傷的發病機制與許多因素有關，一方面是與酒精代謝相關的酶如ALDH、ADH、CYUP2E1有關，另一方面是氧化應激因子、信號傳導關鍵核因子及內毒素水平等，氧化應激及脂質過氧化受阻在酒精性肝損傷的過程中作用明顯［18］，SOD和GSH－Px是機體內重要的抗氧化的物質，能夠清除代謝產生的大量自由基，保護肝臟。MDA是脂質過氧化反應的終產物，其含量的高低能在一定程度上反應肝臟受損的情況，酒精肝損傷與肝臟內脂質代謝紊亂密不可分［19］。本研究結果顯示紅茶高劑量組對SOD和GSH－Px的含量的升高作用非常明顯（P＜0.01），茯磚茶高劑量組、紅茶中劑量組與模型組比較SOD和GSH－Px的含量顯著升高（P＜0.05）；茯磚茶高劑量 MDA的含量有顯著的降低（P＜0.01）。茯磚茶和紅茶具有明顯的抗氧化，清除體內自由基的作用。

4 結論

茯磚茶和紅茶在一定程度上都能明顯降低小鼠血清AST、ALT、TC、TG的含量，也能明顯提高小鼠肝細胞SOD和GSH－Px的活性，降低MDA的含量，對小鼠的肝臟起到了良好的防護作用。茯磚茶和紅茶各劑量組小鼠體重明顯比其他組別的小鼠體重輕，說明茯磚茶和紅茶有明顯的降脂減肥功能，各試驗組的小鼠肝系數明顯比模型組小，表明茯磚茶和紅茶對小鼠的肝臟物質代謝有明顯的促進作用。本試驗結果也表明茯磚茶和紅茶具有明顯的抗氧化功能，對肝功能的各項指標有改善作用，對小鼠酒精性肝損傷都有明顯的防護作用，但是茯磚茶和紅茶對酒精性肝損傷的保護作用效果差別不大。

1 Martins F，Noso T M，Porto V B，et al.Matétea inhibits in vitro pancreatic lipase activity and has hypolipidemic effect on high－fat diet－induced obese mice［J］.Obesity，2010，18（1）：42～47.

2 Lee S M，Kim C W，Kim J K，et al.GCG－rich tea catechins are effective in lowering cholesterol and triglyceride concentrations in hyperlipidemic rats［J］.Lipids，2008，43（5）：419～429.

3 Kao Y H，Chang H H，Lee M J，et al.Tea，obesity，and diabetes［J］.Molecular Nutrition ＆ Food Research，2006，50（2）：188～210.

4 Jian L，Xie L P，Lee A H，et al.Protective effect of green tea against prostate cancer：A case‐control study in southeast China［J］.International Journal of Cancer，2003，108（1）：130～135.

5 傅冬和，劉仲華，黃建安，等.同通量篩選研究茯磚茶降脂功效［J］.茶葉科學，2006，26（3）：209～214.

6 傅冬和，劉仲華，黃建安，等.茯磚茶加工過程中主要化學成分的變化［J］.食品科學，2008，29（2）：64～67.

7 王蝶，黃建安，葉小燕，等.茯磚茶減肥作用研究［J］.茶葉科學，2012，32（1）：81～86.

8 于新蕊，曲軍.茶葉的化學成分及藥理作用研究進展［J］.中草藥，1995，26（4）：219～221.

9 侯冬巖，回瑞華，劉曉媛，等.紅茶茶多酚及抗氧化性能測定［J］.食品科學，2005，26（8）：67～70.

10 黃哲，田德錄，原愛紅.酒精性肝病的實驗動物模型的研究［J］.華人消化雜志，1998，6（8）：474～478.

11 李春燕.東北巖高蘭對大鼠酒精性脂肪肝的預防作用研究［D］.哈爾濱：黑龍江中醫藥大學，2009.

12 Kang L，Chen X，Sebastian B M，et al.Chronic ethanol and triglyceride turnover in white adipose tissue in rats inhibition of the anti－lipolytic action of insulin after chronic ethanol contributes to increased triglyceride degradation［J］.Journal of Biological Chemistry，2007，282（39）：28 465～28 473.

13 徐小江，黃建安，肖力爭，等.茯磚茶及其配方對脂肪變性L－02肝細胞中 TG 含量的影響［J］.茶葉科學，2011，31（3）：247～254.

14 袁勇，黃建安，徐小江，等.茯茶中 “金花”孢子粉提取物對體外誘導的非酒精性脂肪肝細胞內甘油三酯代謝的影響［J］.茶葉科學，2011，31（2）：129～135.

15 傅冬和，劉仲華，黃建安.茶葉降脂減肥作用研究進展［J］.中國茶葉，2004，26（2）：8～10.

16 江義墩.新馬地區酒精性脂肪肝的證候特點及利濕化瘀解毒通降法干預的研究［D］.北京：北京中醫藥大學，2008.

17 Itoga S，Nomura F，Harada S，et al.Mutations in the exons and exon－intron junction regions of human cytochrome P ‐4502E1gene and alcoholism［J］.Alcoholism：Clinical and Experimental Research，1999，23（4）：13～16.

18 陳湘寧，郭琳博，李宇華，等.酒精性肝病發病機制及防治機理研究［J］.食品與機械，2011，27（6）：265～268.

19 高愛紅，童華榮.天然食用色素——花青素研究進展［J］.保鮮與加工，2001，17（3）：75～78.