天然中草藥抗菌襪的制備及其抗真菌效果測試與比較*

葛 彥 湯佳鵬 柳依婷 張燕兵

(1.南通大學紡織服裝學院，南通，226019;2.南通大學航海醫(yī)學研究所，南通，226001)

真菌性皮膚病是人群中患病率最高的感染性皮膚病。真菌性皮膚病的主要致病菌有酵母菌、皮膚癬菌及霉菌等。據(jù)文獻報道，近年來我國致病真菌菌群發(fā)生明顯改變。原來以紅色毛癬菌為主要代表的皮膚癬菌所占比例逐年下降，盡管仍然占據(jù)首位，但是一些條件致病菌，如白色念珠菌呈明顯上升趨勢［1-2］。這些真菌能夠引起各種類型的足癬，足癬也是真菌性皮膚病的一種［1］。

針對足癬的抗菌襪是在一定時間內抑制足部細菌生長、繁殖或殺滅細菌的一類功能襪。通過面料的抗菌整理、加工技術將抗菌材料與襪子面料的制造工藝相結合，使襪子具備抗菌性能。目前采用的抗菌技術主要是抗菌劑整理、銀離子抗菌以及抗菌纖維抗菌等［3］。而丁香和魚腥草都是常見的天然中草藥，其對白色念珠菌等多種致病性真菌均有抑制作用［4-5］，以天然中草藥作為抗菌劑整理的抗菌技術是現(xiàn)代生態(tài)紡織品發(fā)展的一個新趨勢。

1 中草藥抗菌襪的制備

1.1 材料與儀器

試驗材料:中草藥丁香、魚腥草(購于南通市蘇博大藥房)，市售100%純棉襪(購于超市)。

主要試劑:殼聚糖、檸檬酸、次亞磷酸鈉(均為分析純，上海市國藥集團化學試劑有限公司)、有機硅柔軟劑。

主要儀器:HJ-1型磁力攪拌器(江蘇金壇市振興榮華儀器制造有限公司)，F(xiàn)W100型高速萬能粉碎機(天津市泰斯特儀器有限公司)，BSA2202S型高精度電子天平(賽多利斯科學儀器﹝北京﹞有限公司)，CL-100型雙層鐵皮電爐(上海日用電爐廠)，實驗小軋車(南通宏大實驗儀器有限公司)。

1.2 丁香、魚腥草有效成分提取

將丁香、魚腥草置于陰涼處自然晾干，分別取300 g，粉碎后加1 000 mL的純水在室溫浸泡24 h，煮沸2 h，過濾。藥渣再加純水500 mL繼續(xù)煮沸30 min，過濾并加純水重復煮1次，合并3次煎液，6層紗布過濾后濃縮至2 g/mL，即分別為丁香、魚腥草的水提物。

1.3 丁香、魚腥草提取物抗菌整理工藝

將純棉襪分別在含有m1(丁香水提物、殼聚糖1.5%、檸檬酸 4.0%、次亞磷酸鈉 1.5%、有機硅柔軟劑0.5%)，m2(魚腥草水提物、殼聚糖1.5%、檸檬酸4.0%、次亞磷酸鈉1.5%、有機硅柔軟劑0.5%)的整理液中，二浸二軋，浴比 1∶20，軋液率85%左右。浸軋后的純棉襪在80℃下預烘5 min，高溫140℃烘焙3 min，再經(jīng)40℃的純水充分水洗，室溫晾干，得到對應的丁香抗菌棉襪M1、魚腥草抗菌棉襪M2。

2 抗菌襪的抗菌性能測試

2.1 抗菌襪

測試的抗菌襪包括上述制備的2種天然中草藥抗菌襪和市售的4種抗菌襪(如表1所示)。

表1 市售抗菌襪信息

2.2 試驗菌

致病真菌:白色念珠菌、紅色毛癬菌、須癬毛癬菌、絮狀表皮癬菌，購于南京皮膚病防治研究所，于4℃改良PDA斜面上保藏。

2.3 培養(yǎng)基與試劑

改良PDA培養(yǎng)基和20 mmol/L的pH值為7.2的磷酸鹽緩沖溶液(PBS)。試驗所用試劑均為分析純或適用于微生物試驗用的試劑，試驗用水為純水。

2.4 主要儀器

SYQ-DXS-280A型手提式高壓滅菌器(上海申安醫(yī)療器械廠)，BSA2202S型高精度電子天平(賽多利斯科學儀器﹝北京﹞有限公司)，HYG-A型全溫搖瓶柜(太倉市實驗設備廠)，HJ-1型磁力攪拌器(江蘇金壇市振興榮華儀器制造有限公司)，PHS-3E型酸度顯示計(上海精科雷磁儀器廠)，SW-CJ-1BU型超凈工作臺(蘇州安泰空氣技術有限公司)，GNP-9080型隔水式恒溫培養(yǎng)箱(上海三發(fā)科學儀器有限公司)，冰箱，刻度吸管、試管、燒瓶等微生物試驗常用器具。

2.5 測試方法

本研究所用抗菌測試方法為 AATCC 100—2004，經(jīng)改良后使用。

2.5.1 樣品處理

測試的6種抗菌襪經(jīng)中性洗滌劑洗滌，常溫晾干。分別將其剪成2 cm×2 cm的正方形，裝入250 mL錐形瓶中，121℃蒸汽滅菌30 min，烘干備用。

2.5.2 菌懸液制備

在無菌操作狀態(tài)下，將白色念珠菌、紅色毛癬菌、須癬毛癬菌和絮狀表皮癬菌從保藏斜面分別接入新鮮的改良PDA斜面上，置于適宜的溫度(白色念珠菌37℃，紅色毛癬菌、須癬毛癬菌和絮狀表皮癬菌28℃)下培養(yǎng)一定時間(白色念珠菌2 d，紅色毛癬菌、須癬毛癬菌和絮狀表皮癬菌5 d)，對菌種進行活化處理。再往斜面中加入一定量的PBS，將孢子或菌體洗脫下來，利用梯度稀釋法，使得液體中活菌數(shù)達到1×108～5×108cfu/mL，制得菌懸液。

2.5.3 “0 h”接觸時間取樣

①在無菌環(huán)境中，用刻度吸管取1 mL菌懸液分別滴入已滅菌的樣品上，讓菌懸液浸潤樣品。②再加入99 mL已滅菌的PBS，封口后置于搖床，300 r/min振蕩20 min。然后分別取稀釋度為100、101、102三個梯度的 PBS菌液0.1 mL涂布改良PDA平板。并置于適宜的溫度(白色念珠菌37℃，紅色毛癬菌、須癬毛癬菌和絮狀表皮癬菌28℃)下培養(yǎng)一定時間(白色念珠菌2 d，紅色毛癬菌、須癬毛癬菌和絮狀表皮癬菌5 d)，計算活菌數(shù)。

2.5.4 “18 h”取樣

在2.5.3節(jié)①完成后，封口置于適宜的溫度(白色念珠菌37℃，紅色毛癬菌、須癬毛癬菌和絮狀表皮癬菌28℃)下培養(yǎng)18 h。再加入99 mL已滅菌的PBS，封口后置于搖床，300 r/min振蕩20 min。然后分別取稀釋度為100、101、102三個梯度的PBS菌液0.1 mL涂布改良PDA平板。并置于適宜的溫度(白色念珠菌37℃，紅色毛癬菌、須癬毛癬菌和絮狀表皮癬菌28℃)下培養(yǎng)一定時間(白色念珠菌2 d，紅色毛癬菌、須癬毛癬菌和絮狀表皮癬菌5 d)，計算活菌數(shù)。

2.5.5 抑菌率計算方法

菌落計數(shù)直接用肉眼觀察即可(必要時采用放大鏡)，活菌數(shù)計數(shù)的報告方法可按下述原則進行:

(1)首先從 100、101、102的三個稀釋度中，選擇菌落數(shù)20～200的平板作為菌落總數(shù)測定標準。統(tǒng)計公式:菌落總數(shù)=平板菌落數(shù)×其稀釋倍數(shù)。

(2)若兩個稀釋度，其生長的菌落數(shù)均在20～200，則按兩者菌落總數(shù)之比值來決定。若比值小于2，應報告兩者的平均數(shù);若比值大于2，則報告其中較小的菌落總數(shù)。

(3)若所有稀釋度的平均菌落數(shù)均大于200，則應按稀釋度最高的平均菌落數(shù)乘以稀釋倍數(shù)報告之。

(4)若所有稀釋度的平均菌落數(shù)均小于20，則應按稀釋度最低的平均菌落數(shù)乘以稀釋倍數(shù)報告之。

(5)若所有稀釋度的平均菌落數(shù)均不在20～200，則以最接近20或200的平均菌落數(shù)乘以稀釋倍數(shù)報告之。

抑菌率計算:

式中:Na——“0 h”接觸時間菌落數(shù);

Nb——同一稀釋倍數(shù)的“18 h”培養(yǎng)菌落數(shù)。

3 結果與分析

3.1 市售抗菌襪的抗菌效果

4種市售抗菌襪對白色念珠菌、紅色毛癬菌、須癬毛癬菌及絮狀表皮癬菌的抗菌效果見表2。

表2 4種市售抗菌襪的抗菌測試結果

由表2可知:

(1)經(jīng)抗菌劑整理的棉襪和銀離子抗菌襪對白色念珠菌的抑菌率分別達到71.8%和61.6%，具有一定的抗菌作用。而2種再生竹纖維抗菌襪對白色念珠菌基本不具有抑菌作用。

(2)銀離子整理的棉襪對紅色毛癬菌抑制作用較明顯，達到94.3%;其次是竹炭纖維抗菌襪，達到88.5%;而其余2種抗菌襪對紅色毛癬菌也有一定的抑制作用。

(3)2種再生竹纖維抗菌襪對須癬毛癬菌的抗菌效果甚佳，抑菌率均達到94%以上?？咕鷦┱砗豌y離子整理的棉襪也具有一定的抑菌效果，但不如再生竹纖維的好。

(4)抗菌劑整理的棉襪和再生竹漿纖維抗菌襪對絮狀表皮癬菌有較好的抑制效果，抑菌率分別達到99.7%和97.5%。而竹炭纖維抗菌襪和銀離子抗菌襪對該菌的抑菌率偏低，抗菌作用較弱。

3.2 天然中草藥抗菌襪的抗菌效果

天然中草藥抗菌襪的測試結果見表3。由表3可知，丁香抗菌襪對白色念珠菌、紅色毛癬菌、須癬毛癬菌和絮狀表皮癬菌都具有很好的抑菌效果;而魚腥草抗菌襪只對紅色毛癬菌、須癬毛癬菌和絮狀表皮癬菌具有較好的抑菌效果，對白色念珠菌沒有抑菌作用。這是因為丁香的主要抗菌成分丁香酚以及魚腥草的抗菌有效成分魚腥草素、月桂醛等經(jīng)過殼聚糖交聯(lián)整理后，這些物質很好地滲入到了棉纖維中并與之緊密結合，將抗真菌成分牢固地附著在棉織物上，從而賦予了棉襪良好的抑菌性能。

表3 天然中草藥抗菌襪的抗菌測試結果

4 結語

市售抗菌襪中，各種抗菌技術的適應菌各有不同，抑菌效果也有差別。經(jīng)抗菌整理劑整理的棉襪對絮狀表皮癬菌和白色念珠菌的抑制率是4種抗菌襪中最好的，而且對紅色毛癬菌和須癬毛癬菌也有一定的抑制作用。銀離子整理的抗菌襪對紅色毛癬菌抗菌效果最好，達到94.3%，對其他3種真菌也有一定抑制作用。竹漿纖維抗菌襪對須癬毛癬菌和絮狀表皮癬菌的抑制作用較好，但是對白色念珠菌不存在抑制作用。同樣問題也存在于竹炭纖維抗菌襪，它對白色念珠菌也不具有抑制作用，只是對須癬毛癬菌具有較好的抑制效果。

與市售抗菌襪相比，以中草藥丁香和魚腥草為抗菌劑制備的抗菌襪抑菌效果更加明顯，具有更加廣譜的抗真菌作用。尤其是丁香抗菌襪，對4種真菌的抑菌率都在90%以上，而且來源廣泛，制備成本相對較低，對于足部保健護理、預防疾病有更加顯著的效果。

隨著人們生活水平和環(huán)保意識的不斷提高，開發(fā)天然中草藥抗菌紡織品和服裝可以作為今后倡導綠色、環(huán)保、天然的生態(tài)紡織品的發(fā)展方向。

［1］SEEBACHER Claus，BOUCHARA Jean-Philippe，MIGNON Bernard.Updates on the epidemiology of dermatophyte infections［J］.Mycopathologia，2008，166:335-352.

［2］徐薇，趙俊英，王增芳，等.足癬致病菌的菌種分析［J］.中國醫(yī)刊，2005，40(10):49.

［3］嚴方平.醫(yī)用功能纖維的分類及生產(chǎn)方法［J］.中國纖檢，2011(13):85-87.

［4］李虹，黃欣，施偉民.中草藥抗真菌研究新進展［J］.中國真菌學雜志，2009，4(1):62-64.

［5］郭亞麗，洪佳璇.魚腥草的藥理研究及臨床應用進展［J］.內蒙古中醫(yī)藥，2009(4):56-57.