不同采收期對藍莓抗氧化物質的影響1）

段宇，張萌萌，曲文穎，劉真真，敖紅

（東北林業大學生命科學學院，哈爾濱150040）

藍莓為杜鵑花科越橘屬，也稱為藍梅、篤斯，一般為多年生落葉或常綠灌木，根據栽培類型的3大商業特點可分為兔眼、高叢和矮叢3種。藍莓果富含花青甙，且低糖、低脂肪，特別是其較強的抗氧化能力，使其被國際糧農組織列為人類5大健康食品之一。隨著人們生活水平的提升，藍莓因其獨特風味、較強的營養保健功能而備受關注，在世界上被列入第三代水果行列［1－2］。

藍莓果實中的花色素苷是重要的抗氧化物質，它分布廣泛，可溶于水、無毒，是植物多酚類黃酮化合物。除此之外，藍莓果實中還富含多種保護酶，如SOD、POD等［3］。這些抗氧化物質在保護機體免受細胞新陳代謝過程中產生的自由基的傷害方面起著重要作用。藍莓果實發育受許多因素影響，從落花至果實成熟一般需要50～60天，采收期大概持續一個月左右［4］。有研究表明草莓果實中抗氧化物質含量和抗氧化活性隨采收時期的推移呈上升趨勢［5］，那么在藍莓中是否存在相似的變化規律呢？因而本項試驗在不同采收期對藍莓中的一些重要的抗氧化物質進行測定，探討它們的在不同采收期的變化規律，以期為今后藍莓采收中采收期的選擇提供一定的理論依據。

1 材料與方法

1.1 材料

試驗材料系黑龍江省生態研究所內實驗田中種植的北村、美登兩個藍莓品種，株行距約20cm，3年生。成熟后第7、14、21d取樣。取樣時，從3株藍莓植株上采取藍莓果實，速凍保存。

1.2 生理生化指標測定方法

1.2.1 果重的測定

取百顆大小、色澤較為一致的藍莓果，測得重量，并分別記錄、計算。

1.2.2 花色素苷和總黃酮含量的測定

樣品制備：選取不同采收期的藍莓果實，稱取50g藍莓果，洗凈，研磨破碎后，加入60%酸化乙醇按1∶10的比例，37℃水浴1h，抽濾1次，濾渣重復抽提1次，合并濾液，旋轉蒸發濃縮，得藍莓濃縮液。

分別取1mL濃縮液置于烘至恒重的平皿中，平皿烤干后得質量差，通過質量差得出藍莓提取物的質量，進而用60%乙醇調平不同濃縮液之間的濃度差，得到濃度相同的提取液，其濃度為0.018g／mL。

花色素苷含量的測定：花色素苷含量測定采用pH示差法［6］，配制pH 1.0緩沖液和pH 4.5緩沖液，取不同采收期藍莓濃縮液稀釋20倍，平衡80分鐘，分別在525nm和700nm下測定吸光度值，再根據公式測定花色素苷含量。

總黃酮含量的測定：總黃酮含量測定采用Zhishen等［7］方法，配制蘆丁標準溶液，并繪制蘆丁標準曲線，再進行總黃酮含量的測定，取不同采收期藍莓濃縮液，在510nm條件下用分光光度計測定反應液的OD值，用蘆丁做標準曲線得總黃酮含量。

1.2.3 不同采收期藍莓超氧化物歧化酶（SOD）和過氧化物酶（POD）活性的測定

超氧化物歧化酶（SOD）活性的測定：超氧化物歧化酶活性的測定采用NBT［8］的方法，取0.5g材料，在560nm測定光吸收值，以不加酶液為對照，以暗中對照管作為空白（調零），計算SOD活性。

過氧化物酶（POD）活性的測定：過氧化物酶活性的測定采用張志良的方法［9］，稱取材料0.2g，于分光光度計470nm波長下測量OD值，每隔30s測1次。以每分鐘OD變化值表示酶活性大小，即以ΔOD470／min·g（鮮重）表示。

1.3 數據統計分析

所列結果為3次重復的平均測定值，數據采用EXCEL軟件進行統計分析和作圖。

2 結果與分析

2.1 不同采收期對藍莓果重的影響

在試驗期內，隨著采收期的延后，北村和美登2個品種的果實重量均逐漸加大，見圖1。這主要是由于更長的光照時間增加了有機物的積累，果重逐漸增加。但2種藍莓品種的成熟果果重隨著采收時期的變化呈現不同的變化趨勢，北村在采收后期果重隨采收時間變化更為明顯。這是否是由于北村在這一階段具有更高的光合能力，有待于進一步研究。因此在實際生產實踐中，可以根據藍莓果重的變化情況，再結合藍莓實際的銷售時期進行適時采摘。

圖1 不同采收期對藍莓果重的影響

2.2 不同采收期對藍莓中花色素苷含量的影響

兩個藍莓品種的成熟果中花色素苷含量均隨著采收期的推移呈上升趨勢，見圖2。花色素苷含量的多少受到多方因素的影響，如光照、水分、溫度、有機物的含量。隨著采收期的推移，藍莓果中有機物不斷的積累，尤其是糖類物質不斷增多，因此花色素苷的含量也隨之升高。

圖2 不同采收期對藍莓中花色素苷含量的影響

2.3 不同采收期對藍莓果中總黃酮含量的影響

圖3 不同采收期對藍莓中總黃酮含量的影響

隨著采收期的推移，北村和美登2個品種的藍莓果中總黃酮含量均呈增長趨勢，且美登表現得更為顯著，見圖3。藍莓中總黃酮含量變化很可能是由于隨著采收期的推遲，合成黃酮的相關基因不斷表達，相關酶促進前體物質不斷轉化成黃酮，致使黃酮含量的增加。

2.4 不同采收期對藍莓超氧化物歧化酶（SOD）活性的影響

如圖4，隨著采收期的推移，兩個品種的藍莓SOD活性均呈上升趨勢，且在不同的采收階段，美登SOD活性都高于北村。超氧化物歧化酶可以清除代謝過程中產生的自由基，以減輕自由基對植物體本身的傷害。藍莓SOD活性隨采收時間增大，可能是由于植物隨著采收期時間的推移本身的代謝活動加劇，產生較多自由基，底物濃度的增大促進酶的活性增強，從而起到保護植物體的作用

圖4 不同采收期對藍莓超氧化物歧化酶（SOD）活性的影響

2.5 不同采收期對藍莓過氧化物酶（POD）活性的影響

如圖5，隨著采收期的推移，藍莓POD活性呈現降低趨勢，且趨勢較為明顯。一般認為，SOD催化歧化反應，將超氧陰離子自由基轉化為H2O2后，應由POD繼續催化H2O2的分解，以降低H2O2對細胞的傷害，因此兩者的變化規律應基本一致。但本次試驗的結果卻相反，這其中的原因有待于進一步研究。

圖5 不同采收期對藍莓過氧化物酶（POD）活性的影響

3 結論和討論

抗氧化物質可消除機體代謝過程中產生的自由基，從而保護機體。本試驗在不同采收期對藍莓主要活性物質含量及活性進行測定，結果發現試驗期內北村和美登兩個品種果實中的抗氧化物質含量和抗氧化活性隨采收期的推移而增加，即越靠近采收期的末端，含量和活性就越高。花色素苷和黃酮是藍莓中重要的抗氧化活性成分，它們含量的多少影響著藍莓果的抗氧化能力，而SOD、POD的活性也可以反映出藍莓果抗氧化能力的強弱。因此從獲得高品質藍莓的角度來看，建議盡可能在采收期的后期進行采收。

與此同時，根據本次試驗的結果我們得到一些初步的推斷，這些假設需要進一步的探究和論證。如花色素合成受到許多因素的影響［10］，那么與花色素合成相關的一些酶的基因是否在采收后期更多的表達；另外POD在采收后期活性減低的原因是什么等。這些問題的闡明將對今后的相關方面的理論研究提供重要的參考依據。

［1］ 李麗敏，趙春雷，郝慶.中外藍莓產業比較研究［J］.中國農學通報，2010，26（23）：354－359.

［2］ 史海芝，劉惠民.國內外藍莓研究現狀［J］.江蘇林業科技，2009，36（4）：48－52.

［3］ 胡雅馨，李京，惠伯棣.藍莓果實中主要營養及花青素成分的研究［J］.食品科學，2006，27（10）：600－603.

［4］ 王柏林，楊瑞華.寒地小漿果優質豐產栽培技術［M］.哈爾濱：東北林業大學出版社，2009：84－85.

［5］ 張豫超，謝鳴，陳俊偉，等.不同采收期草莓果實抗氧化物質含量和抗氧化活性的變化［J］.浙江農業學報，2009，21（3）：250－254.

［6］ 王少波，杜永峰，姚秉華.pH示差法測定黑豆皮中的花色素［J］.化學分析計量，2008，l17（10）：47－49.

［7］ Zhishen J，Mengcheng T，Jianming W.The determination of Flavonoid contents in mulberry and their scavenging effects on superoxide radicals［J］.Food Chem.，1999，64（13）：555－557.

［8］ 郝建軍，劉延吉.植物生理學實驗技術［M］.沈陽：遼寧科學技術出版，2001：103－105.

［9］ 李合生.植物生理生化實驗原理和技術.北京：高等教育出版社，2000：135－168.

［10］ 姜衛兵，徐莉莉，翁忙玲，等.環境因子及外源化學物質對植物花色素苷的影響［J］.生態環境學報，2009，18（4）：1546－1552.