四氯對苯醌為受體荷移分光光度法測定苯唑西林鈉

(太原理工大學(xué)化學(xué)化工學(xué)院,太原030024)

1 引言

苯唑西林鈉(oxacillin sodium )，屬半合成青霉素類抗生素，其抗菌作用方式與青霉素相似,對耐青霉素G 的金黃色葡萄球菌具有殺菌作用。 臨床主要用于治療敏感菌所致的各種感染，如肺炎、敗血癥、乳腺炎、燒傷創(chuàng)面感染、化膿性腦膜炎和骨髓炎、扁桃體炎、峰窩組織炎及膿皮病等。目前關(guān)于苯唑西林鈉已報道的分析方法主要有，高效液相色譜法[1-3]、分光光度法[4，5]、化學(xué)發(fā)光法[6]和電位滴定法[7]等。而利用四氯對苯醌作為配體與苯唑西林鈉反應(yīng)形成荷移絡(luò)合物測定苯唑西林鈉含量的方法尚未見文獻報道。實驗參考有關(guān)文獻[8]，基于藥物分子中含有能夠給予電子的基團，它與電子接受體四氯對苯醌發(fā)生荷移反應(yīng),在乙醇介質(zhì)中藥物分子與四氯對苯醌形成穩(wěn)定的1∶1荷移絡(luò)合物。詳細(xì)研究了苯唑西林鈉與四氯對苯醌形成荷移絡(luò)合物的反應(yīng)條件,探討了反應(yīng)機理,建立了一種簡便，快速測定苯唑西林鈉含量的分光光度新方法，結(jié)果令人滿意。

2 實驗部分

2.1 主要儀器與試劑

儀器：UV-265紫外可見分光光度計(日本島津公司)，HH-S 型恒溫水浴鍋(河南鞏義市英峪予華儀器廠)。

試劑：3×10-3mol.L-1四氯對苯醌乙醇溶液(上海易利生化試劑有限公司,AR)；2000 μg/mL苯唑西林鈉乙醇標(biāo)準(zhǔn)溶液(中國藥品生物制品檢定所)；所用試劑均為分析純，實驗用水為二次去離子水。

2.2 實驗部分

準(zhǔn)確吸取一定量的2000 μg/mL苯唑西林鈉乙醇標(biāo)準(zhǔn)溶液于10 mL容量瓶中,加入3×10-3mol/L 四氯對苯醌乙醇溶液4.0 mL，用乙醇稀至刻度,搖勻后在40℃恒溫水浴中放置10 min,用1cm 的比色池以試劑空白為參比，于波長424.8 nm處測定其吸光度。

3 結(jié)果和討論

3.1 吸收光譜

按照實驗方法配制溶液于分光光度計上掃描,所繪制吸收光譜見圖1,四氯對苯醌試劑的吸收波長λmax=280.0 nm,苯唑西林鈉的吸收波長λ max=339.0 nm，在苯唑西林鈉溶液中加入四氯對苯醌溶液后，在424.8 nm處出現(xiàn)一新的吸收峰，表明有新物質(zhì)生成，且吸光度值與濃度在一定范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系。本實驗以絡(luò)合物424.8 nm作為測定波長，同時以試劑空白為參比，測定溶液的吸光度值。

圖1 吸收光譜A.四氯對苯醌；B.苯唑西林鈉；C.絡(luò)合物

3.2 溶劑的選擇

選用水、乙醇、甲醇、丙酮、乙腈、二甲基亞砜等不同的溶劑按照實驗方法配制溶液,測量其吸光度，結(jié)果表明,苯唑西林鈉與四氯對苯醌在乙醇溶劑中測得其吸光度值最大，本實驗選擇乙醇作為反應(yīng)溶劑。

3.3 反應(yīng)溫度與反應(yīng)時間的影響

按照實驗方法進行實驗，改變反應(yīng)溫度20～60 ℃和反應(yīng)時間5～30 min，測量其吸光度，結(jié)果表明苯唑西林鈉與四氯對苯醌生成的絡(luò)合物在反應(yīng)溫度40 ℃，反應(yīng)時間5～30 min時其吸光度達到最大值并趨于穩(wěn)定，本實驗選擇反應(yīng)時間為10 min。

3.4 四氯對苯醌試劑用量的影響

按照實驗方法進行,改變四氯對苯醌試劑用量,結(jié)果表明,苯唑西林鈉與3×10-3mol/L四氯對苯醌反應(yīng)時,四氯對苯醌試劑用量在3.0～6.0 mL范圍內(nèi)吸光度趨于穩(wěn)定，本實驗選用四氯對苯醌試劑4.0 mL,見圖2。

圖2 四氯對苯醌試劑用量的影響

3.5 標(biāo)準(zhǔn)曲線及靈敏度

分別取0.2 mL、0.6 mL、1.0 mL、1.5 mL、2.0 mL的苯唑西林鈉2000 μg/mL標(biāo)準(zhǔn)溶液，按照實驗方法測量其吸光度，并繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，見圖3。苯唑西林鈉含量在40～400 ug/ml符合比爾定律，相關(guān)系數(shù)為 r=0.9997，線性方程A=0.0009358C+0.01065，表觀摩爾吸光系數(shù)ε=4.32×102L.mol-1.cm-1。

3.6 絡(luò)合物組成及反應(yīng)機理探討

用等摩爾連續(xù)變化法測定苯唑西林鈉與四氯對苯醌形成絡(luò)合物的組成比為1∶1,見圖4。在苯唑西林鈉分子中含有電子給予體的基團存在[5，8]，而四氯對苯醌是一個良好的電子接受體[9]，在乙醇溶液中苯唑西林鈉與四氯對苯醌可生成穩(wěn)定的荷移絡(luò)合物，經(jīng)實驗測得在波長424.8 nm處有一強的特征吸收峰，與原來藥物吸收峰相比有明顯紅移，證明生成了荷移絡(luò)合物。

圖3 標(biāo)準(zhǔn)曲線

圖4 等摩爾連續(xù)變化法[D]—苯唑西林鈉；[R]—四氯對苯醌

3.7 干擾物質(zhì)實驗

在實驗的最佳條件下考察了其它物質(zhì)對苯唑西林鈉測定的干擾情況。當(dāng)相對誤差在 ±5% 時，800倍量的乳糖或淀粉,400 倍量的蔗糖或萄葡糖,250倍量的硬脂酸鎂和100倍量的果糖等共存物質(zhì)均不干擾測定。

3.8 樣品分析

3.8.1 試樣溶液制備

分別取苯唑西林鈉膠囊20粒(苯唑西林鈉250 mg/粒)，將膠囊中藥劑倒出混勻,準(zhǔn)確稱取含有苯唑西林鈉的藥粉1/25(約含苯唑西林鈉200 mg)，用適量水溶解,并過濾于100 mL容量瓶中,用水洗滌,除去不溶物,用水稀釋至刻度(濃度約為2000 μg/mL),搖勻備用。

取注射用苯唑西林鈉1支(苯唑西林鈉500 mg/支)，準(zhǔn)確稱取苯唑西林鈉藥粉200 mg，用適量水溶解,至于100 mL容量瓶中,用水稀釋至刻度(濃度約為2000 μg/mL),搖勻備用。

3.8.2 樣品含量的測定

精密量取上述樣品制備溶液1.00 mL于10 mL的容量瓶中，按實驗方法進行測定，代入線性方程計算每枚藥物中苯唑西林鈉的平均含量，結(jié)果見表1。

3.8.3 方法的回收率和精密度

精密量取經(jīng)多次測定已知含量的同一批苯唑西林鈉適量樣品制備溶液,分別加入不同量的苯唑西林鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液,至于10 mL的容量瓶中，按實驗方法測量其吸光度，平行測定5次，按標(biāo)準(zhǔn)加入法測定回收率為98.74%-100.3%,相對標(biāo)準(zhǔn)偏差≤2.56%，結(jié)果見表1。

表1 樣品測定結(jié)果及回收率(n=5)

膠囊：苯唑西林鈉膠囊由朗致集團博康藥業(yè)有限公司生產(chǎn)，標(biāo)示量為0.25g/粒。

針劑：注射用苯唑西林鈉由上海新先鋒藥業(yè)有限公司生產(chǎn)，標(biāo)示量為0.5g/支。

4 結(jié)論

該方法利用四氯對苯醒試劑作為電子接受體與電子給予體苯唑西林鈉反應(yīng)，在乙醇溶液中形成穩(wěn)定的1∶1荷移絡(luò)合物,并在波長424.8 nm處出現(xiàn)較強的絡(luò)合物特征吸收峰，證明生成了荷移絡(luò)合物，與原來藥物吸收峰相比有明顯紅移。經(jīng)對實驗條件進行優(yōu)化，苯唑西林鈉含量在40～400 ug/ml符合比爾定律，相關(guān)系數(shù)為 r=0.9997，同時對市售樣品苯唑西林鈉針劑和膠囊進行測定及回收率實驗?；厥章蕿?8.74%～100.3%,相對標(biāo)準(zhǔn)偏差≤2.56%。該方法簡便，快速，測定波長在可見區(qū)，易于推廣，為定量測定苯唑西林鈉制劑提供了一種新方法。

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