南京某牛場新孢子蟲病的調(diào)查及分析

郝 攀，李文生，劉 群

（中國農(nóng)業(yè)大學(xué)動物醫(yī)學(xué)院 農(nóng)業(yè)部國家動物原蟲實(shí)驗(yàn)室，北京 海淀100193）

新孢子蟲是由美國寄生蟲學(xué)家Dubey在1988年命名為新屬新種的專性寄生原蟲，隸屬于頂復(fù)門，能感染多種動物，主要危害是造成牛的流產(chǎn)、死胎等繁殖障礙，給養(yǎng)牛業(yè)尤其是奶牛養(yǎng)殖業(yè)帶來巨大的經(jīng)濟(jì)損失；其次是導(dǎo)致犬的神經(jīng)肌肉功能障礙。

國內(nèi)對新孢子蟲的研究報道始于2003年［1］，流行病學(xué)調(diào)查顯示，國內(nèi)大部分省區(qū)的牛場廣泛存在新孢子蟲感染，部分奶牛場的牛新孢子蟲抗體陽性率達(dá)50%以上［2－3］。2007年，張維等在流產(chǎn)胎牛的腦組織中觀察、鑒定了新孢子蟲包囊，首次確認(rèn)新孢子蟲在中國牛群中的存在［4］。雖然新孢子蟲感染是導(dǎo)致孕牛流產(chǎn)的主要原因之一已成為寄生蟲學(xué)研究者的共識，但我國對于牛新孢子蟲的感染、流行及發(fā)病的研究還相對較少。

2012年6月，本實(shí)驗(yàn)室接收南京某牛場送來奶牛血樣16份。送檢原因是該牛場去年和今年連續(xù)發(fā)生暴發(fā)性流產(chǎn)，排除了其他流產(chǎn)病因。所采集的血樣均來自一年內(nèi)發(fā)生過流產(chǎn)的奶牛。本實(shí)驗(yàn)室應(yīng)用SRS2－ELISA（自建）檢測血清新孢子蟲抗體，結(jié)果顯示，其中8份為新孢子蟲抗體陽性，陽性率達(dá)50%。鑒于該場流產(chǎn)的發(fā)生和血樣新孢子蟲抗體的高陽性率，懷疑該牛場的暴發(fā)性流產(chǎn)系由新孢子蟲感染所致，遂與牛場負(fù)責(zé)人聯(lián)系，由本實(shí)驗(yàn)室人員到現(xiàn)場考察牛場飼養(yǎng)管理情況，采集更多血樣以便對該牛場流產(chǎn)發(fā)生原因進(jìn)行全面分析。

1 調(diào)查項(xiàng)目和方法

1.1 牛場及牛群的建立時間、牛場規(guī)模、飼養(yǎng)管理情況、周圍環(huán)境、場內(nèi)養(yǎng)犬情況等。牛群購進(jìn)時間及來源、年齡、流產(chǎn)發(fā)生情況、其他疫病的免疫預(yù)防及發(fā)病等。

1.2 全群采集血樣。

1.3 應(yīng)間接ELISA試劑盒（自建）檢測血清新孢子蟲抗體。該試劑盒以表面重組蛋白SRS2作為包被抗原，經(jīng)驗(yàn)證與IFAT檢測符合率為91.7%。

2 結(jié)果

2.1 牛場 該牛場位于南京市南郊，為個體所有的小型奶牛養(yǎng)殖小區(qū)，建于2005年，建立之初僅一間牛舍，奶牛200余頭。從2008開始逐步擴(kuò)建，其他養(yǎng)殖戶加入。2011年共有奶牛260余頭，由8個養(yǎng)殖戶所有，牛舍4間，共用1個擠奶車間和1個池塘。牛場與外界沒有嚴(yán)格隔離，人和其他動物可自由出入。主要喂食青草，偶爾補(bǔ)充精飼料。2012年2月之前飲水來自牛場內(nèi)的池塘，水源未做任何過濾及消毒處理，之后改用城市自來水。牛場自建立之初即養(yǎng)犬，到2011年達(dá)到8只，偶有野犬進(jìn)入。犬只能夠自由出入牛的圈舍，所以有流產(chǎn)發(fā)生或產(chǎn)犢后，吃食死胎及胎盤的機(jī)會很多。2012年初撲殺全部8只犬，開始飼養(yǎng)2只幼犬。

2.2 牛群 建場之初僅有20余頭奶牛，2008年達(dá)160余頭，2011年至2012年又有3個養(yǎng)殖戶的100頭奶牛加入，達(dá)260余頭，分別由8戶所有。養(yǎng)殖戶各自采購牛只，主要來源于附近其他牛場，購進(jìn)時未做任何疾病檢測。牛只年齡為1至8歲，常規(guī)免疫布魯菌病和口蹄疫疫苗，每年進(jìn)行2次結(jié)核病檢測。據(jù)牛場負(fù)責(zé)人介紹，各戶均有奶牛流產(chǎn)發(fā)生，其中兩戶較為嚴(yán)重，共有牛60頭左右，每戶各有自由放養(yǎng)犬2只，犬窩位于牛舍內(nèi)。2011年下半年發(fā)生暴發(fā)性流產(chǎn)，其中一戶的20余頭妊娠奶牛幾乎全部流產(chǎn)。個別母牛發(fā)生早產(chǎn)或產(chǎn)出虛弱、癱瘓或不能站立的犢牛，出生后死亡。2012年也有流產(chǎn)發(fā)生，但總體流產(chǎn)率較前一年低。

2.3 血樣采集及檢測 由于流產(chǎn)的發(fā)生，大部分牛只已被處理或賣出，所以只采集到49份血樣，全部來自該養(yǎng)殖小區(qū)存欄量最多的一戶，且該戶奶牛流產(chǎn)近兩年亦有流產(chǎn)發(fā)生，但未發(fā)生暴發(fā)性流產(chǎn)，屬于流產(chǎn)較輕的養(yǎng)殖戶。經(jīng)ELISA檢測，49份血清中檢出新孢子蟲抗體陽性6份，陽性率為12.2%（表1）。

表1 該小區(qū)某戶奶牛流產(chǎn)情況及新孢子蟲抗體檢測

3 分析與討論

本次調(diào)研期望在實(shí)地考察的基礎(chǔ)上，對該奶牛養(yǎng)殖小區(qū)進(jìn)行全群采樣，以便綜合分析該場流產(chǎn)的發(fā)生與新孢子蟲感染之間的相關(guān)性。遺憾的是，由于該小區(qū)牛分屬8戶所有，流產(chǎn)率高的養(yǎng)殖戶已經(jīng)全群淘汰，個別養(yǎng)殖戶則因流產(chǎn)發(fā)生不嚴(yán)重而不愿檢測，最終只采集到1戶養(yǎng)殖有49頭牛的全群血樣。

在現(xiàn)場詢問了解到，前期送檢的16份血清來自4個養(yǎng)殖戶，一年內(nèi)均發(fā)生過流產(chǎn)，流產(chǎn)最嚴(yán)重的兩戶各3份，另兩戶各5份。將檢測結(jié)果與來源核對后發(fā)現(xiàn)，8份陽性血清中的6份來自流產(chǎn)最嚴(yán)重的兩戶，剩余兩份陽性血清分別屬于另兩戶，即來自流產(chǎn)最嚴(yán)重兩個養(yǎng)殖戶的6頭有流產(chǎn)史母牛，其新孢子蟲抗體陽性率為100%。該場犬自由放養(yǎng)，吃食含有新孢子蟲包囊的胎牛組織或胎盤機(jī)會較多；且犬糞便可任意散播或可隨雨水進(jìn)入池塘，亦即犬糞中的新孢子蟲卵囊污染牛的飼料、飲水導(dǎo)致牛的感染，可見犬和牛的傳播極易發(fā)生。Koiwai等的調(diào)查中發(fā)現(xiàn)，新孢子蟲陽性牛的平均流產(chǎn)時間為妊娠5.7個月［5］，Dubey和Schares也認(rèn)為，新孢子蟲感染引起的流產(chǎn)在妊娠5～6個月居多［6］，這與本次調(diào)查中了解的流產(chǎn)高發(fā)于5～6月孕齡相符。盡管后1次采集的49份血清新孢子蟲抗體陽性率僅12.2%，但4～6歲齡奶牛新孢子蟲抗體陽性率達(dá)23.1%，明顯高于其他年齡段。新孢子蟲可感染各年齡段牛，但同時國內(nèi)外也有一些研究認(rèn)為新孢子蟲感染具有一定的年齡趨向。楊娜對北京和沈陽牛場的研究發(fā)現(xiàn)，5歲齡奶牛對新孢子蟲較易感染［7］，Sengupta等對印度奶牛和水牛的調(diào)查也顯示，4歲及以上年齡的牛新孢子陽性率較高［8］。本次檢出的6個陽性牛中的4頭存欄位置非常接近，其抗體水平也較高，可能因一次性大量感染卵囊而致。綜合本次調(diào)研結(jié)果，查閱國內(nèi)外相關(guān)文獻(xiàn)，根據(jù)Dubey等提出的奶牛感染新孢子蟲的風(fēng)險因素，如牛場內(nèi)犬的存在、飼草飲水污染和缺乏管理等［9－10］，可以推定該奶牛養(yǎng)殖小區(qū)2011年至2012年發(fā)生的暴發(fā)性流產(chǎn)主要原因系新孢子蟲感染所致。

奶牛養(yǎng)殖由分散型飼養(yǎng)轉(zhuǎn)為集中型的小區(qū)化飼養(yǎng)已成為國內(nèi)近年來奶牛養(yǎng)殖的重要模式之一，集中管理有利于產(chǎn)奶量的提高和牛奶品質(zhì)的提升。但與已經(jīng)發(fā)展成熟大型規(guī)模化牛場相比，奶牛養(yǎng)殖小區(qū)還存在較多問題，如選址和建場不科學(xué)、養(yǎng)殖小區(qū)環(huán)境較差、養(yǎng)殖戶組建粗放、奶牛購入缺乏監(jiān)管及專業(yè)技術(shù)人員和獸醫(yī)缺乏等，這些因素嚴(yán)重制約奶牛養(yǎng)殖集約化的健康發(fā)展［11］。本次調(diào)研發(fā)現(xiàn)，新孢子蟲病的發(fā)生與飼養(yǎng)管理不規(guī)范、不科學(xué)密切相關(guān)。為預(yù)防新孢子蟲病及其他奶牛疫病的發(fā)生，各地基層防疫人員應(yīng)加強(qiáng)對養(yǎng)殖戶的教育和培訓(xùn)，養(yǎng)殖戶也應(yīng)為長遠(yuǎn)利益考慮，了解購入牛只背景，定期檢疫和淘汰陽性牛，加強(qiáng)飼養(yǎng)管理，以期獲得更大的經(jīng)濟(jì)效益。

［1］劉群，李博，齊長明，等.奶牛新孢子蟲病血清學(xué)檢測初報［J］.中國獸醫(yī)雜志，2003，39（2）：8－9.

［2］巴音查汗，郝建偉，王常漢.應(yīng)用基因重組NcSRS1抗原對新疆部分地區(qū)牛（牦牛）新孢子蟲病的血清學(xué)調(diào)查［J］.中國獸醫(yī)寄生蟲病，2008，16（2）：10－12.

［3］Liu J，Yu Jinshu，Wang Ming，et al.Serodiagnosis of Neospora caninum infection in cattle using a recombinant tNcSRS2 protein－based ELISA［J］.Vet.Parasitology，2007，143：358－363

［4］Zhang W，Deng C，Liu Q，et al.First identification of Neospora caninum infection in aborted bovine foetuses in China［J］.Vet Parasitol，2007，149：72－76.

［5］Koiwai M，Hamaoka T，Haritani M，et al.Seroprevalence of Neospora caninum in dairy and beef cattle with reproductive disorders in Japan［J］.Vet Parasitol，2005，130 ：15－18.

［6］Dubey J P，Schares G.Neosporosis in animals－the last five years［J］.Vet Parasitol，2011，180：90－108.

［7］楊娜.奶牛流產(chǎn)感染性病因及新孢子蟲分離鑒定的研究［D］.北京：中國農(nóng)業(yè)大學(xué)，2007.

［8］Sengupta P P，Balumahendiran M，Raghavendra A G，et al.Prevalence of Neospora caninum antibodies in dairy cattle and water buffaloes and associated abortions in the plateau of Southern Peninsular India［J］.Trop Anim Health Prod，2012，In Press

［9］Dubey J P，Schares G，Ortega－Mora L M.Epidemiology and control of neosporosis and Neospora caninum［J］.Clin Microbiol Rev，2007，20：323－367.

［10］Vanleeuwen J A，Haddad J P，Dohoo I R，et al.Risk factors associated with Neospora caninum seropositivity in randomly sampled Canadian dairy cows and herdsp［J］.Prev Vet Med，2010，93：129－138.

［11］肖云芬，李艷瓊，李小麗，等.淺談奶牛養(yǎng)殖小區(qū)管理中存在的問題［J］.云南畜牧獸醫(yī)，2012，1：19－20.