蒙藥肉豆蔻揮發油對大鼠心律失常的作用△

張子英 伊 樂 愛 民* 孫 虹 趙 娟

(1.內蒙古醫科大學基礎醫學院，內蒙古 呼和浩特 010110;2.內蒙古自治區婦幼保健院，內蒙古 呼和浩特 010020;3.內蒙古醫科大學第一附屬醫院，內蒙古 呼和浩特 010110)

心律失常是常見的心血管疾病，臨床上常用的抗心律失常藥在劑量不當或長期用藥時可誘發傳導阻滯及心衰［1，2］，發生率為 3% ～ 13%［3］。蒙藥肉豆蔻(Myristica Fragrans Houtt，MFH)主治心赫依、心刺痛、心慌等癥［4］，其具有療效高、不良反應少的優點。心“赫依”病，即西醫的心臟疾病。《蒙醫金匱》中記載的用于治療心臟病的13個傳統驗方中，將其入藥，其中6個驗方將其作為主藥［5］。

關于肉豆蔻提取物作用的報道較少，Saleh等報道其提取物對蟾蜍心臟有急、慢性作用，肉豆蔻揮發油對大鼠離體心臟的藥理作用方面的實驗尚未見公開報道。本實驗為肉豆蔻的臨床應用提供了實驗研究基礎。

1 材料和方法

1.1 實驗材料

1.1.1 實驗動物:健康成年Wistar大鼠，雄性，體重180 ～300 g，許可證號SCXK(蒙)2002－001(清潔級)，由內蒙古大學動物研究中心提供。

1.1.2 藥品:肉豆蔻，市售;維拉帕米(0302293)、普萘洛爾(0302293)，山東魯能制藥有限公司;肝素鈉(H12020505)，天津市生物化學制藥廠;鹽酸腎上腺素(05020341)，北京市永康藥業有限公司。

1.1.3 器材:DHT型攪拌恒溫電熱套，鄴城光明儀器有限公司(山東省);Langendorff灌流器，成都泰盟科技有限公司;Medlab－U/4CS生物信號采集處理系統，南京美易科技有限公司;XDH －3動物心電圖機，上海電子儀器廠;XB－D1心電圖示波器，丹東十四無線電廠。

1.2 實驗方法

1.2.1 肉豆蔻揮發油提取［6］:取肉豆蔻 80 g，置圓底燒瓶中，加蒸餾水650 mL，振搖混勻后，連接揮發油測定器與回流冷凝管。自冷凝管上端加水至揮發油測定器的刻度部分。置電熱套中緩緩加熱至沸(其中加攪拌子)，并保持微沸5 h，測定器中油量不增加，停止加熱，放置片刻，開啟測定器下端的活塞，將水緩緩放出，至油層上端達刻度0線上面5 mm處為止，放置1 h以上，開啟活塞緩緩放出揮發油。將揮發油瓶裝蠟封、4℃保存，實驗時用0.5%吐溫溶液配置使用。

1.2.2 體內實驗:Wistar大鼠，體重180 ～250g，64 只大鼠隨機分8組，每組8只。肉豆蔻揮發油組:2個劑量組(0.3、0.6)mL/kg/d，腹腔注射，連續 7d;空白對照組:給相同體積的生理鹽水;陽性對照組:0.4 g/kg維拉帕米和1.4 g/kg普萘洛爾。氯化鈣陽性對照組于給藥前l0 min給維拉帕米，(0.4 g/kg)，20%烏拉坦 1.2 g/kg腹腔注射麻醉，仰位固定，3.5%(140 mg/kg)氯化鈣10 s內頸靜脈快速推注，觀察動物心電示波器，穩定10 min后描記II導心電圖，1 mV定標，走紙速度為50 mm/s。腎上腺素組于給藥前5 min給0.1%普萘洛爾1.4 g/kg然后給腎上腺素(94 ug/kg)，10s內頸靜脈快速推注，觀測方法同前。

1.3 離體實驗［8－7］:Wistar大鼠，體重250 ～300g，隨機分3組，每組8只。肉豆蔻揮發油組:按0.4 mL/L入灌流液;空白對照組:給予同體積的生理鹽水;陽性對照組:10 g/L普萘洛爾入灌流液。2%肝素加20%烏拉坦麻醉［9］，剪開胸腔迅速取出心臟，剪斷上、下腔靜脈、肺動脈、主動脈，將主動脈保留0.5 cm，放人0℃ Kreb－Henseleit buffer灌流液(K－H液)中，并清洗淤血和清除心臟周圍組織，擠出心室內殘血。插上主動脈套管，將心臟轉移到Langendorff灌流裝置上，(37±0.5)℃充有95%02和5%CO2混合氣飽和的K－H液恒壓逆向灌流。

模型建立20 min時，分別給各組肉豆蔻揮發油、生理鹽水、普萘洛爾，25 min給1 mL/min腎上腺素。在5 min、20 min、25 min、30 min;收集經冠狀靜脈竇從右心房、肺動脈和腔靜脈斷端流出的灌流液，此為冠脈流量(CF)［10］，同時記錄心率(HR)。

1.4 數據分析:計量資料數據以±s方式表示，用方差分析;計數資料采用卡方檢驗分析組間各個指標的變化，分析程序采用SPSS11.5統計軟件。

2 結果

2.1 肉豆蔻揮發油對麻醉大鼠心電圖的影響:氯化鈣誘發的心律失常實驗組中，未給氯化鈣之前，描記一段II導心電圖。對比肉豆蔻給藥組與空白對照組的心率，有極顯著性差異(P＜0.01);肉豆蔻揮發油與空白對照組相比，Q－T間期有統計學意義 (P ＜0.05)。

表1 肉豆蔻揮發油對麻醉大鼠心電圖的影響(n=8，±s)

2.2 肉豆蔻揮發油對氯化鈣、腎上腺素誘發的大鼠在體心律失常的保護作用:氯化鈣誘發心律失常在體實驗組中，肉豆蔻揮發油給藥組的心律失常發生率與空白對照組的心律失常發生率相比無統計學意義。肉豆蔻揮發油給藥組與空白對照組死亡率相比均可降低氯化鈣所致死亡率(P＜0.05);肉豆蔻揮發油大劑量組與陽性對照組相比無統計學意義。(見表2)

腎上腺素誘發的大鼠在體心律失常組中，肉豆蔻揮發油給藥組與空白對照組比，可降低腎上腺素誘發的心律失常發生率(P＜0.05);肉豆蔻揮發油組與陽性對照組相比無統計學意義。(見表2)

表2 肉豆蔻揮發油對氯化鈣、腎上腺素誘發的心律失常的影響(n=8，±s)

2.3 肉豆蔻揮發油對大鼠離體心臟的影響:大鼠離體實驗中，對比模型建立5min、20min時，各組間的心率(HR)、冠脈流量(CF)無統計學意義(P＞0.05)。對比模型建立25 min時，肉豆蔻揮發油組與空白對照組的心率、冠脈流量有極顯著性差異(P＜0.01)，肉豆蔻揮發油組與普萘洛爾組的心率無差別(P＞0.05);其與普萘洛爾組的冠脈流量相比也有極顯著性差異(P＜0.01)。模型建立30 min對比發現:肉豆蔻揮發油和空白對照組的心率和冠脈流量有極顯著性差異(P＜0.01);肉豆蔻揮發油組與普萘洛爾組的冠脈流量有極顯著性差異(P＜0.01)，其和普萘洛爾組的心率相比無統計學意義(P＞0.05)。對比不同時間的心率、冠脈流量發現，普萘洛爾組的心率 25min、30min和20min對比時有極顯著性差異(P＜0.01)，其冠脈流量和20 min相比無差異(P＞0.05)，肉豆蔻揮發油組的心率、冠脈流量25 min、30 min和20 min相比有極顯著性差異(P＜0.01)。肉豆蔻揮發油組冠脈流量較空白對照組和普萘洛爾組有極顯著差異(P＜0.01)。(見表3)

表3 肉豆蔻揮發油對離體心臟灌HR、CF的影響(n=8，±S)

3 討論

當前對于抗心律失常藥物的研究認為，具有重要意義的抗心律失常藥物靶點包括:離子通道、細胞間耦聯的分子、最佳靶點假說等［11］。本實驗主要通過觀察肉豆蔻揮發油對實驗性大鼠在體心律失常模型及離體心臟灌流模型的影響，研究其抗心律失常作用及其作用靶點。

3.1 肉豆蔻揮發油對麻醉大鼠心電圖的影響電生理實驗證實，一般情況下只有使心率減慢的藥物才具有抗心律失常作用［12］。本實驗大鼠心電圖結果顯示:對比不同劑量給藥組和空白對照組，發現肉豆蔻揮發油能減慢心率、延長Q－T間期。從這一結果看來，肉豆蔻抗心律失常作用的作用，介于抗心律失常藥II類(β－受體阻斷劑)和III類(延長動作電位時程藥)之間［13］;負性頻率、負性傳導作用可能是其抗心律失常作用的一個重要的藥理學基礎。

3.2 肉豆蔻揮發油對氯化鈣誘發的心律失常的影響:氯化鈣可影響心肌細胞上的鈣通道，使大量鈣離子進人心肌細胞，導致異位心律失常［9］。快速靜推140 mg/kg氯化鈣，約80%的大鼠在數秒鐘內死于室顫［10］。一般在注射過程中或注入后立即出現心律失常，持續20 min以上［14］。維拉帕米電生理效應主要是通過抑制依賴于鈣的動作電位與減慢房室結的傳導速度。觀察大鼠給氯化鈣30 min內所致的心律失常心電圖變化及死亡率。實驗結果表明:肉豆蔻揮發油對氯化鈣誘發的心律失常無拮抗作用，肉豆蔻揮發油大劑量與維拉帕米降低氯化鈣誘發的心律失常所致死亡率作用相當，其降低死亡率可能與神經、體液等其他因素有關。

3.3 肉豆蔻揮發油對腎上腺素誘發的心律失常的影響:普萘洛爾是β－受體阻滯藥，對抗腎上腺素對心臟的過度興奮作用，有效的預防腎上腺素過量所致的心律失常［15］。抗心律失常藥物的發展趨勢為阻斷多重通道，多通道阻滯劑和β－受體阻滯劑的聯合應用顯示出廣闊前景［14］。本實驗結果表明:肉豆蔻揮發油可明顯降低腎上腺素誘發的心律失常發生率(P＜0.05)，對腎上腺素誘發的大鼠在體心律失常有明顯的拮抗作用，抗腎上腺素引起的心律失常作用與普萘洛爾相當。

3.4 肉豆蔻揮發油對大鼠離體心臟的影響:客觀評價肉豆蔻揮發油對心臟功能的影響，需排除很多干擾因素。有關文獻認為離體心臟灌流實驗可去除神經體液的影響［10］。本實驗在大鼠離體心臟上進行觀察，用恒壓逆向灌流法，靠外加液壓逆向灌流冠脈維持心肌功能，離體心臟做功維持循環［16］。所以，本實驗能夠在排除了前負荷和后負荷影響的條件下觀察離體心臟的功能變化，排除了神經內分泌的干擾。本實驗復制的心臟灌流模型符合相關文獻報道，大鼠心臟體外灌流過程舒縮功能、心率變化在20 min時穩定，持續2h左右。

綜上所述，肉豆蔻揮發油抗心律失常的作用可能是通過多方面的機制而產生的，如減慢心率、增加冠脈流量、對抗交感神經興奮，有關其抗心律失常的作用機制尚待進一步研究。

［1］李庚山，李莉，任自文，等.心臟猝死的防治建議［J］.中國心臟起搏與心電生理雜志，2002;16(6):401—406.

［2］Hondeghem LM，Katzung BG.Antiarrhythmic agents:the nodulated receptor mechanism of action of sodium and calcium channal blokingDrugs Ann Revphamacol［J］.Toxiool，1984;24(3):387—432.

［3］Tanabe T.Primary structure of the calcium channel blocker from skeletal muscle ［J］.Nature，1987;328(2):313—318.

［4］占卜拉道爾吉.蒙醫金匱［M］.呼和浩特:內蒙古人民出版社，1987

［5］民若樂·拉卻吉丹增璞仁.蒙醫金匱［M］.呼和浩特:內蒙古人民出版社，1978

［6］中華人民共和國衛生部藥典編委會.中華人民共和國藥典第一部［M］.北京:化學工業出版社，2005:附錄57－58

［7］徐持華，張善峰，馬二民.大鼠心肌缺血再灌注損傷與紅花黃素的保護作用［J］.中國臨床康復，2005;9(43):93－95

［8］方秋娟，王瑞幸，黃自強，等.大鼠體外灌流過程舒縮功能與流量變化［J］.福建大學學報，2003，37(4):368 －369

［9］胡燕月，阮琴，何新霞.川芎嗪和阿魏酸對大鼠離體心臟血流動力學的影響［J］.浙江大學學報，2004;27(4)382－385

［10］徐叔云.藥理學實驗方法第三版［M］.北京:人民出版社，1991

［11］Hill RJ.Class I antiarrhythmic drug receptor:biochemical evidence for state－dependent interaction with quinidine and lidocaine［J］.Mol Pharmacol，1989;36(2):150－155

［12］楊玉梅，覃建民，徐繼輝，等.廣棗黃酮對大鼠心室肌細胞的影響［J］.中國藥理學通報，2004;19(7):89－91

［13］孫冰.心肌縫隙連接和心律失常［J］.中國心臟起博和心電生理雜志，2004;18(1):63－67

［14］苗明三.實驗動物和動物實驗技術［M］.北京:中國中醫藥出版社:1997

［15］王勇，唐淑潔，王麗娟.燈盞花素抗腎上腺素實驗性心律失常的作用［J］.藥學研討，2001;10(1):30－31

［16］陳美娟，秦大蓮，李萬平，等.心安顆粒抗實驗性心律失常的觀察［J］，中國醫院藥學雜志，2004;24(11):664－665