間作套種對山銀花產量與品質的影響Δ

張建海，徐曉玉，馮彬彬，胡奎，謝世友，王海洋（1.重慶三峽醫藥高等?？茖W校，重慶40410；.西南大學，重慶 400716）

間作套種（以下簡稱“間種”）是指在一個生長季內，在同一塊田上分行或分帶相間種植2種或2種以上生育季節相近的植物的種植方式。目前，中藥材的間種主要集中在中藥材與糧食作物、果樹等之間，而中藥材之間的間種非常少，且間種對中藥材品質有無影響尚未見報道。山銀花藥源植物之一灰氈毛忍冬（Lonicera macranthoides Hand.-Mazz.）含有黃酮類、揮發油、有機酸、皂苷類等多種化學成分，具有抗病原微生物、解熱、保肝利膽等作用[1-5]。本課題組以重慶秀山隘口鎮為實驗基地，研究間種野菊花（Chrysanthemum indicum L.）對山銀花產量與品質的影響。

1 材料

1.1 儀器

LC-20 AB高效液相色譜（HPLC）儀，含SPD-20紫外檢測器、Shimpack VP-ODS（150 mm×4.6 mm，5 μm）色譜柱（日本島津公司）；KQ5200 E超聲波清洗器（昆山市超聲儀器有限公司）；U-3010紫外-可見分光光度計（日本日立公司）；JA2003 N電子天平（上海精密科學儀器有限公司）；HH.SYZ1-NI電熱恒溫水浴鍋（北京市長風儀器儀表公司）；SHB-ⅢS循環水式多用真空泵（鄭州長城科工貿有限公司）；摩爾超純水機（上海摩勒科學儀器有限公司）。

1.2 試劑

乙腈、甲醇為色譜純，其他試劑均為分析純，水為去離子水；綠原酸、木犀草苷對照品（中國食品藥品檢定研究院，批號分別為110753-200413、111720-200603）；灰氈毛忍冬皂苷乙、川續斷皂苷乙對照品（四川省維克奇生物科技有限公司，批號分別為wkq10397、wkq10398，純度均≥98%）。

1.3 實驗場所

重慶秀山隘口鎮壩芒村山銀花研究基地；西南大學藥學院中藥研究所。

2 方法

2.1 間種栽培方法

在山銀花行間種植野菊花，種植密度分別為一行、兩行、四行野菊，以單種山銀花作為對照組。野菊花種植采用正交試驗設計，以氮肥量（尿素，A）、磷肥量（磷酸二氫鈣，B）、鉀肥量（硫酸鉀，C）、種植密度（D）為考察因素。山銀花正常施肥。山銀花種植的行間距為200 cm×200 cm，野菊花種植的行間距為40 cm×40 cm，每個種植小區面積為12.5 m2，共10個種植小區（其中，1、2、3小區間種一行；4、5、6小區間種兩行；7、8、9小區間種四行；10小區作為對照）。間種模式見圖1。正交試驗因素與水平見表1。

圖1 間種模式圖Fig 1 Intercropping deograph

表1 正交試驗因素與水平Tab 1 Factors and levels of orthogonal experiment

2.2 山銀花各期千蕾質量測定

分別采收各樣地山銀花青條期（花蕾長0.5～3.5 cm，似米粒，綠色）、三青期（花蕾長3.0～4.5 cm，唇部已膨大，微向內彎曲，綠色）、二白期（花蕾長4.0～5.0 cm，唇部明顯膨大，向內彎曲，綠白色）、大白期（花蕾長5.0～6.0 cm，唇部綠白色，含苞待放）花蕾。各樣地隨機采收5株，每株采收100 g，采收后的樣品置于40℃烘箱烘至全干，分別測其千蕾質量，測量5次，取平均值。

2.3 山銀花中綠原酸的質量分數測定

綠原酸是山銀花花蕾中的主要有效成分，根據綠原酸的理化性質，采用筆者已研究確定的提取工藝條件和HPLC測定方法[6]，以綠原酸質量分數作為質控標準，對山銀花各期進行檢測。

2.4 山銀花中木犀草苷的質量分數測定

采用本課題組確定的方法[7]，以木犀草苷質量分數為質控標準，對山銀花各期進行檢測。

2.5 山銀花中灰氈毛忍冬皂苷乙和川續斷皂苷乙的質量分數測定

灰氈毛忍冬皂苷乙和川續斷皂苷乙的質量分數測定參照2010版《中國藥典》（一部）山銀花項下[8]方法進行。

3 結果與分析

3.1 山銀花各期千蕾質量

將各樣地山銀花各期花蕾稱其千蕾質量，并進行比較，結果見圖2。

圖2 各期山銀花千蕾質量Fig 2 Weight of alabastrum of Lonicerae Flos at different stages

山銀花的收獲期是大白期。從圖2中可以看出，間種兩行野菊花（4、5、6號地）時，4個時期花蕾的千蕾質量均顯著高于對照組（10號地），暗示干物質的積累從青條期到大白期逐漸增大。其中，三青期到二白期干物質積累最多，二白期到大白期干物質積累較少。因此，從三青期到二白期是山銀花生長最關鍵的時期，對山銀花品質有利。

3.2 山銀花各期綠原酸的質量分數

取各樣地山銀花烘干后的干燥花蕾，按“2.3”項下方法測定綠原酸的質量分數，并對各期數據進行比較，結果見圖3。

圖3 各期綠原酸質量分數Fig 3 Contents of chlorogenic acid at different stages

從圖3中可以看出，間種兩行野菊花（4、5、6號地）時，二白期花蕾中綠原酸的質量分數均顯著高于對照組（10號地）；青條期、三青期和大白期花蕾中綠原酸的質量分數均高于對照組，其中青條期4、6號地，三青期和大白期4、5號地與對照品比較差異有顯著性。

3.3 山銀花各期木犀草苷的質量分數

取各樣地山銀花烘干后的干燥花蕾，按“2.4”項下方法測定木犀草苷的質量分數，并對各期數據進行比較，結果見圖4。

從圖4中可以看出，間種兩行野菊花（4、5、6號地）時，4個時期花蕾中木犀草苷的質量分數均高于對照組（10號地），差異有顯著性。

圖4 各期木犀草苷質量分數Fig 4 Contents of galuteolin at different stages

3.4 山銀花各期灰氈毛忍冬皂苷乙和川續斷皂苷乙的質量分數

取各樣地山銀花烘干后的干燥花蕾，按“2.5”項下方法測定灰氈毛忍冬皂苷乙和川續斷皂苷乙的質量分數，并對各期數據進行比較，結果分別見圖5、圖6。

圖5 各期灰氈毛忍冬皂苷乙的質量分數Fig 5 Contents of macranthoidin B at different stages

圖6 各期川續斷皂苷乙的質量分數Fig 6 Contents of dipsacoside B at different stages

從圖5中可以看出，間種兩行野菊花（4、5、6號地）時，4個時期花蕾中灰氈毛忍冬皂苷乙的質量分數均顯著高于對照組（10號地）。從圖6中可以看出，間種兩行野菊花（4、5、6號地）時，二白期和大白期花蕾中川續斷皂苷乙的質量分數均顯著高于對照組（10號地）；青條期和三青期花蕾中川續斷皂苷乙的質量分數均高于對照組，其中4、6號地與對照品比較差異有顯著性。

4 討論

4.1 間種野菊花對山銀花產量的影響

本試驗結果顯示，間種野菊花對山銀花產量有一定影響。其中，間種兩行野菊花可以顯著增加山銀花千蕾質量；間種一行野菊花沒有顯著影響；間種四行野菊花使山銀花千蕾質量有下降趨勢。究其原因：第一，本試驗選擇的是三年生或四年生的山銀花，植株相對較小、行間距較大，間種一行野菊花對山銀花產量影響很??；第二，從栽培時間來看，野菊花一般是在三月底四月初移栽，這時植株長得也比較小，到五月底六月初才逐漸進入生長旺盛期，而這個時期山銀花的花蕾已經可以采摘，二者生長時期的差異導致間種野菊花對山銀花產量沒有太大的影響；第三，兩行種植的施肥可能影響到山銀花的生長，使山銀花產量增加，四行種植由于密度較大而影響到山銀花的產量。對于在山銀花生長旺盛期種植野菊花是否對其產量有影響是下一步要研究的主要內容。

4.2 間種野菊花對山銀花品質的影響

綠原酸、木犀草苷、灰氈毛忍冬皂苷乙和川續斷皂苷乙是山銀花中的主要藥效成分。本試驗結果顯示，間種野菊花對山銀花中4種主要成分的質量分數有不同程度的影響。間種兩行野菊花可顯著提高4種成分的質量分數；間種一行或四行野菊花與對照組比較差異不大，其中間種四行使4種成分的質量分數有下降趨勢。究其原因：間種兩行野菊花的行間距合適，2種藥材之間對水肥競爭較?。婚g種一行野菊花的行間距較大，與單種條件基本相似；而間種四行野菊花由于行間距較小，較高密度間種可能使2種藥材對肥料等資源有所競爭，具體影響因素有待進一步研究。上述結果表明，三年期或四年期山銀花與野菊花間種以二行野菊花為最佳。

另外，本試驗主要探討間種野菊花密度對山銀花產量與品質的影響，對于肥料等因素的影響將另行研究。

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