蘇木乙酸乙酯提取物對大鼠外周血細胞因子的影響

汪洋，周亞濱

(黑龍江中醫藥大學附屬第一醫院，黑龍江 哈爾濱 150040)

蘇木(Lignum Sappan)又名蘇方、蘇方木、紅柴、赤木、棕木，為豆科云實屬植物蘇木(Caesalpinia sappan L．)的干燥心材。主要產于緬甸、印度、馬來半島、越南及斯里蘭卡，我國主要分布于貴州、云南、四川、福建、兩廣及臺灣等地［1］。

大量研究已經證實，蘇木具有免疫抑制、抗氧化、抗炎及抗腫瘤作用。蘇木乙酸乙酯提取物可以抑制大鼠移植心臟心肌組織中穿孔素(PFP)、顆粒酶 B(GrB)、FasL的表達，調節CD4+/CD8+值，抑制心肌細胞的過度凋亡［2－5］。本實驗采用不同濃度蘇木乙酸乙酯提取物作用于健康Wistar大鼠，觀察其對健康大鼠外周血細胞因子的影響。

1 材料與方法

1．1 實驗材料

1．1．1 實驗動物

健康雄性Wistar大鼠，體質量150～200g，由黑龍江中醫藥大學動物實驗中心提供。

1．1．2 實驗藥品及試劑

蘇木購自黑龍江省藥材公司。將蘇木粗粉(40目)用75%乙醇浸泡，加熱至85℃，連續回流提取2h，過濾，反復2次，將濾液混合，經旋轉蒸發儀回收后，于真空干燥箱中烘干，制成乙醇提取干粉。將乙醇提取物加入雙蒸水混懸，再用乙酸乙酯萃取，回收得到乙酸乙酯提取物。大鼠 IL－1、IL－2、IL－12 及 IFN－γ ELISA檢測試劑盒購自晶美生物。

1．1．3 實驗儀器

TCS－500型電子秤(武漢電子稱重儀器公司);CR21型低溫高速離心機(日本日立公司);電熱恒溫水浴箱(上海醫療儀器廠);低溫冰箱MDF－U50V(日本三洋公司產品);電子分析天平［梅特勒－托利多儀器(上海)有限公司］。

1．2 實驗方法

1．2．1 動物分組

健康Wistar大鼠32只，隨機分為空白組、高劑量組、中劑量組、低劑量組，每組8只。

1．2．2 動物給藥

高、中、低劑量組分別按照 2．3g/kg/d、1．15g/kg/d、0．58g/kg/d給予蘇木乙酸乙酯提取物橄欖油溶液灌胃;空白組給予同體積橄欖油灌胃，各組連續灌胃7天。

1．2．3 取材

各組連續灌胃7天后，眼球取血1ml，以 5000r/min，4℃離心5min后留取血清備用。

1．2．4 檢測指標

采用ELISA法檢測大鼠血清IL－1、IL－2、IL－12及IFN－γ含量的變化，具體流程參照ELISA試劑說明書操作。

1．3 統計學處理

采用SPSS 16．0 統計分析軟件，所有數據以均數±標準差(±s)表示，多組間比較用F檢驗。

2 結果

蘇木高、中、低劑量組及空白組細胞因子的表達見表1。

表1 蘇木高、中、低劑量組及空白組細胞因子的表達(±s，n=8)

表1 蘇木高、中、低劑量組及空白組細胞因子的表達(±s，n=8)

注:與空白組比較，*P ＜0．05;與高劑量組比較，#P ＜0．05;與中劑量組比較，▲P ＜0．05;與低劑量組比較，●P ＜0．05。

空白組 69．300 ±25．916 169．913 ±17．012#▲ 64．838 ±8．085#▲● 136．400 ±29．822#▲高劑量組 66．075±20．699 79．350±15．994＊▲● 28．925±4．258＊▲● 76．588±8．605＊●中劑量組 66．131 ±20．108 118．913 ±18．093*# 40．438 ±8．287*# 86．738 ±10．493*低劑量組 71．488 ±28．125 153．425 ±36．435# 48．513 ±6．732*# 121．038 ±23．159#▲

由表1可知，蘇木乙酸乙酯提取物高、中、低劑量組與空白組IL－1的表達無明顯差異(P＞0．05)。蘇木乙酸乙酯提取物高、中劑量組IL－2的表達均降低，與空白組比較，差異具有統計學意義(P＜0.05)，且高劑量組IL－2的表達明顯低于中劑量組，差異具有統計學意義(P＜0．05)，蘇木乙酸乙酯提取物低劑量組IL－2的表達與空白組比較，差異無統計學意義(P＞0.05)。

蘇木乙酸乙酯提取物高、中、低劑量組IL－12的表達均降低，與空白組比較，差異具有統計學意義(P＜0.05)，且高劑量組表達明顯低于中、低劑量組，差異具有統計學意義(P＜0．05)，中、低劑量組間沒有明顯差異(P ＞0．05)。

蘇木乙酸乙酯提取物高、中劑量組IFN－γ的表達均降低，且與空白組比較，差異具有統計學意義(P＜0.05)，但高、中劑量組之間沒有明顯差異(P＞0.05)，蘇木乙酸乙酯提取物低劑量組IFN－γ的表達與空白組比較，差異無統計學意義(P＞0．05)。

3 討論

白細胞介素，簡稱白介素，指在白細胞或免疫細胞間相互作用的淋巴因子，它與血細胞生長因子同屬細胞因子。兩者相互協調，作用共同完成造血和免疫調節功能。白介素在激活、調節免疫細胞，介導T、B細胞活化、增殖與分化及在炎癥反應中起重要作用。

IL－1 是多種類型細胞如單核細胞等在免疫應答時產生的細胞因子，血小板生長因子能刺激集落刺激因子等細胞因子的產生并且能夠促進T細胞產生IL－2，在免疫應答和組織修復中起作用。IL－2主要由活化的CD4+T細胞和CD8+T細胞產生，是所有T細胞亞群的生長因子，并能夠促進B細胞增殖，是調控免疫應答的重要因子［6］。IL－12是一種異源二聚體分子，主要由單核/巨噬細胞及B淋巴細胞產生，在腫瘤、感染以及自體免疫性疾病中起重要作用。IFN是具有廣泛生物活性的一種蛋白質，具有抗腫瘤、調節免疫功能、抗病毒等多種作用。IFN可調動機體免疫系統，增強機體的細胞免疫功能，是機體防御系統的重要組成部分。

本研究結果顯示，蘇木乙酸乙酯提取物可以抑制大鼠外周血IL－2、IL－12、TNF－γ的表達，且與藥物濃度有關，高、中、低劑量組均可以抑制IL－12、TNF－γ的表達，且高劑量組作用明顯強于中、低劑量組。高、中劑量組均可以抑制IL－2的表達，且高劑量組作用強于中劑量組，低劑量組對IL－2的表達沒有明顯的抑制作用。由此提示，蘇木乙酸乙酯提取物具有一定的免疫抑制作用，且作用強度與藥物劑量有關，其作用機理可能為:1)通過抑制IL－2、TNF－γ的表達，抑制單核巨噬細胞的活化，使單核巨噬細胞MHCⅠ類分子、Ⅱ類分子和共刺激分子的表達水平顯著降低，從而抑制單核巨噬細胞的抗原提升作用。2)通過抑制IL－12的表達，使NK細胞分泌IFN－γ水平降低，從而抑制Th0 向Th1 細胞方向分化，抑制T細胞的增殖和巨噬細胞的活化，從而抑制T細胞和巨噬細胞介導的免疫應答。3)通過降低IL－2、IL－12的表達，抑制NK細胞的活化，從而減弱其細胞毒作用。

［1］ 中國科學院中國植物志編寫委員會．中國植物志［M］．北京:科學出版社，1986:105．

［2］ 周亞濱．蘇木對大鼠同種異位心臟移植心肌顆粒酶B mRNA表達的影響［J］．上海免疫學雜志，2002，22(2):110－112．

［3］ 周亞濱．蘇木對同種異位心臟移植大鼠心肌穿孔素mRNA表達的影響［J］．中國中西醫結合雜志，2003，23(5):370－372．

［4］ 于波．蘇木提取物對心臟移植大鼠T淋巴細胞亞群的免疫抑制和對心肌的保護作用［J］．中國地方病學雜志，2004，23(6):539－542．

［5］ 姜斌，周亞濱．蘇木乙酸乙酯提取物對大鼠心臟移植慢性排斥模型血清IL－10 水平的影響［J］．中醫藥學報，2012，40(5):30－31．

［6］ 覃仕化，汪悅．痹痛靈顆粒對膠原誘導關節炎大鼠血清及滑膜組織勻漿中 IL－2的影響［J］．西部中醫藥，2011，24(11):26－27．