微波輔助提取黑龍江產蒼耳莖中總黃酮

摘要：利用微波輔助技術提取黑龍江產蒼耳（Xanthium sibiricum）莖中的總黃酮。結果表明，以乙酸乙酯提取，在微波功率為800 W條件下處理2 min，料液比為1∶15（g/mL），與傳統提取方法相比，該法提取時間短、提取效率高。黑龍江產的蒼耳莖中總黃酮含量較高。

關鍵詞：蒼耳（Xanthium sibiricum）莖；微波輔助提取；總黃酮

中圖分類號：R284.2 文獻標識碼：A 文章編號：0439-8114（2013）24-6126-03

蒼耳（Xanthium sibiricum）為菊科（Compositae） 蒼耳屬（Xanthium L.）植物，俗稱羊帶歸、狗耳朵草、疔瘡草、野茄子、粘粘葵、蒼子棵、卷耳、爵耳等[1]。廣泛分布于我國各地，目前均為野生狀態，適應性強，可生長于各種環境下，尤其是荒野、路邊、田間地頭廣布，全國資源豐富[2-3]。蒼耳是傳統的藥用植物，其成熟的果實入藥，被稱為蒼耳子，可應用于治療多種疾病[4-8]，已被中國藥典收錄。蒼耳子中富含油脂，蒼耳子油目前已被確認為有一定的營養價值，還具有抗菌、 抗病毒、 消炎等作用，是潛在的食用油和保健食品開發資源[9]。蒼耳莖葉也具有較高的營養價值，可被開發為牲畜飼料，有報道蒼耳莖葉作為添加劑飼喂生豬可提高豬肉品質[10]。蒼耳全草也可入藥，治療痢疾、 中耳炎、 鼻炎、 功能性子宮出血、濕疹、皮膚癌、瘙癢等[11-13]，蒼耳中目前已確認含有多種化學成分，包括水溶性苷類、倍半萜內酯類、揮發油類等[14，15]。黃酮類物質廣泛存在于多種植物體內，其分子結構中存在兩個具有酚羥基的苯環通過中央三碳原子連結的基本結構。黃酮類物質具有抗氧化、抗炎、降血糖、降膽固醇、調節免疫力、抗腫瘤等多方面藥理作用[16-18]。蒼耳在黑龍江分布普遍、適應性強、資源儲量大，目前尚未被充分利用。本研究根據相關研究成果[19，20]探討了微波輔助提取蒼耳莖中總黃酮方法。微波提取的基本原理是基于微波的穿透性，透入基質內部形成內熱源，其加熱具有選擇性，可使細胞內各細胞器升壓，從而使細胞壁破裂，使目標成分從細胞中釋放出來并溶解于溶劑中[21]，以微波輔助提取蒼耳莖中總黃酮，提取效率高，操作簡便，能更準確測定黑龍江蒼耳莖中總黃酮含量，對于黑龍江產蒼耳植株的綜合開發和利用具有重要的參考和借鑒意義。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 蒼耳 9月15日采摘于黑龍江省綏化市北林區郊區公路旁。

1.1.2 儀器與試劑 752型紫外-可見光分光光度計（北京普析儀器設備有限公司），HH4型數顯恒溫水浴鍋（國華電器有限公司），101AS2型不銹鋼數顯電熱鼓風干燥箱（上海浦東躍欣科學儀器廠），SY-2000型旋轉蒸發儀（上海亞榮生化儀器廠），美的EG823MF4-NR1型微波爐（美的微波電器制造有限公司）；蘆丁對照品（Rutin，Merck，中國藥品生物制品檢定所），其余試劑均為國產分析純。

1.2 方法

1.2.1 蒼耳莖黃酮類化合物的提取 ①蒼耳莖的處理：采集來的蒼耳植株經自然干燥后，去除果實、葉片、根部等，用剪刀將莖剪碎，組織搗碎機粉碎成粗粉；②蒼耳莖總黃酮的粗提取：將粉碎好的蒼耳莖粉末1 g置于100 mL錐形瓶中，加入15 mL乙酸乙酯，首先微波爐800 W加熱2 min，水浴蒸干乙酸乙酯，取出后加入相當于15倍粉末質量的60%乙醇，在85 ℃水浴的條件下進行回流，再浸提25 min。浸提完成之后過濾，收集浸提液，得到的就是蒼耳莖樣品總黃酮粗提取液，把每個樣品的粗黃酮液定容至50 mL。取一定體積的粗黃酮液，經水浴加熱濃縮后，于103 ℃下烘干至恒重，從而得到粗黃酮粉，計算粗黃酮粉的得率。作為對比，取蒼耳莖粗粉10 g，以紗布包成小包，置于索氏提取器中，加入300 mL 60%乙醇， 90 ℃水浴回流提取3 h，過濾，收集濾液，定容至500 mL，得粗黃酮提取液，取一定體積的粗黃酮提取液，進行測定。

1.2.2 蒼耳莖黃酮提取物的顏色反應 取0.010 g 蘆丁用60%的乙醇定容至100 mL，連同粗黃酮液、粗黃酮粉進行鹽酸鎂粉反應的定性顏色反應。分別取總黃酮粗提取液、總黃酮粗粉適量以乙醇配制的溶液和蘆丁液約1 mL于試管中，加入少量鎂粉，再加3滴濃鹽酸，至沸水浴上加熱，觀察記錄現象。

1.2.3 蒼耳莖總黃酮含量的測定 根據黃酮類化合物與鋁鹽可以生成具有特征紅色的絡合物的性質，首先以蘆丁為對照品，將待測樣品以蘆丁為標準樣品，在500 nm處比色，測定樣品中總黃酮含量。精密稱取0.014 0 g的干燥至恒重的蘆丁對照品，然后在25 mL容量瓶中加入適量去離子水，放置于超聲清洗儀超聲10 min溶解，以去離子水定容。移取10 mL至100 mL容量瓶中，加水至刻度定容，即得0.056 mg/mL蘆丁對照品溶液。精密量取蘆丁對照品溶液0、1.0、2.0、3.0、4.0、5.0、6.0 mL，分別置于25 mL容量瓶中，加水至6.0 mL，加5%亞硝酸鈉溶液1 mL，混勻，靜置6 min，加5%硝酸鋁溶液1 mL，混勻，靜置6 min，加4%氫氧化鈉溶液10 mL，加水定容至刻度，搖勻，放置15 min，以相應的試劑為參比，在500 nm處測其吸光度，得吸光度與蘆丁濃度線性方程。

取1.2.1項中粗黃酮提取液25 mL，精密量取10 mL至100 mL容量瓶中，用水定容至刻度，作為待測液。精密量取6 mL待測液置于25 mL容量瓶中，加5%亞硝酸鈉溶液1 mL，混勻，靜置6 min，加5%硝酸鋁溶液1 mL，混勻，靜置6 min，加4%氫氧化鈉溶液10 mL，加水定容至刻度，搖勻，放置15 min，以相應的試劑為參比，在500 nm處測其吸光度，并依據標準曲線，計算總黃酮得率。

2 結果與分析

2.1 蒼耳莖總黃酮含量

2.1.1 蘆丁標準曲線制作 由圖1可以看出，在濃度為0.011 2～0.134 4 mg/mL，蘆丁濃度與吸光度有較好的線性關系，吸光度（A）與蘆丁標準品濃度（C，mg/mL）的回歸方程為：A=8.298 8C+0.001 5，r=0.998 5。

2.1.2 蒼耳莖總黃酮含量 4個不同的蒼耳莖樣本，分別采用微波輔助萃取和溶劑回流提取蒼耳莖總黃酮，測定蒼耳莖中總黃酮含量，結果見表1。從表1可以看出，采用傳統熱溶劑回流提取，總黃酮得率較低，浪費溶劑，耗時也較長。

2.2 黃酮提取物的顏色反應

蒼耳莖粗黃酮提取液和粗黃酮粉的乙醇配制溶液的鹽酸-鎂粉反應均呈現紅色，與蘆丁顏色反應相同，說明在該提取條件下黃酮類物質較為穩定。

2.3 蒼耳莖粗黃酮粉的得率

由微波輔助萃取所得蒼耳莖干粉的粗黃酮粉的平均得率為 11.08%，經測定粗黃酮粉中總黃酮含量為12.01%，說明在蒼耳莖中黃酮類物質含量較高。

3 討論

蒼耳作為黑龍江省廣泛分布的野生植物資源，雖然其果實部分作為中藥目前得到重視，但儲量更大的莖葉資源還未受到重視，本研究通過微波輔助提取蒼耳莖中的具有生理活性的黃酮類物質并測定了其含量，通過研究確定在蒼耳莖中含有較為豐富的黃酮類物質。蒼耳這種野生植物的全株具備全面開發的潛力，對于將野生資源儲量豐富的蒼耳開發為有潛力的新型生物資源提供了參考。蒼耳莖這一潛在資源在藥品、保健品和動物飼料等領域將有廣闊的開發前景。

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