熊果酸葡萄糖酯的制備及降血脂作用研究

摘 要：制備熊果酸葡萄糖酯，對其降血脂作用進行研究。采用ICR小鼠作為實驗動物，建立高血脂動物模型，然后飼喂熊果酸葡萄糖酯，探討熊果酸葡萄糖酯的降血脂作用。結果表明：熊果酸葡萄糖酯組小鼠的血清甘油三酯（TG）、總膽固醇（TC）和動脈硬化指數（AI）均不同程度低于高脂模型組，而高密度脂蛋白（HDLC）卻非常顯著高于高脂模型組。熊果酸葡萄糖酯具有顯著的降血脂保健作用。

關鍵詞：熊果酸葡萄糖酯；高脂血癥；降血脂

中圖分類號 R151.41 文獻標識碼 A 文章編號 1007-7731（2013）10-22-02

熊果酸（Ursolic acid）為五環三萜類化合物，又名烏索酸、烏蘇酸，在自然界分布廣泛，如山楂、熊果、烏梅、陸英、蘆筍、野薔薇果、車前草、女貞子等植物中均含有[1]。研究發現，熊果酸具有降血脂、降血壓、降血糖等多種功能作用[2-6]。但熊果酸不溶于水，限制了其使用，將熊果酸采用糖分子進行修飾，可提高其溶解性。熊果酸葡萄糖酯是熊果酸采用葡萄糖分子進行修飾所得到的一種修飾產物，為驗證其降血脂作用，筆者采用脂肪酶催化合成了熊果酸葡萄糖酯，通過建立高血脂動物模型，對其降血脂作用進行了探討。

1 材料與方法

1.1 試劑及儀器 試劑：乙酸葡萄糖酯，熊果酸，購于sigma公司；脂酶，來源于Candlda sp.，由華東理工大學生物反應器國家重點實驗室提供（酶活2 586.3U/g）；血清甘油三酯（TG）測定試劑盒、血清總膽固醇（TC）測定試劑盒、血清高密度脂蛋白（HDLC）測定試劑盒，由上海榮盛生物技術有限公司生生產。儀器：7200全自動生化分析儀，日本島津；721分光光度計，上海第三分析儀器廠。

1.2 熊果酸葡萄糖酯的制備 取熊果酸0.020 28g加入在100mL的燒瓶中，加入丙酮，充分攪拌至溶解，加入0.552 9g K2CO3，室溫攪拌溶液成乳白色，加入0.16mLCH3CH2I，繼續攪拌，以TLC檢測反應進程，減壓去丙酮，加水稀釋后，用乙酸乙酯萃取，萃取液濃縮后經制備TLC分離得到熊果酸乙酯。將熊果酸乙酯、乙酸葡萄糖酯、環己烷和脂酶在反應器內混合均勻，在50℃條件下保溫24h，同時，不斷以150r/min的速度進行攪拌，反應結束后，在反應器中加入乙醇/丙酮（1∶1，V/V）終止反應，將反應物經制備TLC分離得熊果酸葡萄糖酯。

1.3 降血脂實驗

1.3.1 動物和飼料 ICR雄性小鼠（體重23±3g）；高脂飼料的制備：將95%基礎飼料粉、4%膽固醇、1%2號膽鹽加水攪勻，加工成條形，曬干。

1.3.2 實驗設計 選取50只ICR雄性6周齡小鼠，按體重均衡隨機平均分為5組：空白對照組（飼以基礎飼料）與高脂模型對照組（飼以高脂飼料）均供給蒸餾水，低、中、高3個熊果酸葡萄糖酯劑量實驗組，均飼以高脂飼料，同時分別供給熊果酸葡萄糖酯10、20、40mg/kg.d。定期稱重，8周末眼球取血，按試劑盒說明書步驟測定血脂各項指標，其中動脈硬化指數：AI=（TC-HDLC）/HDLC。

1.4 數據處理 所有數據經統計學處理后用[x±s]表示，組間差異經t檢驗。

2 結果與分析

2.1 對小鼠血清甘油三酯（TG）和總膽固醇（TC）含量的影響 熊果酸葡萄糖酯對小鼠血清甘油三酯（TG）和總膽固醇（TC）含量的影響見表1。由表1可知，高脂模型組與空白對照組小鼠血清TG和TC含量有非常顯著差異（P<0.01），表明高脂血癥模型建立。3個熊果酸葡萄糖酯劑量組的TG均與高脂模型組有非常顯著的差異（P<0.01）；熊果酸葡萄糖酯低劑量組的TC與高脂模型組含量有顯著差異（P<0.05），而熊果酸葡萄糖酯中、高劑量組的TC與高脂模型組含量有非常顯著差異（P<0.01）。

2.2 對小鼠血清高密度脂蛋白（HDL-C）含量的影響 熊果酸葡萄糖酯對小鼠血清高密度脂蛋白（HDL-C）含量的影響見表2。從表2可以看出，3個熊果酸葡萄糖酯的HDLC均與高脂模型組有極其顯著的差異（P<0.01），表明熊果酸葡萄糖酯有極其顯著抑制高脂飼喂小鼠HDL-C降低的作用。

2.3 對小鼠動脈硬化指數（AI）的影響 熊果酸葡萄糖酯對小鼠動脈硬化指數（AI）的影響見表3。表3結果表明，高脂模型組與空白對照組之間動脈硬化指數存在極其顯著差異（P<0.01），表明高脂血癥模型建立；3個熊果酸葡萄糖酯劑量組的小鼠動脈硬化指數均與高脂模型組存在非常顯著差異（P<0.01），表明它們具有抑制高脂飼喂小鼠動脈硬化指數升高的作用。

3 結論

血漿膽固醇升高是誘發動脈粥樣硬化（AS）及冠心病（CHD）的重要因素[7]。我國35歲以上人群的CHD發病率為3%～5%[8]。熊果酸葡萄糖酯組小鼠的血清甘油三酯（TG）、總膽固醇（TC）和動脈硬化指數（AI）均不同程度低于高脂模型組，而高密度脂蛋白（HDLC）卻非常顯著高于高脂模型組，由此可見，熊果酸葡萄糖酯能有效地預防和治療高脂血癥，對AS的防治也具有重要意義。

參考文獻

[1]熊筱娟，陳武，鄭國安.烏索酸的一般藥理學實驗研究[J].江西師范大學學報：自然科學版，2005，29（1）：81-84.

[2]Gao J，Tang X，Dou H，et al. Hepatoprotective activity of Terminalia catappa L.eaves and its two triterpenoids[J].J. Pharm Pharmacol，2004，56（11）：1 449-1 455.

[3]王秀英 ，李淑華，胡東芳， 等.烏梅對照品—熊果酸降脂作用試驗研究[J]. 遼寧中醫藥大學學報， 2011，2：12-13.

[4]楊秀偉，趙靜，馬超美， 等.七葉樹皂苷和熊果酸類化合物對HIV-1蛋白酶活性抑制作用的初步研究[J]. 中國新藥雜志，2007，5： 366-369.

[5]郭萬松，曹穎慧，王振中，等.熊果酸抗腫瘤機制研究進展[J]. 中華臨床醫師雜志（電子版），2012，12： 130-133.

[6]馮英杰，任會勛，袁育康，等.熊果酸免疫調節作用的初步研究[J]. 西安交通大學學報：醫學版，2006，6： 541-543.

[7] Matvienko OA，Lewis DS，Swanson M ，et a1.A single daily dose of soybean phytosterols in ground beef decreases serum total cholesterol and LDL cholesterol in young，mildly hypercholestemolemic men[J].Am. J .Clin.Nutr.，2002，76（1）：57-64.

[8]孔秀芹，戴偉民，葛海濤，等.螺旋藻來源的γ-亞麻酸甲酯調血脂作用研究[J].中國海洋藥物雜志，2003，6：30-34. （責編：徐世紅）