子宮內(nèi)膜、正常早孕及原因不明復發(fā)性流產(chǎn)患者蛻膜上Foxp3表達的意義

[摘要] 目的 探討子宮內(nèi)膜、正常早孕和原因不明復發(fā)性流產(chǎn)患者蛻膜上Foxp3的表達情況。 方法 收集來我院進行治療的自然流產(chǎn)次數(shù)不低于3次的患者37例作為流產(chǎn)組；選取正常妊娠婦女40例作為正常妊娠組；孕齡期婦女的增生期內(nèi)膜及分泌期內(nèi)膜分別為25例、20例，對各組中的Foxp3的表達及分布情況采用統(tǒng)計學方法進行分析。 結(jié)果 （1）Foxp3在分泌期內(nèi)膜的表達與正常妊娠組及URSA組比較明顯較低，在URSA患者蛻膜中的表達與正常妊娠組比較明顯較低（P < 0.05）。（2）蛻膜間質(zhì)為URSA組Foxp3的主要表達部位，蛻膜腺上皮細胞為正常妊娠組患者Foxp3表達的主要位置，蛻膜腺上皮細胞為增生期內(nèi)膜陰性表達及分泌期子宮內(nèi)膜Foxp3的主要分布位置。 結(jié)論 在胚泡植入及早期妊娠的維持中分泌期子宮內(nèi)膜和蛻膜組織中Foxp3的表達具有非常重要的意義，在URSA的發(fā)生發(fā)展過程中Foxp3的表達水平的降低可能具有重要的作用。

[關(guān)鍵詞] 子宮內(nèi)膜；正常早孕；原因不明復發(fā)性流產(chǎn)；Foxp3

[中圖分類號] R714.21 [文獻標識碼] B [文章編號] 1673-9701（2013）21-0036-02

在育齡夫妻中復發(fā)性流產(chǎn)的發(fā)病率約為1%～2%，其中有超過一半的患者沒有明確的發(fā)病原因，即原因不明性復發(fā)性流產(chǎn)，該種疾病在臨床上較難治愈，給患者的心理及生理均造成嚴重的影響[1]。有報道表明，在胎兒免遭母胎界面同種異體免疫損害保護作用中CD4+CD25+調(diào)節(jié)性T細胞（T regulatory cell，Tr）發(fā)揮著重要的作用，在CD4+CD25+Tr發(fā)育和功能的維持中轉(zhuǎn)錄因子Foxp3是一個重要調(diào)節(jié)基因，其基因功能多態(tài)性對URSA疾病的發(fā)生及發(fā)展均具有重要的意義[2]。我們對正常妊娠婦女、URSA患者及增生期內(nèi)膜、分泌期內(nèi)膜中轉(zhuǎn)錄因子Foxp3的表達情況采用免疫組化法進行觀察，現(xiàn)報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

本研究中收集2011年5月～2012年8月來我院進行治療的自然流產(chǎn)次數(shù)不低于3次的患者37例作為流產(chǎn)組，其中年齡最小為24歲，最大為39歲，平均（31.2±6.5）歲。研究對象均按照我院常規(guī)進行病因的篩查，微量淋巴細胞毒試驗結(jié)果表現(xiàn)為陰性，研究對象共檢測抗磷脂抗體3次，每間隔3周進行一次，均得到陰性的結(jié)果。選取同期來我院就診的正常妊娠婦女40例作為正常妊娠組，該組研究對象的妊娠時間均不超過12周并均有人工流產(chǎn)的意愿，其中年齡最小為21歲，最大為36歲，平均（28.1±6.8）歲，患者均不存在自然流產(chǎn)史、死胎及死產(chǎn)史等。將存在先兆流產(chǎn)癥狀和體征的研究對象排除出研究范圍；對其進行B超檢查，結(jié)果表明該組研究對象的胚胎發(fā)育正常。流產(chǎn)組及正常妊娠組均將染色體、內(nèi)分泌等方面存在異常的研究對象排除出本次研究范圍，患者均不存在自身免疫性疾病及合并感染等。共收集來我院進行治療的孕齡期婦女的增生期內(nèi)膜及分泌期內(nèi)膜分別為25例、20例，患者年齡最小為25歲，最大為39歲，平均（32.7±7.6）歲，無自然流產(chǎn)、死胎、死產(chǎn)史。

1.2 研究方法

蛻膜組織均在手術(shù)后進行采集，使用4%多聚甲醛液進行固定，固定時間為24～48 h，常規(guī)脫水、石蠟包埋，每個標本均做3 μm片厚的連續(xù)切片，常規(guī)HE染色，對蛻膜形態(tài)進行觀察。對蛻膜Foxp3表達進行觀察的方法為S-P免疫組化染色法。其中以具有Foxp3表達的胸腺組織為陽性對照，陰性對照使用TBS代替一抗，為了達到將批內(nèi)及批間存在的誤差降低到最低限度的目的集中切片進行染色。

1.3 結(jié)果的判斷依據(jù)[3]

結(jié)果判斷中對陽性反應(yīng)的觀察采用雙盲法。Foxp3表達免疫組化陽性信號為棕黃色，位于胞漿，隨機抽取每張切片中的10個視野進行觀察，以在總細胞中陽性細胞所占的比例為依據(jù)將結(jié)果分為陰性、可疑陽性、輕度陽性、中度陽性及強陽性5級，具體標準如下：無陽性細胞存在為陰性（-）；陽性細胞數(shù)低于25%為可疑陽性（±）；陽性細胞數(shù)介于25%～50%之間為輕度陽性（+）；陽性細胞數(shù)介于50%～75%之間為中度陽性（++）；陽性細胞數(shù)高于75%為強陽性（+++）。

1.4 統(tǒng)計學分析

采用SPSS 13.0統(tǒng)計分析軟件包進行分析，各個組間數(shù)據(jù)的分析處理采用χ2檢驗，P < 0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結(jié)果

2.1 Foxp3的分布與不同組間表達水平的比較

Foxp3在妊娠后的蛻膜組織及分泌期子宮內(nèi)膜中均有表達。Foxp3在URSA組的表達與正常妊娠組比較明顯較低（P < 0.05），F(xiàn)oxp3在分泌期內(nèi)膜的表達與正常妊娠組及URSA組比較明顯較低（P < 0.05）。見表1。

2.2 Foxp3在各組中不同分布部位表達水平的比較

蛻膜間質(zhì)為URSA組Foxp3的主要表達位置，與同組的蛻膜腺上皮細胞中的Foxp3表達水平比較明顯較高（P < 0.05）；蛻膜腺上皮細胞為正常妊娠組患者Foxp3表達的主要位置，與同組中的蛻膜間質(zhì)中Foxp3表達水平比較明顯較高（P < 0.05）。Foxp3在增生期內(nèi)膜陰性表達主要分布于蛻膜腺上皮細胞，與同組中蛻膜間質(zhì)中的陰性表達比較差異具有顯著性（P < 0.05）；蛻膜腺上皮細胞為分泌期子宮內(nèi)膜Foxp3的主要分布位置，與蛻膜間質(zhì)細胞的分布比較明顯較高（P < 0.05）。見表1。

3 討論

不明原因復發(fā)性流產(chǎn)具有復雜的病因，其中主要為同種免疫型RSA，再次發(fā)生流產(chǎn)的風險隨著臨床妊娠丟失次數(shù)的增多而加大。正常的妊娠與同種異體移植具有相似性，母體對胚胎的免疫排斥在妊娠失敗的原因中占有較重要的位置[4]。有學者研究證明，CD4+CD25+Tr在人胸腺及外周血中天然存在，在人外周血CD4+T細胞中所占的比例約為5%～10%。CD4+CD25+高表達亞群中有人類調(diào)節(jié)性T細胞存在，而正常活化的T細胞在CD4+CD25+低表達T細胞亞群中占有較高的比例。在人類正常妊娠的孕早期中CD4+CD25+Tr出現(xiàn)明顯升高，其達到高峰的時間為孕中期，在產(chǎn)后CD4+CD25+Tr則慢慢地出現(xiàn)降低的趨勢[5]。本次結(jié)果表明，URSA與正常妊娠組比較具有明顯較低的外周血CD4+CD25+Tr細胞數(shù)量，結(jié)果提示在正常妊娠的維持過程中及病理妊娠的發(fā)生過程中CD4+CD25+Tr均具有重要的意義。

在CD4+CD25+Tr發(fā)育和功能維持中Foxp3是一個重要的調(diào)控基因，T2型細胞由初始型T細胞分化而來，CD4+CD25+Tr在該過程中具有非常重要的作用。BALB/c×BALB/c和BALB/c×C57BL/6孕鼠與同齡未孕鼠比較其子宮組織Foxp3 mRNA的表達明顯較高，前者約為后者的1 000倍，而Foxp3 mRNA表達在同種異體和同基因型的孕鼠間進行比較則差異無統(tǒng)計學意義，結(jié)果表明妊娠可能會導致Tr表達出現(xiàn)變化，同種抗原的刺激則不會導致Tr的表達出現(xiàn)變化。本次研究發(fā)現(xiàn)，F(xiàn)oxp3在分泌期子宮內(nèi)膜、妊娠的蛻膜組織均出現(xiàn)表達，正常妊娠組和URSA組的蛻膜組織與分泌期內(nèi)膜比較具有明顯較高的Foxp3表達水平，URSA組和分泌期內(nèi)膜與正常妊娠組比較具有明顯較低的Foxp3表達水平，結(jié)果提示在正常妊娠的維持中Foxp3具有非常重要的意義，母胎界面局部免疫耐受形成的調(diào)控中Foxp3有可能是一項重要的因素，URSA的發(fā)生發(fā)展中Foxp3的表達異常發(fā)揮著重要的作用[6]。

子宮內(nèi)膜具有兩個方面的免疫潛能，即免疫殺傷功能和免疫耐受或者免疫保護功能。在妊娠成功中子宮內(nèi)膜兩個方面的作用平衡非常重要，在子宮局部免疫調(diào)節(jié)過程中均有參與，子宮內(nèi)膜的形態(tài)和功能在分泌期和早孕期發(fā)生變化為其突出的變化。我們研究發(fā)現(xiàn)，F(xiàn)oxp3在分泌期內(nèi)膜存在表達，妊娠蛻膜組織中Foxp3的表達水平明顯增加；Foxp3在正常妊娠組及URSA組的主要分布部位分別為腺上皮細胞及蛻膜間質(zhì)，提示母體在胎兒免疫耐受的形成過程中子宮內(nèi)膜、蛻膜組織在胎母界面均進行了參與，該參與方式可能是以自分泌或者旁分泌的方式進行的。

[參考文獻]

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[2] 梅珊珊，譚劍平，陳慧，等. CD4+CD25highT細胞和Foxp3在不明原因復發(fā)性自然流產(chǎn)中的作用[J]. 中山大學學報（醫(yī)學科學版），2010，31（4）：461-466.

[3] 楊卉，林其德，肖云山，等. Foxp3在子宮內(nèi)膜、正常早孕和原因不明復發(fā)性流產(chǎn)患者蛻膜上的表達[J]. 現(xiàn)代婦產(chǎn)科進展，2005，14（2）：129-131.

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[5] 蔣國靜，邱麗華，林其德. 原因不明復發(fā)性流產(chǎn)與蛻膜CD4+CD25+T調(diào)節(jié)細胞和CD8+CD28-T細胞的關(guān)系[J]. 現(xiàn)代婦產(chǎn)科進展，2008，17（12）：894-896.

[6] 劉愛珍，古亞麗，李靜. Foxp3和TGF-β1在復發(fā)性流產(chǎn)患者絨毛組織中的表達[J]. 中國誤診學雜志，2008，8（35）：8572-8574.

（收稿日期：2013-04-26）