不同海產品中副溶性弧菌的監測

顧冬花 李國平

不同海產品中副溶性弧菌的監測

顧冬花 李國平

（青海省大通縣樺林畜牧獸醫站 810100） （青海省大通縣斜溝畜牧獸醫站）

對大通縣幾個農貿市場采集的32份海產品樣品，應用常規細菌分離法進行副溶血性弧菌的檢測，經細菌分離、增菌培養、形態觀察、染色鏡檢、三塘鐵、生化特性和嗜鹽性試驗測定，檢出的4份陽性菌是副溶血性弧菌，陽性率為12.5%，同時通過小白鼠致病性試驗證明4份陽性菌都有致死效應。

不同海產品 副溶血性弧菌 檢測

副溶血性性弧菌(Vibrio Parahaemolyticus, VP)是一種革蘭氏陰性嗜鹽菌(Halophilic bacteria)，最早1950年日本從一次爆發性食物中毒中分離發現。主要分布于魚類、海帶、蝦等海洋生物、海水、海底沉積物及其他產品中，人們食用被副溶血性弧菌污染的食品后，引起主要以腹痛、腹瀉、惡心、嘔吐、發熱為癥狀的食源性疾病。特別是在一些沿海城市由該菌引起的食物中毒占細菌性食物總數的比例高達60%以上[1]。由VP引起的食物中毒占日本食物中毒病例數的20%~30%[1]。在歐洲和北美地區也曾多次爆發過VP食物中毒事件[2]。VP已成為引起細菌性食物中毒的主要致病菌。為了初步掌握我縣不同種類海產品中VP的帶菌率及污染狀況，降低食源性疾病的發病率并引起相關部門的重視，2013年對本縣幾個農貿市場采集的32份不同樣品進行VP病原分離，現將結果報告如下：

1 材料與方法

1.1 樣品來源 隨機抽檢幾個農貿市場樣品32份，包括魚類、貝類、甲殼類。置4℃冰箱備用。

1.2 材料 （1）培養基：3%氯化鈉堿性蛋白胨水((APW)、硫代硫酸鈉-檸檬酸鈉-膽鹽-蔗糖瓊脂(TCBS)平板，3%氯化鈉三糖鐵(TSI)、嗜鹽性胰酪胨肉湯(STB)，氯化鈉蔗糖瓊脂平板，SS平板，3%氯化鈉胰蛋白胨大豆瓊脂平板TSA，瓊脂斜面，0.3%、6%、8%、10%氯化鈉胰蛋白胨肉湯水及各種生化培養基均由青海大學農牧學院動物醫學系傳染病實驗室自制。（2）試驗動物：健康昆明系小白鼠5只(14~16g)均購于青海地方病研究所

1.3 方法 按國標(GB/T4789.7-2003)中描述對食品中副溶血性弧菌做定性檢測的方法。該方法采用氯化鈉增菌液增菌后，接種于氯化鈉蔗糖瓊脂和選擇性瓊脂平板，可疑菌落經氯化鈉三塘鐵斜面、革蘭氏染色和嗜鹽性試驗進行初步判斷，最后進生化試驗及動物實驗進行確定其是否為副溶血性弧菌。

2 結果

2.1 菌落形態及培養特性觀察 在嗜鹽性平板上為圓形、邊緣整齊的淺黃色菌落，經過2~3次傳代純培養后，呈黃色、光滑、濕潤、隆起、直徑0.2~1mm、中心稍混濁的均勻小菌落；在氯化鈉蔗糖瓊脂平板上為半透明或不透明、直徑2~3mm、沒有粘性圓形菌落；在SS瓊脂平板上為圓形、扁平、光滑濕潤、邊緣整齊、蠟滴狀、直徑1~2mm的菌落；在TCBS平板上有4個藍綠色可疑菌落生長，菌落邊緣整齊、濕潤半透明、直徑2~4mm、圓形。

2.2 涂片、染色及鏡檢 挑取可疑菌落涂片、革蘭氏染色鏡檢可見到兩端濃染，呈棒狀、弧狀或卵圓狀多形態的革蘭氏陰性菌。

2.3 3%氯化鈉三糖鐵試驗 底層變黃、斜面變紅、不產氣、不產生硫化氫。

2.4 嗜鹽性試驗 在3%、6%和8%氯化鈉胰胨水中生長良好，0%和10%氯化鈉胰胨水中不生長。

2.5 生化鑒定 結果見表1。

表1 副溶血性弧菌生化反應結果

注：“+”為陽性；“-”為陰性；

2.6 致病性試驗 4只小白鼠于36~72h內死亡，對照組小白鼠飼喂1周仍健活。剖檢采取死亡小白鼠臟器進行細菌分離，獲得與原分離菌株一致的陰性小桿菌，試驗結果表明原分離菌具有較強的致病性。

2.7 檢測結果 見表2。

表2 海產品中副溶性弧菌的檢測結果 （%）

3 討論

（1）在32份樣品中檢出副溶血性弧菌陽性4份，陽性率13.33%。3種樣品(魚類、貝類、甲殼類)中均有不同程度的副溶血性弧菌存在，13份魚類樣品中VP陽性率7.69%；9份貝類中VP陽性率是22.22%；10份甲殼類中VP陽性率是10%。以貝類最高，其次是甲殼類，最低魚類。（2）檢測結果表明，大通縣市售海產品中存在副溶血性弧菌污染，食用海產品存在一定的安全隱患。由于本縣銷售的海產品均由外省調入，在運輸或包裝過程中污染VP的機率可能增加，因此，在食用各類海產品時一定要注意對該菌的衛生防范，嚴把食品質量關，避免交叉污染，避免該菌引起食物中毒。（3）從試驗結果分析，不同種類海產品中副溶血性弧菌帶菌率高低不同，這可能與各自的生活習性、攝食方式等有關，如貝類多生活在海底泥沙中，是濾過性攝食，其體內副溶血性弧菌濃縮而帶菌率較高[2]。副溶血性弧菌為嗜鹽菌，主要分布于海水和海產品中，生食魚、蝦等海產品可造成本菌食物中毒。這次抽檢的陽性菌株來自冷凍海產品，這說明本縣市售冷凍海產品存在二次污染或交叉污染。（4）預防副溶血性弧菌食物中毒的措施。在我國由于從業人員衛生意識不強，交叉污染和再次污染的現象經常發生，據資料反映引起副溶血性弧菌中毒的食物除海產品外，還有涼拌菜和熟食制品等[3-4]。因此，生、熟食物的廚具要分開，用完后進行嚴格的消毒處理。同時，生、熟食物應分開放置，避免造成交叉污染，特別是熟食制品[4]。副溶血性弧菌不耐熱，56℃加熱5min，或90℃加熱1min，即可將其殺滅。因此加工過程中要煮熟、煮透。禁止生吃或吃半生不熟的海產品。監管部門加大對副溶血性弧菌的污染狀況的監控。對污染程度較大的海域可采取禁止捕獲或關閉養殖場等措施，防止高風險食品進入消費市場；對污染較輕的海域可采取控制海產品的采收數量或暫養凈化[5]等措施降低該菌的污染。

[1] 陳瑞英，魯建章. 食品中副溶血性弧菌的危害分析、檢測與預防控制[J], 食品科學, 2007, 28: 341-347.

[2] 陳炳卿. 營養與食品衛生學第3版[M]. 北京: 人民衛生出版社, 1994: 212-214.

[3] 丁建華, 周壽榮一起副溶血清弧菌引起的學生集體食物中毒[J]. 中國校醫, 2004, 18(12): 155.

[4] 羅坤祿. 一起由副溶血清弧菌引起食物中毒[J]. 報告預防醫學情報雜志, 2004, 20(4): 453-455.

[5] 楊文斌, 王紅美. 海南省中學一起食物中毒的調查分析[J]. 中國熱帶醫學, 2004, 4(2): 258.

[6] ANDREWSLS. Strategies to Control Vibrios in molluscan shellish. Food protection Trends, 2004, 24(2): 70-76.

（2014–02–09）

Q939.14+9

A

1007-1733(2014)05-0017-02