RS4型抗性淀粉對(duì)齊口裂腹魚生長(zhǎng)、脂肪代謝及相關(guān)基因表達(dá)的影響

向世瓊，鄔應(yīng)龍*

（四川農(nóng)業(yè)大學(xué)食品學(xué)院，四川 雅安 625014）

RS4型抗性淀粉對(duì)齊口裂腹魚生長(zhǎng)、脂肪代謝及相關(guān)基因表達(dá)的影響

向世瓊，鄔應(yīng)龍*

（四川農(nóng)業(yè)大學(xué)食品學(xué)院，四川 雅安 625014）

目的：研究RS4型抗性淀粉對(duì)齊口裂腹魚生長(zhǎng)性能、脂肪代謝以及相關(guān)基 因表達(dá)量的影響。方法：將體質(zhì)量75 g左右的齊口裂腹魚隨機(jī)分為RS4型抗性淀粉添加量為0%（對(duì)照組）、3. 5%、7%、14%、28% 5組。飼喂60 d，測(cè)定生長(zhǎng)性能指標(biāo)、血脂水平，并采用實(shí)時(shí)熒光定量聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)技術(shù)檢測(cè)各組肌肉及肝臟中過氧化物酶增殖體激活受體α（peroxisome proliferators activated receptor s-alpha，PPARα）、脂肪酸結(jié)合蛋白（fatty acid-binding prot ein，F(xiàn)ABP）mRNA表達(dá)水平。結(jié)果：添加RS4型抗性淀粉劑量為7%和14%時(shí)與對(duì)照組相比能顯著增加齊口裂腹魚的體質(zhì)量、攝食率、特定生長(zhǎng)率（P＜0.05），添加劑量為28%時(shí)能夠顯著增加攝食率，但是對(duì)體質(zhì)量和特定生長(zhǎng)率沒有顯著的影響。添加劑量 到達(dá)14%及以上時(shí)與對(duì)照組相比能夠顯著降低血脂水平及肌肉中心型脂肪酸結(jié)合蛋白（heart-fatty acid-binding protein，H-FABP mRNA）表達(dá)水平，且H-FABP與肌內(nèi)脂肪呈正相關(guān)性。添加劑量達(dá)7%及以上時(shí)能夠顯著升高肌肉和肝臟中PPARα mRNA表達(dá)水平，降低肝臟中FABP mRNA表達(dá)水平。結(jié)論：適當(dāng)?shù)奶砑覴S4型抗性淀粉能夠促進(jìn)齊口裂腹魚的生長(zhǎng)、并且調(diào)節(jié)脂質(zhì)代謝相關(guān)基因的表達(dá)，降低了腸系脂肪及肌內(nèi)脂肪沉積。

抗性淀粉；齊口裂腹魚；實(shí)時(shí)熒光定量聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)；過氧化物酶增殖體激活受體α；脂肪酸結(jié)合蛋白

齊口裂腹魚（Schizothorax prenanti Tchang）是我國(guó)川西北高原特有冷水性魚類，屬鯉形目， 鯉科，裂腹魚亞科，裂腹魚屬。其肉質(zhì)細(xì)嫩、味道鮮美，賴氨酸含量極為豐富，可作為賴氨酸的天然強(qiáng)化食品，在我國(guó)西部及東北地區(qū)的冷水養(yǎng)殖中具有很大的發(fā)展?jié)摿蛷V闊的市場(chǎng)養(yǎng)殖前景[1]。

歐洲抗性淀粉研究協(xié)會(huì)1993年將抗性淀粉定義為：不被健康人體小腸所吸收的淀粉及其降解產(chǎn)物的總稱。根據(jù)抗性淀粉產(chǎn)生抗性的原理不同一般將其分為4種，RS4型為其中一種，即通過物理或化學(xué)變性后，淀粉分子結(jié)構(gòu)的改變及化學(xué)官能團(tuán)的引入而產(chǎn)生的抗酶解淀粉，如檸檬酸淀粉酯。研究表明，RS4型抗性淀粉作為一種新型的可溶性膳食纖維，能夠調(diào)節(jié)血糖和脂質(zhì)代謝[2-3]。譚青松[4]研究表明在魚餌料添加適量的纖維素能夠刺激腸道的運(yùn)動(dòng)，改善腸道對(duì)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的吸收。Shimotoyodome等[5]研究表明RS4型抗性淀粉能夠增加肝臟脂肪酸氧化能力及相關(guān)基因的表達(dá)。它還能增加腸道短鏈脂肪酸的含量，預(yù)防結(jié)腸癌等腸道疾病的發(fā)生[6-8]。RS4型抗性淀粉對(duì)于哺乳動(dòng)物的調(diào)節(jié)血糖和脂質(zhì)代謝的功能在國(guó)內(nèi)外都研究的比較深入，但是其對(duì)魚類的生長(zhǎng)、脂質(zhì)代謝調(diào)節(jié)作用的研究甚少。本實(shí)驗(yàn)主要研究不同劑量RS4型抗性淀粉對(duì)齊口裂腹魚的生長(zhǎng)性能的影響，并通過實(shí)時(shí)熒光定量聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)技術(shù)（real time fluorescence quantitative polymerase chain reaction，RT-PCR）檢測(cè)齊口裂腹魚脂質(zhì)代謝相關(guān)基因氧化物酶體增殖物激活受體（peroxisome proliferators activated receptors-alpha，PPARα）、脂肪酸結(jié)合蛋白（fatty acid-binding protein，F(xiàn)ABP）mRNA表達(dá)水平，探討RS4型抗性淀粉對(duì)齊口裂腹魚脂質(zhì)代謝調(diào)節(jié)機(jī)制，以拓寬抗性淀粉應(yīng)用范圍。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

RS4型抗性淀粉實(shí)驗(yàn)室自制[9]。

總膽固醇（total cholesterol，TC）、甘油三酯（triglyceride，TG）、高密度脂蛋白膽固醇（high density lipoprotein cholesterol，HDL-C）、低密度脂蛋白膽固醇（low density lipoprotein cholesterol，LDL-C）試劑盒 南京建成生物工程研究所；TRNzol 天根生化科技公司；反轉(zhuǎn)錄試劑盒、SYBR?Premix Ex TaqTM日本TaKaRa公司；瓊脂糖 西班牙 Spain公司；熒光定量八連板 寶生物工程（大連）有限公司。

1.2 儀器與設(shè)備

PTC-150普通PCR儀、ABI7500實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀、HM-I型水平電泳槽、LG9905-060電泳儀 美國(guó)Bio-Rad公司；UVP White/Ultraviolet凝膠成像系統(tǒng) 美國(guó)UVP公司；微量移液器、Centrifuge 5810R高速低溫離心機(jī) 德國(guó)Eppendorf公司。

1.3 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物及管理

1.3.1 實(shí)驗(yàn)用魚

齊口裂腹魚（Schizothorax prenanti Tchang）為雅安天全縣雅魚場(chǎng)2012年孵化的同一批魚種。體質(zhì)量（75.47±5.12）g/尾，體長(zhǎng)（16.09±0.73）cm。選擇體質(zhì)健壯的魚種240尾，用20 mg/L的KMnO4消毒15 min。

1.3.2 飼料及分組

飼料配方參照NRC[10]魚類營(yíng)養(yǎng)需要和段彪等[11]的齊口裂腹魚飼料配方設(shè)計(jì)基礎(chǔ)飼料配方，見表1。

表1 實(shí)驗(yàn)飼料的干基組成及營(yíng)養(yǎng)水平Table 1 Composition and nutrient levels of the experimental diets (on dry basis)

在基礎(chǔ)飼料中分別添加0%（對(duì)照組）、3.5%、7%、14%、28% RS4型抗性淀粉（等量減少小麥淀粉用量），共5個(gè)劑量組，每個(gè)劑量組4個(gè)重復(fù)，每個(gè)重復(fù)12尾魚。各種飼料原料均過40目篩，充分混合后加工成1 mm的硬顆粒飼料，烘干并保存于冰箱中，破碎后投喂。

1.3.3 飼養(yǎng)管理

實(shí)驗(yàn)魚飼養(yǎng)于20個(gè)玻璃缸中（2.0 m×1.5 m× 1.2 m），水深0.6 m。用基礎(chǔ)飼料馴化14 d，待魚攝食正常后開始實(shí)驗(yàn)，日投喂3次，投餌率為體質(zhì)量2%～2.5%，并根據(jù)水溫、攝食情況進(jìn)行調(diào)整，各組保持一致的投飼量。養(yǎng)殖實(shí)驗(yàn)期間水溫16～20℃，溶解氧＞5.0 mg/L、NH3-N含量＜0.3 mg/L，晝夜充氣。

1.4 方法

1.4.1 樣品采集

實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí)，對(duì)實(shí)驗(yàn)魚饑餓24 h，尾靜脈采血，每尾魚的血樣分別放置在4 ℃靜置12 h后，4 ℃、3 000 r/min離心15 min，取其上清液（即血清），－80 ℃保存?zhèn)溆谩＝馄屎笱杆偃〕龈闻K及肌肉，放入液氮中，－80 ℃保存?zhèn)溆谩?/p>

1.4.2 指標(biāo)計(jì)算

式中：mo為實(shí)驗(yàn)開始時(shí)魚體質(zhì)量/g；mt為實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí)魚體質(zhì)量/g；mh為實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí)魚肝臟質(zhì)量/g；mm為實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí)魚腸系膜脂肪質(zhì)量/g；no為實(shí)驗(yàn)開始時(shí)魚的尾數(shù)；nt為實(shí)驗(yàn)結(jié) 束時(shí)魚的尾數(shù)；mF為飼料攝入質(zhì)量/g；t為養(yǎng)殖實(shí)驗(yàn)時(shí)間/d；Lt為實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí)魚的體長(zhǎng)/cm。

1.4.3 肌內(nèi)脂肪含量（intramuscular fat，IMF）測(cè)定

取齊口裂腹魚肌肉組織（n=12），參照GB/T 5009.6—2003《食品中脂肪的測(cè)定》采用索氏化學(xué)抽提法測(cè)定肌肉脂肪含量。

1.4.4 血清脂質(zhì)含量的測(cè)定

按照說明書的方法測(cè)定血清中TC、TG、HDL-C、LDL-C含量。極低密度脂蛋白膽固醇（very low density lipoprotein cholesterol，VLDL-C）含量按公式（9）計(jì)算。

VLDL-C含量=TC含量－HDL-C含量－LDL-C含量 （9）

1.4.5 引物設(shè)計(jì)與合成

用Primer Premier 5.0軟件根據(jù)GenBank中齊口裂腹魚β-actin基因序列（JQ013000）、PPARα基因序列（KF316324）、FABP基因序列（GU205786）設(shè)計(jì)特異性引物，引物序列見表2。

表2 引物序列及退火溫度Table 2 Primer sequences and anneal temperatures

1.4.6 總RNA提取和cDNA制備

參照TRNzol總RNA提取試劑盒（TIANGEN）說明書方法提取RNA，用10g/L的瓊脂糖凝膠電泳鑒定提取RNA的完整性，通過OD260nm/OD280nm檢測(cè)樣本純度。

cDNA由逆轉(zhuǎn)錄試劑盒法制備，放置于－20 ℃?zhèn)溆谩?/p>

1.4.7 RT-PCR基因檢測(cè)

采用SYBRGreen I 熒光染料法，10 μL反應(yīng)體系，含5 μL SYBR?Premix Ex TaqTM（2×）、上下游引物各0.25 μL、1 μL cDNA、3.5 μL 焦碳酸二乙酯（diethyl pyrocarbonate，DEPC）水。RT-PCR步驟：95 ℃、3 min；95 ℃、10 s，各基因相應(yīng)退火溫度條件下退火30 s、39個(gè)循環(huán)；95 ℃、10 s；擴(kuò)增完畢后，迅速降溫到65 ℃進(jìn)行溶解曲線分析，然后以0.5 ℃/s的速率從65 ℃遞增到95 ℃，連續(xù)測(cè)定樣品熒光強(qiáng)度以獲取溶解曲線。

1.4.8 相對(duì)表達(dá)量的分析

以β-actin基因作為內(nèi)參基因，選擇一校準(zhǔn)樣本，比較待測(cè)樣本相對(duì)校準(zhǔn)樣本的表達(dá)差異，利用2－ΔΔCt法進(jìn)行相對(duì)定量分析[12]。

結(jié)果是通過參照基因表達(dá)水平校正的待測(cè)樣本中的目標(biāo)基因相對(duì)于校準(zhǔn)樣本的相對(duì)表達(dá)量，用參照基因校準(zhǔn)目標(biāo)基因表達(dá)來彌補(bǔ)樣本組織量的差異。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

2 結(jié)果與分析

2.1 RS4型抗性淀粉對(duì)齊口裂腹魚生長(zhǎng)及飼料利用率的影響

表3 不同水平的RS4型抗性淀粉對(duì)齊口裂腹魚生長(zhǎng)及飼料利用率的影響）Table 3 Effect of RS4 starch at various levels on growth and feed utilization rate of Schizothorax prenanti Tcha

表3 不同水平的RS4型抗性淀粉對(duì)齊口裂腹魚生長(zhǎng)及飼料利用率的影響）Table 3 Effect of RS4 starch at various levels on growth and feed utilization rate of Schizothorax prenanti Tcha

注：同行數(shù)據(jù)肩標(biāo)不同小寫字母表示差異顯著（P＜0.05）。下同。

項(xiàng)目對(duì)照組3.5%RS4劑量組7%RS4劑量組14%RS4劑量組 28%RS4劑量組初體質(zhì)量/g 75.67±5.2375.25±4.4575.74±5.6876.14±3.6576.52±4.63相對(duì)增重率/% 0.27±0.01b0.21±0.02b0.31±0.01a0.31±0.01a0.25±0.02b餌料系數(shù)3.51±0.05b3.52±0.02b2.99±0.11c3.10±0.04c3.66±0.05a攝食率/（%/d）1.05±0.08b1.13±0.06b1.47±0.04a1.48±0.03a1.45±0.03a特定生長(zhǎng)率/（%/d）0.30±0.02b0.32±0.03b0.46±0.03a0.44±0.04a0.34±0.02b成活率/%100100100100100

由表3可見，RS4型抗性淀粉添加量為7%和14%與其他組相比能顯著增加齊口裂腹魚的體質(zhì)量（P＜0.05），添加量為3.5%和28%對(duì)魚的體質(zhì)量沒有顯著的影響；7%RS4劑量組、14%RS4劑量組與對(duì)照組相比能顯著降低餌料系數(shù)（P＜0.05），3.5%RS4劑量組與對(duì)照組相比無顯著的影響，但是28%RS4劑量組與對(duì)照組相比顯著的增加了餌料系數(shù)（P＜0.05）；當(dāng)抗性淀粉添加量達(dá)到7%及以上時(shí)，能顯著的增加齊口裂腹魚的攝食率（P＜0.05）；7%RS4劑量、14%RS4劑量組與其他組相比能顯著提高魚的特定生長(zhǎng)率（P＜0.05），3.5%RS4劑量組、28%RS4劑量組與對(duì)照組相比對(duì)魚的特定生長(zhǎng)率無顯著影響。

2.2 RS4型抗性淀粉對(duì)齊口裂腹魚形體指標(biāo)和內(nèi)臟指數(shù)的影響由表4可知，RS4型抗性淀粉添加量為14%時(shí)能夠顯著降低齊口裂腹魚的肥滿度（P＜0.05），其他組對(duì)肥滿度沒有顯著影響；添加3.5%的抗性淀粉對(duì)齊口裂腹魚的腸脂比沒有顯著影響，但隨著添加劑量的增加，抗性淀粉組的腸脂比顯著降低；添加抗性淀粉對(duì)齊口裂腹魚的肝體比沒有顯著影響。

表4 不同水平的RS4型抗性淀粉對(duì)齊口裂腹魚形體指標(biāo)和內(nèi)臟指數(shù)的影響（）Table 4 Effect of RS4 starch at various different levels on body parameters and visceral indices of Schizothorax prenanti Tcha

表4 不同水平的RS4型抗性淀粉對(duì)齊口裂腹魚形體指標(biāo)和內(nèi)臟指數(shù)的影響（）Table 4 Effect of RS4 starch at various different levels on body parameters and visceral indices of Schizothorax prenanti Tcha

項(xiàng)目對(duì)照組3.5%RS4劑量組7%RS4劑量組14%RS4劑量組 28%RS4劑量組肥滿度/（g/cm3）1.61±0.17a1.48±0.09ab1.49±0.17ab1.46±0.06b1.51±0.14ab腸脂比/%1.23±0.31a0.82±0.29ab0.74±0.32b0.71±0.08b0.74±0.15b肝體比/%1.46±0.311.45±0.6131.46±0.251.47±0.461.46±0.05

2.3 RS4型抗性淀粉對(duì)齊口裂腹魚血脂水平的影響

表5 不同水平的RS4型抗性淀粉對(duì)齊口裂腹魚血脂水平的影響Table 5 Effect of RS4 starch at various levels on serum lipid levels of Schizothorax prenanti Tchan

表5 不同水平的RS4型抗性淀粉對(duì)齊口裂腹魚血脂水平的影響Table 5 Effect of RS4 starch at various levels on serum lipid levels of Schizothorax prenanti Tchan

VLDL-C含量/（mmol/L）對(duì)照組7.77±0.54a3.39±0.99a3.05±0.28b1.53±0.25a2.96±0.04a3.5%RS4劑量組6.85±0.24ab2.62±0.45ab3.64±0.19ab0.80±0.1b2.13±0.28ab7%RS4劑量組7.10±1.71ab2.68±0.53ab3.56±0.34ab1.23±0.39a2.56±0.11a14%RS4劑量組5.93±0.32b1.90±0.20b3.95±0.67a0.53±0.06b1.46±0.35b28%RS4劑量組5.35±1.01b2.11±0.08b2.93±0.20b0.57±0.16b1.34±0.07b組別TC含量/（mmol/L）TG含量/（mmol/L）HDL-C含量/（mmol/L）LDL-C含量/（mmol/L）

由表5可見，當(dāng)RS4型抗性淀粉添加量低于7%時(shí)對(duì)TC、TG、VLDL-C含量無顯著影響，但當(dāng)劑量達(dá)到14%及以上時(shí)，能夠顯著降低血清TC、TG、VLDL-C含量（P＜0.05）；14%RS4劑量組與對(duì)照組相比能顯著增加HDL-C含量（P＜0.05），其他組與對(duì)照組相比無顯著差異；3.5%RS4、14%RS4、28%RS4劑量組與對(duì)照組相比能夠顯著降低LDL-C含量（P＜0.05），7%RS4劑量組與對(duì)照組相比無顯著影響。

2.4 RS4型抗性淀粉對(duì)齊口裂腹魚IMF的影響

圖1 RS4型淀粉對(duì)齊口裂腹魚IMF含量的影響Fig.1 Effect of RS4 starch at various levels on intramuscular fat content

由圖1可見，RS4型抗性淀粉添加量小于7%時(shí)對(duì)齊口裂腹魚IMF含量沒有顯著影響，但當(dāng)劑量達(dá)到14%時(shí)能夠顯著降低IMF含量（P＜0.05），隨著劑量的增高影響越顯著。

2.5 RS4型抗性淀粉對(duì)齊口裂腹魚肌肉和肝臟中PPARα及FABP mRNA表達(dá)水平的影響

2.5.1 肌肉中PPARα m RNA的表達(dá)

圖2 肌肉中PARα mRNA表達(dá)水平比較Fig.2 PPARα gene expression level in muscle

由圖2可見，RS4型抗性淀粉組肌肉中PPARα mRNA表達(dá)水平均顯著高于對(duì)照組（P＜0.05），其中RS4組顯著高于其他組（P＜0.05）。

圖3 肝臟中PPARα mRNA表達(dá)水平比較Fig.3 PPARα gene expression level in liver

2.5.2 肝臟中PPARα mRNA的表達(dá)由圖3可見，齊口裂腹魚肝臟中PPARα mRNA表達(dá)水平趨勢(shì)與肌肉中相似，RS4型抗性淀粉組肝臟中PPARα mRNA表達(dá)水平均顯著高于對(duì)照組（P ＜0.05），與肌肉不同的是14%RS4組與其他抗性淀粉劑量組之間沒有顯著性差異（P＞0.05）。

2.5.3 肌肉中H-FABP mRNA的表達(dá)

圖4 肌肉中H-FABP mRNA 表達(dá)水平比較Fig.4 H-FABP gene expression level in muscle

由圖4可知，當(dāng)RS4型抗性淀粉添加劑量達(dá)到14%及以上時(shí)能夠顯著降低心型脂肪酸結(jié)合蛋白（heart fatty acid-binding protein，H-FABP）mRNA表達(dá)水平（P＜0.05），添加劑量為3.5%、7%對(duì)H-FABP mRNA表達(dá)水平?jīng)]有顯著影響（P＞0.05）。

2.5.4 肝臟中FABP mRNA的表達(dá)

圖5 肝臟中FABP mRNA表達(dá)水平比較Fig.5 FABP gene expression level in liver

由圖5可知，抗性淀粉的劑量為3.5%時(shí)對(duì)肝臟FABP mRNA表達(dá)量與對(duì)照組相比無顯著影響（P＞0.05）；當(dāng)劑量達(dá)到7%時(shí)能夠顯著降低肝臟中FABP mRNA表達(dá)量（P＜0.05），并且隨著劑量的增高，影響越顯著，降低的趨勢(shì)與肌肉中的結(jié)果一樣。

3 討 論

本實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，RS4型抗性淀粉能夠促進(jìn)齊口裂腹魚的體質(zhì)量增加，并且能夠顯著提高魚的攝食率和特定生長(zhǎng)率，這可能是由于飼料中含有適量的纖維素刺激腸道的運(yùn)動(dòng)加劇，提高了齊口裂腹魚的攝食并改善了腸道對(duì)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的吸收，這與譚青松[4]的研究結(jié)果一致，齊口裂腹魚屬于雜食性魚類，對(duì)碳水化合物的利用高于肉食性魚類。但是當(dāng)劑量達(dá)到28%時(shí)餌料系數(shù)顯著增加，特定生長(zhǎng)率與對(duì)照組相比卻沒有影響，表明飼料中過高的抗性淀粉影響了齊口裂腹魚對(duì)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的吸收利用，也就降低飼料的利用率。

本實(shí)驗(yàn)中，抗性淀粉添加劑量7%以上能夠顯著的升高肌肉和肝臟中PPARα mRNA表達(dá)水平，與王欣[13]的研究結(jié)果一致，PPARα是調(diào)節(jié)脂肪酸氧化分解代謝的最重要的一種核轉(zhuǎn)錄因子，可以調(diào)節(jié)若干線粒體脂肪酸催化酶的表達(dá)，通過誘導(dǎo)肌肉和肝臟特異性的肉毒堿棕櫚酰轉(zhuǎn)運(yùn)酶表達(dá)而調(diào)控脂肪酸向線粒體的轉(zhuǎn)運(yùn)[14-15]，促進(jìn)TG的循環(huán)，維持體內(nèi)脂質(zhì)穩(wěn)態(tài)從而降低了血清中TC、TG的含量，同時(shí)本實(shí)驗(yàn)齊口裂腹魚的腸系膜脂肪沉積減少， IMF含量也降低。PPARα?xí)璧KApoE基因的表達(dá)，使脂蛋白脂酶（lipoprotein lipase，LPL）的活性增強(qiáng)，促進(jìn)LPL基因表達(dá)，導(dǎo)致血中富含TG的脂蛋白，如乳糜微粒和VLDL-C分解代謝加劇，血中TG水平降低，進(jìn)而引起富含TG的LDL-C水平降低。肝臟中FABP可以調(diào)節(jié)膽固醇的吸收和代謝，且能影響膜雙分子層中膽固醇的移動(dòng)。新近研究證實(shí)L-FABP主要由PPARα來調(diào)控。PPARα與L-FABP基因啟動(dòng)子區(qū)的過氧化物酶體增殖物反應(yīng)元件結(jié)合，調(diào)節(jié)其轉(zhuǎn)錄[16]。在脂肪代謝中，L-FABP增高，使TC、TG積聚，導(dǎo)致脂質(zhì)代謝紊亂。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果中，RS添加劑量7%及以上時(shí)肝臟中FABP mRNA表達(dá)水平下降，在FABP與PPARα的共同調(diào)控作用下血清中TC、TG、LDL-C含量也隨之下降，與Liu等[17]報(bào)道結(jié)果一致。但Enes[18]的研究結(jié)果瓜兒膠（與RS4一樣是屬于可溶性非淀粉多糖）不影響白海鯛的血清膽固醇和甘油三酯水平。Kim等[19]也報(bào)道了小鼠攝食高RS水平的玉米淀粉，可以降低其肝臟中總脂和膽固醇水平，表明RS的降血脂作用可能是通過干擾腸道膽固醇和膽汁酸的吸收而對(duì)其造成影響。本實(shí)驗(yàn)研究結(jié)果表明當(dāng)RS劑量達(dá)到7%以上時(shí)能夠降低齊口裂腹魚血清中TC、TG、LDL-C、VLDL-C水平，并且從基因表達(dá)水平上初步解釋了可能原因是上調(diào)了PPARα mRNA的表達(dá)、同時(shí)肝臟FABP mRNA表達(dá)水平下降，促進(jìn)了脂肪酸的氧化分解代謝。

H-FABP的mRNA水平與影響肉質(zhì)性狀的肌內(nèi)脂肪IMF含量有關(guān)，可作為 肉質(zhì)的候選基因[20-22]。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，當(dāng)RS4型抗性淀粉劑量達(dá)到14%及以上時(shí)能夠顯著降低齊口裂腹魚肌肉中H-FABP mRNA表達(dá)水平，與IMF含量變化趨勢(shì)一致，本研究結(jié)果與報(bào)道的肌肉中IMF含量與H-FABP呈顯著正相關(guān)的結(jié)果一致[23]。結(jié)果表明，添加適當(dāng)劑量的RS4型抗性淀粉不僅能夠調(diào)節(jié)哺乳動(dòng)物的脂質(zhì)代謝，同樣能夠調(diào)節(jié)齊口裂腹魚的脂質(zhì)代謝，魚的特定生長(zhǎng)率及攝食率顯著提高，腸系膜脂肪和肌內(nèi)脂肪卻減少，表明更多的脂肪不是用于儲(chǔ)存而是用作能量消耗，使一部分本應(yīng)供能的蛋白質(zhì)用于生長(zhǎng)，從而提高了齊口裂腹魚的生長(zhǎng)性能，降低了魚體脂肪沉積。

[1] 李瑞文, 林亞秋, 鄭玉才, 等. 齊口裂腹魚PGC-1α基因編碼區(qū)的克隆及其在肌肉組織中的表達(dá)[J]. 生物技術(shù)通訊, 2013, 24(1): 72-75.

[2] SAJILATA M G, SINGHAL R S, KULKARNI P R. Resistant starch: a review[J]. Comprehensive Reviews in Food Science and Food Safety, 2006, 5: 1-17.

[3] LEE K Y, YOO S H, LEE H G. The effect of chemically-modified resistant starch, RS type-4, on body weight and blood lipid profiles of high fat diet-induced obese mice[J]. Starch- St?rke, 2012, 64(1): 78-85.

[4] 譚青松. 飼料中不同來源淀粉對(duì)異育銀鯽和長(zhǎng)吻鮠生長(zhǎng)和代謝的影響[D]. 武漢: 中國(guó)科學(xué)院研究生院, 2005.

[5] SHIMOTOYODOME A, SUZUKI J, FUKUOKA D, et al. RS4-type resistant starch prevents high-fat diet-induced obesity via increased hepatic fatty acid oxidation and decreased postprandial GIP in C57BL/6J mice[J]. American Journal of Physiology, 2010, 298: 652-662.

[6] SUZUKI T, YOSHIDA S, HARA H. Physiological concentrations of short-chain fatty acids immediately suppress colonic epithelial permeability[J]. British Journal of Nutrition, 2008, 100(2): 297-305.

[7] RICHARD K L, HU Ying. Effects of resistant starch on genotoxininduced apoptosis, colonic epithelium, and luminal contents in rats [J]. Carcinogenesis, 2003, 24(8): 1347-1352.

[8] RICHARD K L, HU Ying. A synbiotic combination of resistant starch and Bifidobacterium lactis facilitates apoptotic deletion of carcinogendamaged cells in rat colon[J].The Journal of Nutrition, 2005, 135(5): 996-1001.

[9] 王步樞, 鄔應(yīng)龍. 檸檬酸甘薯淀粉酯制備工藝優(yōu)化及性質(zhì)研究[J].食品科學(xué), 2012, 33(24): 86-91.

[10] NRC (National Research Council). Nutrient requirement of fish[M]. Washington, DC: National Academy Press, 1993.

[11] 段彪, 向梟, 周興華, 等. 齊口裂腹魚飼料中適宜脂肪需要量的研究[J].動(dòng)物營(yíng)養(yǎng)學(xué)報(bào), 2007(3): 232-236.

[12] PFAFFL M W. A new mathematical model for relative quantification in real-time RT-PCR[J]. Nucleic Acids Research, 2001, 29(9): 41-45.

[13] 王欣. RS4型甘薯抗性淀粉對(duì)高脂飲食小鼠炎癥因子及PPARα mRNA表達(dá)的影響[D]. 雅安: 四川農(nóng)業(yè)大學(xué), 2013: 21-32.

[14] MICHUNG Y. PPARα in obesity: sex difference and estrogen involvement[J]. PPAR Research, 2010, 10: 1155-1171.

[15] MANDARD S, MüLLAR M, KERSTEN S. Peroxisome proliferatoractivated receptors-alpha target genes[J]. Cellular and Molecular Life Sciences, 2004, 61: 393-416.

[16] ATSHAVES B P, MARTIN G G, HOSTETLER H A, et al. Liver fatty acid-binding protein and obesity[J]. The Journal of Nutritional Biochemistry, 2010, 21(11): 1015-1032.

[17] LIU X, OGAWA H, KISHIDA T, et al. Hypolipidaemic effect of maize starch with different amylose content in ovariectomized rats depends on intake amount of resistant starch[J]. British Journal of Nutrition, 2009, 101(3): 328-339.

[18] ENES P, POUSAO-FERREIRA C, SALMERON, et al. Effect of guar gum on glucose and lipid metabolism in white sea bream Diplodus sargus[J]. Fish Physiology and Biochemistr y, 2013, 39(2): 159-169.

[19] KIM W K, CHUNG M K, KANG N E, et al. Effect of resistant starch from corn or rice on glucose control, colonic events, and blood lipid concentrations in streptozotocin-induced diabetic rats[J]. The Journal of Nutritional Biochemistry, 2003, 14(3): 166-172.

[20] MICHAL J J, ZHANG Z W, GASKINS C T, et al. The bovine fatty acid binding protein 4 gene is significantly associated with marbing and subcutaneous fat depth in Wayu×Limousin F2 crosser[J]. Animal Genetics, 2006, 37(4): 400-402.

[21] YE M H,CHEN J L, ZHAO G P, et al. Associations of A-FABP and H-FABP markers with the content of intramuscular fat in Beijing-you chicken[J]. Animal Biotechnology, 2010, 21(1): 14-24.

[22] LEE S H, CHOI Y M, CHOE J H, et al. Association between polymorphisms o f the heart fatty acid binding protein gene and intemuscular fat content, fatty acid composition, and meat quality in Berkshire breed[J]. Meat Science, 2010, 86(3): 794-800.

[23] 林亞秋, 李瑞文, 鄭玉才, 等. 齊口裂腹魚和鯉魚H-FABP基因的克隆及其表達(dá)譜[J]. 中國(guó)生物化學(xué)與分子生物學(xué)報(bào), 2012, 27(6): 554-560.

Effect of RS4-Type Resistant Starch on Growth Performance, Lipid Metabolism and Related Gene Expression in Schizothorax prenanti Tchang

XIANG Shi-qiong, WU Ying-long*
(College of Food Science, Sichuan Agricultural University, Ya’an 625014, China)

Obje ctive: To explore the effect of RS4-type resistant starch on growth performance, lipid metabolism and related gene expression in Schizothorax prenanti Tchang. Methods: Schizothorax prenanti Tchang weighed about 75 g were randomly div ided into five groups which were fed RS 4-type resistant starch at doses of 0 (control), 3.5%, 7%, 14% an d 28%, respectively. After 60 days of administration, the growth performance and serum lipid levels were measured; meanwhile, peroxisome proliferators activated receptors-alpha (PPARα) and fatty acid-binding protein (FABP mRNA) expression levels in muscle and liver were determined by RT-PCR. Results: The body weight, feed intake and specific growth ratio of Schizothorax prenanti Tchang were significantly higher in the 7% and the 14% resistant starch groups than in the control group (P ＜ 0.05). Feed intake was significantly increased at the dose of 28%, but neither body weight nor specific growth ratio was significantly affected. The 14% resistant starch group showed significant reduced levels of blood lipids and heartfatty acid-binding protein (H-FABP) mRNA expression when compared to the control group, and a positive correlation existed between H-FABP mRNA expression and intramuscular fat (IMF) content. When the dose was as high as 7% or above, we observed a signifi cant increase in PPARα mRNA expression levels in muscle and liver but a significant decrease in FABP mRNA expression level in liver. Conclusion: Dietary supplementation with the appropriate amount of RS4-type resistant starch can promote the growth of Schizothorax prenanti Tchang, regulate lipid metabolism-related genes, and reduce the accumulation of mesenteric fat and intramuscular fat.

RS4-type resistant starch; Schizothorax prenanti Tchang; real time fluorescence quantitative polymerase chain reaction (RT-PCR); peroxisome proliferators activated receptors-alpha (PPARα); fatty acid-binding protein (FABP)

TS254.1

A

1002-6630（2014）07-0223-06

10.7506/spkx1002-6630-201407044

2013-07-18

四川省科技支撐計(jì)劃項(xiàng)目（2009NZ0077-007）；四川農(nóng)業(yè)大學(xué)“211”工程雙支計(jì)劃項(xiàng)目（2010）

向世瓊（1989—），女，碩士研究生，研究方向?yàn)楣δ苄允称贰-mail：xiangshiqiong@163.com

*通信作者：鄔應(yīng)龍（1963—），男，教授，博士，研究方向?yàn)楣δ苄允称贰-mail：wuyinglong99@163.com