結核抗體檢測在小兒結核病診斷中的應用

普 毅白圓圓雷 金孫 立

1.個舊市疾病預防控制中心，云南個舊 661000；2.個舊市第三人民醫院，云南個舊 661000

結核感染仍是威脅全世界人類健康的重要疾病，雖然我國公共衛生發展迅速，疫苗接種率較高，但近年來發生率又呈現反彈趨勢[1]，每年新增病例約占世界的15%，位居第二，其中兒童仍是結核病（TB）的主體人群[2]。目前，兒童結核發病初期診斷仍存在一定的困難，痰菌陽性率較低，肺外結核細菌檢查的陽性率更低[3]。本文通過對結核抗體檢測在小兒結核病診斷中的應用效果進行分析，旨在探討其在小兒肺結核診斷中的應用價值及優勢。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選擇本地區2012年3月—2013年3月收治的疑似結核病患兒患48例為觀察組，其中男21例，女27例，年齡6個月～11歲，平均5.7歲，肺結核29例，肺外結核19例。所有患兒的臨床表現和影像學檢查均符合結核感染的標準[4]。另以同期入院的非結核病患兒35例為對照組，男18例，女17例，年齡8至14歲，平均6.2歲，兩組間基本資料具有可比性（P>0.05）。

1.2 方法

所有患兒入院后均接受體液標本涂片、卡介菌純化蛋白衍生物和結核抗體檢測，體液涂片參照《結核病診斷細菌學檢驗規格》完成：采集患者5 mL痰液加入5 mL消化液，充分混勻后消化5～8 min，轉移至試管內并加入蒸餾水10 mL，以轉速為3000 r/min條件下離心10 min（Anke TDL-5-A型低速離心機，上海安亭科學儀器廠），棄上清，留沉渣0.2ml混勻后完成涂片，并以萋-尼（Ziehl-Neelsen）染色。PPD試驗：采用左前臂掌側中下1/3處皮內注射 PPD 0.1 mL（成都生物制品研究所），含PPD 5IU，于 72h后觀察，陽性標準：硬結直徑大于10 mm；結核抗體檢測：按照結核分枝桿菌膠體金法原理，采用結核抗體試劑盒（上海奧普生物醫藥有限公司，規格：20人/盒）進行檢測，操作方法：①在反應板中各孔內加入2 mL封閉液，等待薄膜吸入；②取患者40 mL采集受試者血清，加入反應孔中，等待薄膜吸入；③ 在反應孔中加入6滴洗活液，等待薄膜吸入；④加入2滴金標液，等待薄膜吸入；⑤加入6滴洗滌液，等待薄膜吸收，并目測結果。

1.3 統計學方法

所有數據分析采用SPSS 13.0進行統計學分析，計數資料采用χ2檢驗，以α=0.05為檢驗水準。

2 結果

2.1 檢測結果比較

三種方法在兩組間差異均具有統計學意義（P<0.05），結核病患兒診斷方面，三種方法間比較，以PPD法陽性率最高，涂片法最低，PPD法和結核抗體法陽性率差異不顯著（χ2=3.49，P>0.05），但均顯著高于涂片法（χ2=13.81和 5.32，P<0.05），非結核病患兒中，涂片法和結核抗體法的特異度均為100%，而PPD特異度僅為 77.1%，差異具有顯著性（P<0.01），見表 1。

表1 三種方法檢測結果比較

2.2 不同類型結核檢測結果比較

涂片法肺結核的陽性率顯著高于肺外結核（P<0.05），而PPD法和結核抗體法在肺結核和肺外結核的陽性率方面差異均不顯著（P>0.05），見表 2。

表2 不同類型結核檢測結果比較

3 討論

近年來，結核病的發病率呈抬頭趨勢，尤其是兒童免疫力較低，更易感染。傳統的結核感染診斷金標準主要依賴于體液涂片中結核桿菌的發現，輔以影像學等檢查確診，可用于結核病的早期診斷。但由于兒童呼吸系統發育不完善，結核肺內感染多見于肺內通氣較好，且膨脹度高的部位，加之咳痰困難，因而痰液中排菌率低[3]，均不利于診斷的早期完成。

近年來，小兒結核感染的早期診斷困難已經受到學界的普遍關注，相關的生物工程技術也陸續引入該領域，但均存在著一定的陽性率低，或假陽性率高的問題。PPD技術不僅可用于卡介苗免疫效果的評價，也逐漸應用于兒童潛伏感染的診斷，其陰性可在排除免疫因素外，作為機體未受到人工或自然感染的佐證，多用于潛伏感染的排查[5]，本研究也發現結核患兒PPD陽性率高達68.8%，與國內報道相近，但與結核抗體比較，差異不顯著（P>0.05）但均高于涂片法，可能與兒童體液中結核活菌少有關。同時也有報道表明雖然PPD方法靈敏，但影響因素較多，10%的患兒對其無應答[5]，且操作過程中部分患兒對其易產生不良反應，這也抑制了其使用。結核抗體研究始于1898年，作為結核感染的輔助診斷手段至今已有上百年的歷史，人感染結核菌后，即會有免疫應答，T淋巴細胞識別后，特異性的表達抗原，因而不受感染部位和活菌排出的影響，而且用于抗體檢測的新方法也不斷涌現[3-4]。黃紹梅等[3]報道表明與PPD法相比，結核抗體檢測可有效區分結核菌感染與、卡介苗注射以及其他分枝桿菌引發的特異性抗體表達，因而假陽性率較低。本組結果也表明在非結核病患者診斷時，結核抗體法特異度高達100%，顯著高于PPD法77.1%，這與國內報道相近[6]，提示結核抗體法可作為可靠的診斷依據。此外，結核感染部位也是限制診斷的重要因素，雖然涂片法和影像學診斷更為直接，但由于小兒肺外結核的體液獲取更為困難，也限制了診斷的完成，本研究結果表明，涂片法在肺結核的陽性率顯著高于肺外結核，而結核抗體法和PPD法在肺結核和肺外結核的診斷方面則無差別，提示體液應答不受感染部位的影響，因而結核抗體法具有較為穩定的診斷效果，更適于肺外結核的無創診斷，這與李曉非等[2]報道基本一致。

總之，結核抗體檢測、涂片法和PPD檢測在結核病診斷中各有特色，其中結核抗體檢測尤其適于作為兒童、肺外結核及無痰患者的快速輔助診斷手段。

[1]曾永學.肺結核的影像診斷及活動性評價 [J].現代醫藥衛生，2013,29（5）：751-752.

[2]李曉非，李冬玲，施巧霞，等.三種檢測方法對結核病診斷價值的比較研究[J].實用醫技雜志，2008,15（4）：451-452.

[3]黃紹梅，邱薇，許柳清.蛋白芯片法檢測結核抗體在兒童結核病中的診斷價值[J].廣東醫學，2012,33（16）：2421-2422.

[4]李瑞，劉繼賢，包麗麗，等.檢測分泌r-干擾素T細胞對診斷兒童結核的意義[J].醫技與臨床，2013,17（10）：80-83.

[5]周亞玲，鄭梅，鄭躍杰.深圳市553例門診兒童PPD試驗反應分析[J].第三軍醫大學學報，2008,30（17）：1676-1677.

[6]杜正強.結核抗體檢測在32例小兒結核病診斷中的臨床意義分析[J].山西醫藥雜志，2013,42（5）：574-575.