堿性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子促進(jìn)肺癌新生血管形成的機(jī)制

張春容 張 婷

(重慶醫(yī)科大學(xué)附屬永川醫(yī)院急診科，重慶 402160)

腫瘤的生長(zhǎng)、轉(zhuǎn)移高度依賴新生血管，因此誘導(dǎo)血管的生成生長(zhǎng)是實(shí)體瘤組織生長(zhǎng)、浸潤(rùn)及轉(zhuǎn)移的前提條件〔1〕。癌腫內(nèi)微血管密度(MVD)是分析惡性腫瘤生物學(xué)、行為特征的重要參數(shù)，癌腫內(nèi)MVD與其轉(zhuǎn)移、復(fù)發(fā)等有密切關(guān)系，因此，微血管計(jì)數(shù)也與惡性腫瘤的發(fā)生、轉(zhuǎn)移及復(fù)發(fā)、預(yù)后有一定相關(guān)性，是反映惡性腫瘤生物學(xué)行為的重要參數(shù)〔2,3〕。堿性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子(bFGF)是一種血管生長(zhǎng)因子，與腫瘤生長(zhǎng)、浸潤(rùn)及轉(zhuǎn)移具有高度的相關(guān)性。本研究應(yīng)用免疫組化法對(duì)肺癌患者血清中bFGF表達(dá)及MVD與病理特點(diǎn)的相關(guān)性進(jìn)行分析。

1 材料與方法

1.1一般資料 選擇2009年1月至2010年12月115例在本院腫瘤科活檢或外科手術(shù)切除的肺癌組織標(biāo)本，均經(jīng)病理確診。標(biāo)本在-80℃冰箱或液氮中凍存直至檢測(cè)用。其中男70例，女45例；年齡29～78〔平均(62.3±30.7)〕歲。病理類型：鱗癌49例(42.6%)，腺癌35例(30.4%)，腺鱗癌21例(18.3%)，大細(xì)胞癌10例(8.7%)。依據(jù)肺癌國際分類法進(jìn)行分期：Ⅰ期11例(9.6%)，Ⅱ期24例(20.9%)，Ⅲa 34例(29.6%)，Ⅲb期21例(18.3%)，Ⅳ期25例(21.7%)。病例均可追溯完整的隨訪資料，生存期自化療、手術(shù)日開始至死亡日止，中位生存期為19.6個(gè)月，至本研究結(jié)束有54例死亡。

1.2血清bFGF檢測(cè) 患者采血前晚禁食，次日清晨空腹采集3 ml靜脈血，室溫放置1 h，以3 000 r/min離心15 min，將分離血清放置于-70℃冰箱內(nèi)。采用雙抗體夾心ABC-ELISA法檢測(cè)血清bFGF水平，試劑盒由上海廣銳生物科技有限公司生產(chǎn)，所有操作過程嚴(yán)格按試劑盒說明書進(jìn)行。

1.3MVD計(jì)數(shù) 先于低倍鏡下(×40)仔細(xì)觀察切片以確定腫瘤內(nèi)血管密度較豐富區(qū)域，再于高倍鏡下(×200)計(jì)數(shù)血管密度最豐富區(qū)域MVD，并隨機(jī)選取5～6個(gè)高倍鏡視野下相對(duì)豐富區(qū)域計(jì)數(shù)MVD，計(jì)算得出平均MVD值。微血管選取基本原則：與臨近癌細(xì)胞、微血管及其他結(jié)締組織互相不連的、標(biāo)記清晰的內(nèi)皮細(xì)胞簇及內(nèi)皮細(xì)胞均作為一個(gè)單獨(dú)微血管進(jìn)行計(jì)數(shù)，對(duì)于較厚肌壁的大血管則排除于計(jì)數(shù)范圍外，血管腔、腔內(nèi)紅細(xì)胞并非計(jì)數(shù)微血管的必要條件。

2 結(jié) 果

2.1bFGF表達(dá)與臨床分期的關(guān)系 Ⅰ期bFGF表達(dá)平均值為(20.44±16.01)pg/ml，Ⅱ期、Ⅲa期、Ⅲb期、Ⅳ期的bFGF表達(dá)平均值分別為(45.33±21.58)、(77.29±29.57)、(81.44±30.04)、(98.63±39.48)pg/ml，Ⅱ期與Ⅰ期比較無顯著性差異，但Ⅲa期、Ⅲb期、Ⅳ期均與Ⅰ期bFGF水平差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義 (P<0.05)，其中Ⅳ期與Ⅰ期具有極顯著性差異(P<0.01)。

2.2MVD值與臨床分期的關(guān)系 Ⅰ期MVD平均值為(22.83±7.42)個(gè)/高倍視野，Ⅱ期、Ⅲa期、Ⅲb期、Ⅳ期MVD平均值分別是(28.43±13.46)、(33.27±14.04)、(36.02±21.11)、(40.63±15.26)個(gè)/高倍視野，Ⅱ期略高于Ⅰ期值，但無顯著性差異(P>0.05)。余下分期均與Ⅰ期bFGF差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義 (P<0.05)。

2.3bFGF的表達(dá)與MVD值相關(guān)性 本組115例肺癌患者的平均MVD值為(30.44±12.33)個(gè)/高倍視野。按Bialas等〔4〕的方法以平均值作為界限，把MVD值≤30.44個(gè)/高倍視野的36例劃為低MVD組，MVD值>30.44個(gè)/高倍視野的79例劃為高M(jìn)VD組。同時(shí)，將bFGF低于25.44 pg/ml作為無/低bFGF表達(dá)組。相關(guān)性分析顯示，bFGF在高M(jìn)VD組的bFGF未/低表達(dá)率僅25.3%，高表達(dá)率達(dá)74.7%，均與低MVD組bFGF未/低表達(dá)率(66.7%)及高表達(dá)率(33.3%)差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義 (P<0.05)。

3 討 論

大量的研究已經(jīng)證實(shí)，癌腫的生長(zhǎng)、轉(zhuǎn)移須依靠新生血管的生長(zhǎng)，當(dāng)腫瘤長(zhǎng)至體積為1 mm3時(shí)，若缺乏新生血管營(yíng)養(yǎng)供給，癌細(xì)胞就會(huì)停止繼續(xù)增殖〔5〕。腫瘤新生血管與正常血管結(jié)構(gòu)差異大，其結(jié)構(gòu)多不完整，管壁僅有單層內(nèi)皮細(xì)胞存在，平滑肌稀薄或缺失，基底膜缺乏、變薄，腫瘤細(xì)胞更容易穿透血管壁，這成為其促進(jìn)癌細(xì)胞轉(zhuǎn)移的一個(gè)機(jī)制〔6〕。bFGF屬于多肽類的陽離子細(xì)胞效應(yīng)因子，能夠通過旁分泌、自分泌等形式形成，在體內(nèi)環(huán)境中發(fā)揮各種生物活性，促進(jìn)細(xì)胞的分裂、增殖過程，并刺激癌腫組織內(nèi)毛細(xì)血管的新生。此外，bFGF還能夠刺激正常組織血管新生，并調(diào)節(jié)機(jī)體各種腺體激素的分泌〔7～9〕。bFGF多在肺癌等瘤體中過度表達(dá)，尤其對(duì)于源自中胚層的瘤體細(xì)胞及瘤內(nèi)組織，可強(qiáng)烈刺激其增殖、再分化和血管新生〔10,11〕。

MVD是定量衡量血管生成程度的一種指標(biāo)，具有直觀、敏感等特征，臨床作為金指標(biāo)應(yīng)用于評(píng)估實(shí)體瘤內(nèi)血管的生成〔12〕。使用某些特異性的抗體如抗CD34、抗CD31等單克隆抗體標(biāo)記癌腫組織的血管內(nèi)皮細(xì)胞，計(jì)數(shù)癌腫組織內(nèi)單位面積的微血管數(shù)量即是MVD〔13〕。大量研究顯示〔14,15〕，多種實(shí)體腫瘤如肺癌、乳腺癌及消化道腫瘤均存在高表達(dá)的血管生長(zhǎng)因子及迅速生長(zhǎng)的新生血管，并揭示機(jī)體癌腫組織血管生長(zhǎng)因子的過度表達(dá)及高M(jìn)VD與預(yù)后不良關(guān)系密切。因此，測(cè)量癌腫組織內(nèi)主要血管生成因子如bFGF的表達(dá)及MVD的高低，對(duì)評(píng)估腫瘤血管生成的活躍程度具有重要意義。

本研究結(jié)果說明肺癌細(xì)胞能夠主動(dòng)分泌bFGF，且分泌水平越高，其促進(jìn)腫瘤生長(zhǎng)的能力也越強(qiáng)。這與Takanami等〔16〕結(jié)論相似。此外，本組研究還顯示bFGF表達(dá)與肺癌MVD值有較高的相關(guān)性，因此可以認(rèn)為，作為一種有強(qiáng)烈促進(jìn)血管生成的細(xì)胞因子之一，bFGF在患者血清的新生血管形成中有重要作用。有研究也表明當(dāng)肺癌患者血清中bFGF呈高表達(dá)狀態(tài)時(shí)，患者生存期也會(huì)顯著縮短，據(jù)此臨床中也將肺癌患者血清中bFGF作為判定患者預(yù)后的一項(xiàng)指標(biāo)。關(guān)于bFGF促進(jìn)肺癌新生血管形成的機(jī)制，目前尚沒有定論，研究等認(rèn)為：bFGF和FGFR-1有可能是通過自分泌方式促進(jìn)腫瘤生長(zhǎng)和進(jìn)展的。其理由如下〔17〕：(1)體內(nèi)肺癌細(xì)胞和體外培養(yǎng)的肺癌細(xì)胞株都有bFGF及其受體的表達(dá)；(2) bFGF能夠作用于腫瘤細(xì)胞的有絲分裂期；(3)阻斷bFGF后腫瘤細(xì)胞的生長(zhǎng)明顯減慢；(4)bFGF的表達(dá)同腫瘤細(xì)胞的倍增時(shí)間相關(guān)，但是到了晚期，則主要是通過旁分泌機(jī)制，bFGF作用于內(nèi)皮細(xì)胞上的受體，促進(jìn)了腫瘤新生血管的形成，出此促成了腫瘤的轉(zhuǎn)移。總之，目前抗血管生成已成為腫瘤治療的新熱點(diǎn)，通過研制靶向性的抗bFGF抗體抑制腫瘤細(xì)胞的增殖和腫瘤血管生成，并阻斷腫瘤的營(yíng)養(yǎng)和轉(zhuǎn)移途徑，有可能為肺癌的治療提供新的思路。

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