針刺對骨骼肌急性鈍挫傷模型形態學影響的實驗觀察

黃怡然 張 茜 李文迅 董摩揚 李 娜 丁婷婷 路問天 嚴 安 郭長青

（北京中醫藥大學針灸推拿學院，北京，100029）

針刺對骨骼肌急性鈍挫傷模型形態學影響的實驗觀察

黃怡然 張 茜 李文迅 董摩揚 李 娜 丁婷婷 路問天 嚴 安 郭長青

（北京中醫藥大學針灸推拿學院，北京，100029）

目的：觀察針灸針斜刺阿是穴對家兔腓腸肌急性鈍挫傷修復的形態學影響。方法：采用定量負荷自由落體復制肌肉急性閉合性鈍挫傷的方法對模型家兔右后肢腓腸肌進行造模，分別于造模后即刻、造模后24 h、造模后48 h測量腓腸肌腫脹度，肌肉硬度，于造模后48 h取材，并檢測血清中肌酸激酶、乳酸脫氫酶含量，并通過HE染色光鏡和透射電鏡觀察家兔腓腸肌形態學改變。結果：造模后48 h各組家兔血清肌酸激酶（CK）含量比較，與正常組相比，模型組、針刺組、CsA模型組、CsA針刺組均顯著身高（P＜0.05），與模型組相比，CsA模型組顯著升高（P＜0.05）；造模后48 h各組家兔乳酸脫氫酶（LDH）含量，與空白組比較，模型組和CsA模型組顯著升高（P＜0.05），與模型組相比，針刺組和CsA針刺組顯著降低（P＜0.05）；HE染色光鏡下，模型組及各干預組可見不同程度的肌纖維損害；透射電鏡下模型組及各干預組可見不同程度的超微結構變化。結論：本實驗中的造模方法可以成功復制腓腸肌急性閉合性鈍挫傷模型，針灸針斜刺阿是穴可有效地促進腓腸肌急性鈍挫傷修復，環孢素干預一定程度降低了針刺的修復作用。

針刺；骨骼肌；形態學

骨骼肌的損傷在生活及運動中非常常見，包括多種原因導致的急性損傷、疲勞性損傷以及廢用性肌肉萎縮[1]，其發生率從10%～55%不等[2]。骨骼肌的損傷和再生是一個連續病理過程中的不同階段[3-5]，包括骨骼肌的變性壞死和肌纖維結構破壞、炎性反應細胞浸潤（主要是巨噬細胞）吞噬壞死細胞成分、衛星細胞的激活、分裂增殖形成新的肌管細胞進而發育成肌纖維、再生肌纖維的分化成熟和肌肉功能恢復等過程。中醫治療肌肉損傷歷史悠久，針刺治療效果佳，具有療效高，見效快，療程短，費用低，簡便易行等顯著優點。但針刺治療骨骼肌肌損傷的機制尚不明確，有待研究。骨骼肌應對環境刺激的重塑是肌纖維在生理、生化、形態、功能等各方面的協調適應，這一過程可能涉及細胞內多種信號轉導通路的激活以及多個基因的程序化表達，最終引起肌肉體積、質量、代謝狀態與工作能力的適應性變化。對骨骼肌細胞信號轉導通路以及骨骼肌重塑的細胞分子機制研究中，鈣調神經磷酸酶（CaN）信號在骨骼肌重塑中的作用近幾年備受關注。研究者通過環孢素A抑制大鼠CaN活性來研究CaN/NFAT信號通路[6]。有研究表明抑制CaN[抑制劑：環孢霉素A（CsA）]顯著減少大鼠Ⅰ型和Ⅱ型肌纖維的生長[7]。CaN/NFAT通路能促進I型肌表型和刺激肌肉生長，然而，機械刺激通過神經鈣蛋白信號促進肌肉生長，是否反映肌肉對機械刺激的直接應答仍然不清楚[8-11]。本實驗試圖通過觀察針灸針斜刺阿是穴干預腓腸肌急性鈍挫傷家兔，研究針灸針斜刺對家兔腓腸肌急性鈍挫傷修復的形態學影響，探究針斜刺治療骨骼肌損傷的機制，進一步揭示損傷的骨骼肌組織結構是如何恢復正常的，從而為臨床治療肌肉損傷提供科學的理論依據。

1 材料和方法

1.1 實驗動物 健康清潔級6月齡新西蘭兔30只，雌性，體重（2.25±0.1）kg，由北京金牧陽實驗實驗動物養殖有限責任公司提供，動物生產許可證號：SYXK（京）2013-0022。實驗過程中對動物的處置嚴格遵守國家科技部2006年發布的《關于善待實驗動物的指導性意見》。正常環境下單籠常規飼養，飼養房間為每12 h光暗循環，溫度控制在24℃，濕度60%。自由進食與飲水。

1.2 動物分組及處理方法 將30只新西蘭兔隨機分為5組，每組各6只，分別為空白組、模型組、針刺組、CsA模型組和CsA針刺組。

1.2.1 空白組（N） 正常飼養。

1.2.2 模型組（M） 造模后正常飼養。

1.2.3 針刺組（Z） 于造模成功后24 h進行腓腸肌斜刺治療，常規備皮、消毒，然后腓腸肌移行為跟腱的部位進針，直刺過皮后，將毫針調整角度至與腓腸肌成30度角，斜刺穿過腓腸肌肌束，出針并按壓片刻止血。不留針，治療1次。

1.2.4 CsA模型組（CsAM） 于造模前3 d注射開始注射CsA，按每只兔9.25 mg/（kg·d）（諾華制藥25 mg）劑量分2次行腹腔注射，直至取材（于造模成功后48 h以空氣栓塞法處死各組兔進行取材）。

1.2.5 CsA針刺組（CsAZ） CsA注射同CsA模型組；針刺治療同針刺組。

1.3 儀器與試劑 4%多聚甲醛，100%乙醇，石蠟，二甲苯等試劑均采購自北京化學試劑公司。CK、LDH試劑盒由北京中杉生物工程高技術公司提供。毫針：環球牌不銹鋼針灸針，直徑0.40 mm，長40 mm，蘇州環球針灸醫療器械有限公司制。

1.4 模型制備 25%烏拉坦4 mL/kg耳緣靜脈麻醉，俯臥位固定在解剖臺上，右后肢褪毛，右后肢于伸膝、踝背屈約90度位固定，顯示腓腸肌。選定腓腸肌肌腹中段做為打擊中心（距跟骨6.5 cm處），將固定導管（直徑2.2 cm）置于小腿腓腸肌上方，壓緊，以防目標肌群發生位移，500 g鐵棒（直徑1.5 cm）從固定導管內30 cm標記處自由下落，動能為1.47 J，導致一次肌肉挫傷，同一部位連續打擊20次，造成家兔腓腸肌鈍性損傷，不作任何處理，正常環境下常規飼養，形成急性腓腸肌鈍挫傷動物模型。

判定模型成功的標準：1）肉眼觀察可見砸傷部位皮膚完整，局部腫脹、皮膚青紫、瘀血。2）砸傷后動物活動減少，傷肢屈曲，行走不利。3）解剖病理觀察：局部解剖可見損傷范圍涉及整個腓腸肌，表現為腫脹充血，并波及周邊其他肌肉組織，但沒有骨折；HE染色光鏡下顯示，部分的肌纖維斷裂、肌細胞的變性壞死和大量的炎性反應細胞浸潤。

1.5 行為學觀測 各組動物分別于造模后即刻、造模后24 h、造模后48 h測試行為學。行為學指標的檢測為觀察造模前后動物的雙側后肢腫脹程度（距跟骨6.5 cm處測量周徑），骨骼肌（距跟骨6.5 cm處）硬度。

1.5.1 腫脹 腫脹程度用測量法，測試儀器采用皮尺，測試時，兔采取側臥、膝踝關節屈曲90度放松位，實驗側在上，在距跟骨6.5 cm處測量周徑，同時測量健側對稱部位。

1.5.2 硬度 測試儀器采用國家體委科研研制的皮脂計。測試時，兔采取側臥、膝踝關節屈曲90度放松位，實驗側在上。測試部位：距跟骨6.5 cm處的肌肉硬度。

1.6 生化檢測 所有動物均于取材前從耳緣靜脈采血3 mL，然后放于離心機中1 000 r/min，離心10 min，將上層淡黃色血清移于小離心管保存在-20℃度冰箱中。利用E COM-F 6124型半自動生化分析儀對CK、LDH活性進行測定：1 mL工作液+20μL血清，延遲1 min后，測定其1 min內吸光度的變化（CK）；500 μL工作液+20μL血清，延遲30 s后，測定其1 min內吸光度的變化（LDH）。

1.7 取材與形態學觀察 于造模成功后48 h以空氣栓塞法處死各組兔進行取材。

1.7.1 光鏡標本制作 于腓腸肌肌腹中段取5 mm× 5 mm×8 mm方塊，切取兩塊3 cm×3 cm×4 cm大小的新鮮骨骼肌，標本均放入10%甲醛溶液中固定3 d，梯度脫水、浸蠟、包埋處理，分別將兩塊標本縱向和橫向包埋，以5μm厚度連續切片，HE和甲苯胺藍染色后光鏡下觀察，觀察肌細胞的形態、肌纖維斷裂情況和異常細胞數量。

1.7.2 電鏡標本制作 剩余標本切成1 cm×1 cm×2 cm大小，經戊二醛固定1周，2.5%的戊二醛固定液4℃固定2 h，之后電鏡常規制樣操作，在透射電鏡下觀察肌纖維超微結構的變化。

1.8 數據分析方法 運用SPSS 18.0軟件，進行單因素ANOVA分析、秩和檢驗，以P＜0.05為差異具有統計學意義。

2 結果

2.1 行為學觀測結果

2.1.1 腫脹 測量結果顯示，造模后即刻各組右后肢均無明顯腫脹（P＞0.05）；造模后24 h，與空白組比較，其他四組的右后肢腫脹程度均有明顯增大（P＜0.01），說明造模成功，與模型組相比，針刺組和CsA模型組腫脹度降低，差異有統計學意義（P＜0.05）；造模后48 h，與正常組相比，其他四組腫脹差異有統計學意義（P＜0.01），模型組比較，CsA模型組腫脹明顯降低（P＜0.05），針刺組和CsA針刺組的腫脹程度差異無統計學意義（P＞0.05）；與CsA模型組比較，針刺組和CsA針刺組的腫脹程度較高，差異有統計學意義（P＜0.05）。說明CsA阻斷的CaN/NFAT通路可能是損傷肌肉進行修復的重要通道。詳見表1。

表1 各組腫脹程度比較（±s，n＝6）

表1 各組腫脹程度比較（±s，n＝6）

注：*均值差的顯著性水平為0.05，與空白組組比較（P＜0.05）；**均值差的顯著性水平為0.01，與空白組組比較（P＜0.01）；△均值差的顯著性水平為0.05，與模型組組比較（P＜0.05）；▲均值差的顯著性水平為0.05，與CsA模型組比較（P＜0.05）。

0.067±0.082 0.100±0.110 0.083±0.075模型組0.067±0.082 1.933±1.093**1.967±0.662**針刺組0.067±0.082 1.450±0.789**△1.817±0.574**▲CsA模型組0.063±0.121 1.400±0.482**△1.233±0.273**△CsA針刺組0.083±0.076 2.133±0.698**2.017±1.092 48 h空白組組別造模后即刻造模后24 h造模后**▲

2.1.2 硬度 測量結果顯示，造模后即刻，與空白組比較，其他四組右后肢腓腸肌硬度具有統計學意義（P＜0.01），組間差異無統計學意義（P＞0.05），說明造模成功，且造模各組損傷程度相當；造模成功后24 h，與正常組相比，其他四組腓腸肌硬度極顯著升高（P＜0.01），與模型組比較，針刺組、CsA模型組、CsA針刺組的腓腸肌硬度差異均無統計學意義（P＞0.05），與CsA模型組比較，針刺組、CsA針刺組的腓腸肌硬度無統計學意義（P＞0.05），與針刺組比較，CsA針刺組的腓腸肌硬度差異亦無統計學意義（P＞0.05）；造模成功后48 h，與空白組比較，其他四組腓腸肌硬度升高，有統計學意義（P＜0.01），與模型組相比，針刺組和CsA模型組組的腓腸肌硬度明顯下降（P＜0.05），與CsA模型組相比，模型組、針刺組和CsA針刺組腓腸肌硬度升高，有統計學意義（P＜0.05）。詳見表2。

表2 各組腓腸肌硬度比較（±s，n＝6）

表2 各組腓腸肌硬度比較（±s，n＝6）

注：*均值差的顯著性水平為0.05，與空白組組比較（P＜0.05）；**均值差的顯著性水平為0.01，與空白組組比較（P＜0.01）；△均值差的顯著性水平為0.05，與模型組比較（P＜0.05）；▲均值差的顯著性水平為0.05，與CsA模型組比較（P＜0.05）。

0.333±0.408 0.417±0.204 0.583±2.124模型組6.583±0.917**6.667±2.443**4.583±1.281**▲針刺組6.417±2.710**5.417±3.169**3.333±2.160**△▲CsA模型組5.500±2.214**5.417±2.311**2.333±2.090**△CsA針刺組6.000±2.259**6.000±2.280**6.833±3.125 48 h空白組組別造模后即刻造模后24 h造模后**▲

2.2 生化檢測結果

2.2.1 血清肌酸激酶（CK） 檢測結果顯示，與空白組，其他四組CK值顯著升高（P＜0.05），四組之間無統計學差異（P＞0.05）；與模型組比較，CsA模型組顯著升高（P＜0.05）；與CsA模型組組相比，模型組、針刺組和CsA針刺組均顯著降低（P＜0.05）。詳見表3。

2.2.2 乳酸脫氫酶（LDH） 檢測結果顯示，與空白組比較，模型組和CsA模型組顯著升高（P＜0.05）；與模型組比較，針刺組和CsA針刺組顯著降低（P＜0.05）；與CsA模型組比較，針刺組和CsA針刺組顯著降低（P＜0.05），針刺組和CsA針刺組之間比較無統計學意義（P＞0.05）。詳見表3

表3 各組CK值和LDH值比較（±s，U/L，n＝6）

表3 各組CK值和LDH值比較（±s，U/L，n＝6）

注：均值差的顯著性水平為0.05，*與空白組組比較（P＜0.05）；△與模型組比較（P＜0.05）；▲與CsA模型組比較（P＜0.05）。

組別CK值LDH值1645.162±424.121 253.262±39.419模型組2457.807±299.297*▲425.572±58.857*針刺組2566.788±827.591*▲251.132±137.429△▲CsA模型組3214.048±920.845*△402.730±83.753*CsA針刺組2143.183±201.294*▲235.758±76.208空白組△▲

2.3 光鏡結果

2.3.1 空白組（N） 圖1，A、B、C為空白組肌纖維橫切面分別放大40倍、100倍和400倍，鏡下可見：肌纖維橫切面呈多邊形，大小均等，肌原纖維之間的肌漿呈粉紅色，核呈圓形或橢圓形位于邊緣；D、E、F為空白組肌纖維橫切面分別放大40倍、100倍和400倍，鏡下可見：肌纖維縱切面肌細胞呈長條狀，相互平行排列，肌纖維之間有少量成纖維細胞核，每條肌纖維有許多扁橢圓形的核，位于肌纖維的周邊。

2.3.2 模型組（M） 圖2，A、B、C為模型組肌纖維橫切面分別放大40倍、100倍和400倍，鏡下可見：肌纖維橫切面邊界模糊，大小不一，部分肌纖維損傷處肌漿外漏，有大量炎性細胞浸潤，且以彌散性炎性細胞增多為主，毛細血管增生明顯；D、E、F為模型組肌纖維橫切面分別放大40倍、100倍和400倍，鏡下可見：大量肌纖維萎縮，少量肌纖維溶解，肌細胞間質水腫，大量炎性細胞浸潤，肌細胞核增多。

圖1 光鏡下空白組肌纖維橫切及縱切HE染色

圖2 光鏡下模型組肌纖維橫切及縱切HE染色

2.3.3 針刺組（Z） 圖3，A、B、C為針刺組肌纖維橫切面分別放大40倍、100倍和400倍，鏡下可見：肌纖維橫切面為不規整多邊形，大小較均等，排列較整齊，部分肌細胞水腫，間隙較空白組減小，損傷局部大量紅細胞聚集；D、E、F為針刺組肌纖維橫切面分別放大40倍、100倍和400倍，鏡下可見：損傷局部部分肌纖維腫脹，有大量炎性細胞浸潤，且較模型組損傷局部炎性細胞浸潤更明顯，炎性反應集中于肌纖維損傷處且表現為從外向里滲透。

圖3 光鏡下針刺組肌纖維橫切及縱切HE染色

2.3.4 CsA模型組（CsAM） 圖4，A、B、C為CsA模型組肌纖維橫切面分別放大40倍、100倍和400倍，鏡下可見：肌纖維橫切面為不規整多邊形，部分肌纖維邊界模糊甚至溶解，肌漿外漏，肌纖維腫脹程度較CsA模型組減輕，肌細胞間隙明顯減小，出現少量空泡（因正常血液循環被破壞，使肌纖維缺乏營養供應而壞死、萎縮所致）；D、E、F為CsA模型組肌纖維橫切面分別放大40倍、100倍和400倍，鏡下可見：肌纖維腫脹，損傷處出現炎性細胞浸潤，伴有大量紅細胞聚集。

2.3.5 CsA針刺組（CsAZ） 圖5，A、B、C為CsA針刺組肌纖維橫切面分別放大40倍、100倍和400倍，鏡下可見：肌纖維橫切面為不規整多邊形，大小較均等，可見肌纖維腫脹明顯，肌細胞間隙明顯減小，肌細胞核增多，少量炎性細胞浸潤；D、E、F為CsA針刺組肌纖維橫切面分別放大40倍、100倍和400倍，鏡下可見：可見部分肌纖維溶解，少量炎性細胞浸潤現象。

圖4 光鏡下CsA模型組肌纖維橫切及縱切HE染色

圖5 光鏡下CsA針刺組肌纖維橫切及縱切HE染色

2.4 電鏡結果

2.4.1 空白組（N） 圖6，透射電鏡下A圖放大8 000倍，顯示肌節；B圖放大12 000倍，顯示肌節、線粒體；C圖放大25 000倍，顯示線粒體、肌纖維、內質網，鏡下可見：空白組肌節、肌絲排列整齊，肌節完整，肌原纖維中Z線、M線清晰。

圖6 透射電鏡下空白組骨骼肌超微結構（縱切）

2.4.2 模型組（M） 圖7，透射電鏡下A圖放大8 000倍，顯示肌節；B圖放大12 000倍，顯示肌節、線粒體；C圖放大25 000倍，顯示線粒體、肌纖維、內質網，鏡下可見：模型組肌原纖維溶解消失，無法區分A、I帶，Z線、M線溶解。

圖7 透射電鏡下模型組骨骼肌超微結構（縱切）

2.4.3 針刺組（Z） 圖8，透射電鏡下A圖放大8 000倍，顯示肌節；B圖放大12 000倍，顯示肌節、線粒體；C圖放大25 000倍，顯示線粒體、肌纖維、內質網，鏡下可見：針刺組肌原纖維形態正常，肌絲總體排列整齊，肌節未見腫脹，Z線、M線清晰，部分損傷局部Z線、M線略有位移，線粒體數量少。

圖8 透射電鏡下針刺組骨骼肌超微結構（縱切）

2.4.4 CsA模型組（CsAM） 圖9，透射電鏡下A圖放大8 000倍，顯示肌節；B圖放大12 000倍，顯示肌節、線粒體；C圖放大25 000倍，顯示線粒體、肌纖維、內質網，鏡下可見：CsA模型組肌節腫脹明顯，肌絲紊亂，結構不清，大量肌原纖維斷裂、溶解，Z線、M線溶解消失。

圖9 透射電鏡下CsA模型組骨骼肌超微結構（縱切）

2.4.5 CsA針刺組（CsAZ） 圖10，透射電鏡下A圖放大8 000倍，顯示肌節；B圖放大12 000倍，顯示肌節、線粒體；C圖放大25 000倍，顯示線粒體、肌纖維、內質網，鏡下可見：CsA針刺組肌節明顯腫脹，部分Z線、M線斷裂溶解，部分肌原纖維扭曲、斷裂，損傷局部有結締組織增生，可見大量聚集的線粒體，且部分線粒體明顯水腫，嵴開始融解，出現空泡化。

圖10 透射電鏡下CsA針刺組骨骼肌超微結構（縱切）

3 分析及討論

骨骼肌損傷屬于中醫的＂經筋病＂的范疇，《素問·調經論》中指出“病在筋，調之筋”，指出治療經筋病宜以調筋為主；《靈樞經·官針第七》指出：“病痹氣痛而不去者，取以毫針。”“九曰浮刺，傍入而浮之，以治肌急而寒者也。”在適應五臟的五種刺法中又指出：“四曰合谷刺，合谷刺者，左右雞足，針于分肉之間，以取肌痹。”《靈樞經·經筋第十三》論述筋病的治療原則時說：“治在燔針劫刺，以知為數，以痛為腧”。《靈樞·官針》云：“傍針刺者，直刺、傍刺各一，以治留痹久居者也”。《內經·十二刺》云：“恢刺者，直刺傍之，舉之前后，恢筋急，以治筋痹也”。這些論述指出了肌病、筋病等疼痛日久的痹癥，應選用毫針，取阿是穴，采用斜刺的針法治療。盧鼎厚等[12-16]借鑒了中醫療法，通過一系列實驗研究發現，斜刺阿是穴治療肌肉損傷是通過加強收縮蛋白的組裝、合成，促進收縮結構和功能的恢復而達到治療目的的，且其效果主要不是通過神經和經絡的調節，而是通過肌肉本身所固有的外周機制實現的。故本實驗選取針灸針斜刺阿是穴治療骨骼肌鈍挫傷家兔模型，并且選擇在造模成功后24 h開始進行針刺治療。

對骨骼肌細胞信號轉導通路以及骨骼肌重塑的細胞分子機制研究中，鈣調神經磷酸酶（CaN）信號在骨骼肌重塑中的作用近幾年備受關注。IGF-Ⅰ使肌纖維細胞膜上的Ca2+通道活性提高，導致細胞溶質Ca2+增加。胞質中的Ca2+與鈣調節蛋白（CaM）結合激活CaN，具有活性的CaN對激活T細胞核因子（Nuclear Factor of Activated T Cells，NFAT）去磷酸化，將活化T細胞核因子易位到細胞核并且導致基因轉錄[17]。CaN是蛋白磷酸脂酶，在肌肉肥大中起著重要的作用，是骨骼肌纖維重構的重要信號因子[18-21]，CaN/NFAT信號激活能促進肌纖維的融合和分化。本實驗進一步深入研究就可探討CaN/NFAT通路是否為針刺促進損傷骨骼肌修復的重要通路。

行為學觀察結果顯示急性鈍挫傷造模成功，各組家兔右后肢腓腸肌腫脹程度對比顯示，針刺組較CsA組、CsA針刺組骨骼肌較明顯修復，而腓腸肌硬度的指標作為檢測指標，在造模后48 h，模型組出現自然恢復，而較模型組相比針刺組、CsA模型組的肌肉硬度顯著降低，說明針刺和環孢素均可在一定時間內降低損傷肌肉硬度，促進其向正常組織硬度恢復。造模后48 h各組家兔血清肌酸激酶（CK）含量較正常顯著增加，與模型組相比，針刺組、CsA針刺組無顯著差異，CsA模型組顯著升高，說明急性鈍挫傷造模及針刺刺激均使模型兔的CK值升高，且CsA模型組損傷程度最高，急性鈍挫傷造模及環孢素均可導致肌損傷，其損傷作用可因損傷條件疊加出現累積效應。乳酸脫氫酶（LDH）含量，與空白組比較，模型組和CsA模型組均顯著升高，與模型組比較，針刺組和CsA針刺組均顯著降低，說明急性鈍挫傷造模及環孢素均使模型兔血清中乳酸脫氫酶含量升高，而針刺能有效改善肌損傷模型兔血清中乳酸脫氫酶含量，即使環孢素阻斷條件下，針刺仍顯示其促進骨骼肌外周循環方面的修復作用。

本實驗HE染色光鏡下，模型組可見大量肌纖維萎縮，局部肌纖維斷裂，損傷處肌漿外漏，有大量炎性細胞浸潤，且以彌散性炎性細胞增多為主，毛細血管增生明顯，少量肌纖維溶解，肌細胞間質水腫，肌細胞核增多；損傷局部部分肌纖維腫脹，針刺組肌纖維排列較整齊，肌細胞間隙較空白組減小，損傷局部大量紅細胞聚集，有炎性細胞浸潤，且較模型組損傷局部炎性細胞浸潤更明顯，炎性反應集中于肌纖維損傷處且表現為從外向里滲透。該結果也與田野等在對骨骼肌纖維超微結構的影響中總結出的骨骼肌急性損傷的典型病理變化遵循特點一致[22-23]。說明本造模方法可成功復制腓腸肌急性閉合性鈍挫傷模型，且針刺能有效促進損傷的骨骼肌修復。CsA模型組可見肌纖維腫脹明顯，部分肌纖維溶解肌細胞間隙明顯減小，肌細胞核增多，少量毛細血管增生，無大量炎性細胞浸潤現象，CsA針刺組肌纖維腫脹程度較CsA模型組減輕，肌細胞間隙明顯減小，出現少量空泡（因正常血液循環被破壞，使肌纖維缺乏營養供應而壞死、萎縮所致），損傷處出現炎性細胞浸潤，有大量紅細胞聚集。說明阻斷CaN/NFAT通路后，損傷骨骼肌的修復受到了很大的影響。透射電鏡下，模型組肌原纖維溶解消失，無法區分A、I帶，Z線、M線溶解，針刺組肌原纖維形態正常，肌絲排列整齊，肌節未見腫脹，Z線、M線清晰，損傷局部聚集較多線粒體和肌質網，正常的肌節附近有普遍增多的線粒體，進一步證明了針灸針斜刺阿是穴可以有效地促進腓腸肌急性鈍挫傷修復。CsA模型組肌絲紊亂，結構不清，大量肌原纖維斷裂、溶解，Z線、M線溶解CsA針刺組肌節腫脹明顯，肌節腫脹，Z線溶解，部分肌原纖維扭曲、斷裂，損傷局部有結締組織增生，有大量線粒體聚集，并出現線粒體損傷現象，環孢素可減緩骨骼肌局部損傷反應，同時也降低了針刺的修復作用，也進一步佐證了CaN/NFAT通路不是針刺誘導損傷骨骼肌修復的唯一通路，但其在促進骨骼肌修復的過程中起重要作用。

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（2013-10-25收稿 責任編輯：王明）

Observation on Experiment of the Morphological Effects of Acupuncture on Acute Blunt Skeletal Muscle Contusion Model

Huang Yiran，Zhang Qian，LiWenxun，Dong Moyang，Li Na，Ding Tingting，Lu Wentian，Yan An，，Guo Changqing
（School of Acupuncture and Moxibustion，Beijing University of Chinese Medicine，Beijing 100029，China）

Objective：To observe the morphological effects of acupuncture on Ashi points of rabbits with acute gastrocnemius blunt contusion.Methods：Modeling was given on gastrocnemius muscle in rabits＇hindquarter by using method of free falling with quantitative load to duplicate acute skeletal muscle injury.The swelling degree and hardness of gastrocnemius（immediately，24hours，48hours after building the model）was measured.Materials were taken 48hours after building the model.The content of CK and LDH in serum were tested.The morphological changes of gastrocnemius under light microscope and electron microscope were observed.Results：48 hours after building the model，the content of CK of model group，acupuncture group，CsA model group and CsA acupuncture group increased significantly compared the nature group（P＜0.05）；compared with the nature group，differences of the content of LDH of model group and CsA model group increased significantly（P＜0.05）；compared with the model group，acupuncture group，CsA model group and CsA acupuncture group decreased significantly（P＜0.05）.Under light microscope，different kinds of muscle fiber trauma could be found in all groups except the nature group.Under electron microscope，Ultrastructural changes could be seen in all groups except the nature group.Conclusion：The modeling method can successfully copy acute closed skeletal gastrocnemius muscle injury model.Acupuncture could promote the reparative process of acute blunt muscle effectively，while CsA would partially reduce the repairing effect of acupuncture.

Acupuncture；Skeletal muscle；Morphology

R274.3；R246.9

A

10.3969/j.issn.1673-7202.2014.04.025

北京中醫藥大學青年教師自主課題（編號：2012-QNJSZX010）；國家級大學生創新創業訓練計劃項目（編號：201210026019）

黃怡然（1981—），北京中醫藥大學針灸推拿學院，博士生，研究方向：針推康復治療運動神經系統疾病，E-mail：caicai13＠126.com

郭長青（1959—），男，教授，主任醫師，北京中醫藥大學針灸推拿學院針刀中心主任，電話傳真：64287525，通信地址：北京市朝陽區北三環東路11號，100029，E-mail：guochangqing66＠163.com