左右利手捻轉補瀉手法對血虛證模型大鼠RBC、Hb、IRF的影響

肖敏佳 褚亞宇 柳 楊 劉清國 王朝陽

（北京中醫藥大學針灸學院，北京，100029）

針灸經絡

左右利手捻轉補瀉手法對血虛證模型大鼠RBC、Hb、IRF的影響

肖敏佳 褚亞宇 柳 楊 劉清國 王朝陽

（北京中醫藥大學針灸學院，北京，100029）

目的：探討捻轉補瀉手法與具體捻轉方向的關系。方法：將80只Wistar大鼠隨機分為7組：空白組（A組）、模型組（B組）、留針組（C組）、右手前捻組（D組）、右手后捻組（E組）、左手前捻組（F組）、左手后捻組（G組）。采用放血加限食法制備血虛證模型。隔日針刺1次，共10次。檢測大鼠紅細胞計數（RBC）、血紅蛋白（Hb）、幼稚網織紅細胞比率（IRF）。結果：治療前1 d，與A組相比，其余各組RBC、Hb顯著降低（P＜0.01），IRF顯著升高（P＜0.01）；治療第7 d，各組RBC、Hb比較，B組含量最低（P＜0.05），C、D、F 3組差異不明顯（P＞0.05），A、E、G 3組差異無統計學意義（P＞0.05），但前3組含量高于后3組（P＜0.05），IRF組間差異不明顯（P＞0.05）；治療第14、21 d，各治療組RBC、Hb、IRF組間差異均不明顯（P＞0.05）。結論：捻轉補瀉手法與左、右捻轉方向無關，無論何手持針，均拇指前捻用力為“補”，拇指后捻用力為“瀉”。

捻轉補瀉手法；捻轉方向；血虛證

捻轉補瀉手法是最基本、最常用的針刺補瀉手法之一，然而也是存在疑問最多的一個手法。其構成的基本要素主要包括捻轉方向、力度、幅度及頻率[1-3]。本研究從捻轉方向入手，通過觀察左右利手不同針刺捻轉方向對血虛證大鼠RBC、Hb、IRF的影響是否有差異，探討捻轉補瀉手法與具體捻轉方向的關系，以期為捻轉補瀉的標準化提供實驗依據。

1 材料與方法

1.1 材料 1）實驗動物：健康雄性SPF級Wistar大鼠80只，體重180～200 g，購于北京維通利華實驗動物中心（許可證號：SCXK（京）2012-0001），飼養于北京中醫藥大學針灸學院動物實驗室。2）主要儀器與試劑：漢醫牌毫針（天津華鴻醫材有限公司）、1N圓筒測力計（余姚市低塘街道輝旺塑料模具廠）、電子稱（北京賽多利斯儀器系統有限公司）、XE-5000型全自動血細胞分析儀（日本Sysmex公司）、機械鬧鐘（溫州市環星計時器有限公司）、德國Greiner非可替真空采血管。

1.2 動物分組 隨機分為7組：空白組（A組）、模型組（B組）、留針組（C組）、右手前捻組（D組）、右手后捻組（E組）、左手前捻組（F組）、左手后捻組（G組）。前2組每組10只，后5組統稱為治療組，每組12只。

1.3 血虛證動物模型的制備及處理方法 1）動物模型制備：除A組外，其余各組均采用放血加限食療法[4]制備血虛型大鼠模型。以75%乙醇擦拭鼠尾，再浸入溫水中，使尾部血管充血后，切斷距尾尖2～3 mm的長度，每只每次放血量1.5 m L，隔日1次，共計5次。自造模之日起改變正常喂養規律，半量與足量飲食隔日交替給予。制成的血虛證大鼠外觀精神萎靡、毛枯蓬松、唇色淡白、食欲下降、體重減輕，外周血紅細胞計數及血紅蛋白含量降低達20%以上。2）各組大鼠的處理方法：穴位定位按華興邦等[5]制定的《大鼠穴位圖譜的研制》，選取“足三里”。于造模完成后第2天開始針刺，隔日1次，共10次。A組：不予任何處理，正常同步飼養。B組：造模，不針刺治療，與各針刺組同步捆綁固定，20 min/次。C組：造模，針刺大鼠雙側“足三里”，刺入5 mm，靜留針20 min。D組：造模，針刺大鼠雙側“足三里”，刺入5 mm，右利手每側行針1 min，行針時右拇指前捻用力重（力度約0.08N，彈簧測力計測得），還原力輕，捻轉幅度360度/次（針體下固定紙條，控制捻轉幅度），捻轉頻率60次/min（捻轉頻率與機械鬧鐘聲音同步，鬧鐘每秒響4次，規定前捻或后捻用力重耗時0.25 s，停頓用時0.5 s，還原時0.25 s），剩余時間留針，共20 min。E組、F組、G組：E組右利手拇指后捻用力重，還原力輕；F組左利手拇指前捻用力重，還原力輕；G組左利手拇指后捻用力重，還原力輕。其余操作方法同D組（兩名操作者分別為針灸專業同等資歷左利手、右利手學生）。

1.4 指標檢測 分別于治療前1 d、治療第7 d、14 d、21 d，檢測各組大鼠血液中RBC、Hb、IRF值。用剪尾采血法[6]，固定大鼠并露出鼠尾，將尾部毛剪去后消毒，然后浸在溫水中5 min，使尾部血管充盈，再將尾擦干，用剪刀剪去尾尖0.1～0.2cm，讓血液自由滴入0.5 mL采血管中，每只取血0.2 mL，輕搖以確保無凝血及溶血，采血結束后，對傷口消毒并壓迫止血。后3次采血，只需將剪刀緊緊貼近創口輕輕一剪，便可繼續收集血樣。每次采血結束后，4 h內送檢（XE-5000全自動血細胞分析儀檢測）。

2 結果

2.1 不同時段各組大鼠RBC、Hb值的比較（見表1、表2） 表1、表2示，治療前1 d，各造模組RBC、Hb值均顯著低于A組（P＜0.01），造模成功；治療第7 d，B組RBC、Hb值低于其余各組（P＜0.05），C、D、F組3組RBC、Hb差異不明顯（P＞0.05），A、E、G3組RBC、Hb差異無統計學意義（P＞0.05），但前3組RBC、Hb值高于后3組（P＜0.05）；治療第14 d，各造模組RBC、Hb值均高于A組（P＜0.05），但組間差異不明顯（P＞0.05）；治療第21 d，各組RBC、Hb差異均無統計學意義（P＞0.05）。

表1 針刺治療前后各組大鼠RBC值的比較（±s，1012/L）

表1 針刺治療前后各組大鼠RBC值的比較（±s，1012/L）

注：與A組相比，▲P＜0.01，▼P＜0.05；與B組相比，◆P＜0.05；與C組相比，■P＜0.05；與D組相比，★P＜0.05；與E組相比，●P＜0.05。

組別例數治療前1 d第7 d第14 d第21 d A組10 7.62±0.35 8.93±0.52 7.93±0.26 8.36±0.49 8.73±0.33 B組10 5.84±0.20▲7.05±0.34▼8.95±0.28▼9.00±0.48 C組12 5.71±0.30▲8.47±0.41▼◆9.22±0.44▼9.34±0.48 D組12 5.88±0.44▲8.78±0.30▼◆9.46±0.62▼9.34±0.70 E組12 5.90±0.52▲8.07±0.37◆■★9.10±0.52▼9.10±0.76 F組12 5.80±0.36▲8.59±0.42▼◆●9.16±0.43▼9.30±0.43 G組12 5.84±0.57▲7.71±0.60◆■★8.98±0.50▼

表2 針刺治療前后各組大鼠Hb值的比較（±s，g/L）

表2 針刺治療前后各組大鼠Hb值的比較（±s，g/L）

注：與A組相比，▲P＜0.01，▼P＜0.05；與B組相比，◆P＜0.05；與C組相比，■P＜0.05；與D組相比，★P＜0.05；與E組相比，●P＜0.05。

組別例數治療前1 d第7 d第14 d第21 d A組10 162.89±6.03 166.33±5.48 170.84±5.47 175. 178.89±8.28 78±7.51 B組10 125.33±4.42▲156.11±4.54▼180.33±4.27▼179.67±7.40 C組12 123.67±4.77▲176.22±7.63▼◆184.11±5.69▼182.78±6.76 D組12 123.44±6.02▲178.67±6.69▼◆182.11±7.49▼183.56±10.95 E組12 122.78±6.04▲166.56±7.11◆■★179.56±5.85▼176.56±8.09 F組12 125.00±5.63▲178.44±6.67▼◆●183.00±9.27▼186.00±6.18 G組12 126.78±5.56▲168.56±6.80◆■★178.11±6.64▼

2.2 不同時段各組大鼠IRF值的比較（見表3） 表3示，治療前，各造模組IRF值均顯著高于A組（P＜0.01）；治療第7 d，各造模組IRF值明顯低于A組（P＜0.05），但組間差異不明顯（P＞0.05）；治療第14 d、21d，各組差異無統計學意義（P＞0.05）。

表3 不同時間段大鼠IRF值的比較（±s，%）

表3 不同時間段大鼠IRF值的比較（±s，%）

注：與A組相比，▲P＜0.01，▼P＜0.05。

組別例數治療前1d第7d第14d第21d A組1030.48±2.48 27.66±3.3924.90±5.0621.71±3.34 B組1057.51±3.32▲20.64±4.29▼21.89±3.9619.34±4.72 C組1255.21±3.28▲18.22±3.87▼19.48±4.5117.77±4.91 D組1255.92±2.79▲16.51±2.82▼18.54±3.5515.50±6.18 E組1254.68±3.22▲19.14±3.33▼22.40±3.8118.28±5.74 F組1256.30±2.78▲16.88±2.76▼19.44±4.4418.16±5.34 G組1257.42±3.85▲17.63±4.39▼21.97±5.6720.13±5.19

3 討論

捻轉補瀉手法始見于《黃帝內經》，但未明確其具體操作。金·竇漢卿在《標幽賦》中指出：“迎奪右而瀉涼，隨濟左而補暖”，首先提出了以轉針的左右方向來區別補瀉。明·楊繼洲《針灸大成》載：“補針左轉大指努出，瀉針右轉大指收入?！闭J為“左轉從陽，能行諸陽；右轉從陰，能行諸陰”是其作用原理。現代針灸教材中，亦將左右轉針作為針刺捻轉方向的一個標志。臨床上，對右利手操作者而言，拇指向前乃左轉，拇指向后即右轉，若換左利手操作，當如何區分補瀉？

在本研究中，我們固定了捻轉力度、捻轉幅度以及捻轉頻率，分組采用不同的捻轉方向，即通過針刺大鼠“足三里”穴，觀察左右利手不同捻轉方向產生的補瀉效應是否一致。同時，根據血細胞的發生原理[7]，選擇了與貧血密切相關的實驗指標：RBC、Hb、IRF。貧血的診斷及鑒別診斷主要依靠檢查外周血的血紅蛋白（Hb）、紅細胞數（RBC）及反映紅系造血系統功能的網織紅細胞數（RET），其中幼稚網織紅細胞比率（IRF）的動態觀察比網織紅細胞其他指標及WBC、RBC、PLT都更為敏感[8]。

本實驗觀察到：對于失血所致的血虛證，外周血中RBC、Hb值在造模后明顯降低，IRF值顯著升高，說明造模成功。在血虛證治療第7d，不同處理組之間RBC、Hb值有明顯區別：空白組及各治療組RBC、Hb含量均明顯高于模型組，其中空白組與右手后捻組、左手后捻組之間差異不明顯，留針組與右手前捻組、左手前捻組之間差異不明顯，但前3組RBC、Hb含量明顯低于后3組。說明無論靜留針還是行針補瀉，對于虛證，針刺均有良好的恢復作用；行針時，右手前捻效應與左手前捻效應一致，右手后捻效應與左手后捻效應無異，但前捻效應優于后捻效應。在血虛證治療第14 d及21d，各治療組RBC、Hb差異均無統計學意義，可能由于機體進入自我恢復階段，針灸在此時作用不明顯。此外，治療第14d及21d，IRF值各組差異均不明顯，說明因失血所致血虛證，僅對機體外周血循環有影響，對骨髓造血功能影響不明顯。

綜上所述，捻轉補瀉手法與左、右捻針方向無關，無論何手持針，均拇指前捻用力為“補”，拇指后捻用力為“瀉”，其作用機制尚需進一步研究。

[1]楊兆民.刺法灸法學[M].上海：上?？茖W技術出版社，1996：29-30.

[2]陸壽康.刺法灸法學[M].北京：中國中醫藥出版社，2003：75-76.

[3]王富春.刺法灸法學[M].上海：上海科學技術出版社，2009：26.

[4]苗明三，方曉艷，孫艷紅.血虛動物模型復制的思考[J].光明中醫，2003，18（3）：8-9.

[5]華興邦，周浩良.大鼠穴位圖譜的研制[J].實驗動物與動物實驗，1991（1）：1-5.

[6]趙巧輝，劉孟洲.實驗動物采血方法[J].江西畜牧獸醫雜志，2006，（4）：4-6.

[7]成令忠.組織學[M].北京：人民衛生出版社，1994：115-117.

[8]陳梅，方偉禎，丁鶴林，等.網織紅細胞六項指標的正常參考值調查[J].嶺南急診醫學雜志，2007，12（1）：51-53.

（2013-12-26收稿 責任編輯：曹柏）

Effects of Left-Handed and Right-Handed Twisting-Twirling Reinforcing-Reducing Manipulations of Acupuncture on the RBC、Hb、IRF Performances of Rats with Blood-Deficiency Syndrome

Xiao Minjia，Chu Yayu，Liu Yang，Liu Qingguo，Wang Zhaoyang
（School of Acupuncture and Moxibustion，Beijing University of Chinese Medicine，Beijing 100029，China）

Objective：To explore the relations between the twisting-twirling reinforcing-reducing manipulation of acupuncture and the twisting-twirling direction.Methods：Eighty Wistar rats were randomly divided into7 groups，including a blank group（group A），model group（group B），acupuncture group（group C），right-hand-forward twisting group（group D），right-hand-backward twisting group（group E），left-hand-forward twisting group（group F）and left-hand-backward twisting group（group G）.All the rats were made into blood-deficiency models by tail-bleeding and food restriction.Acupuncture was given every other day with 10 sessions totally，and the levels of red blood cell（RBC），hemoglobin（Hb），immature reticulocyte fraction（IRF）weremeasured at different time periods.Results：One day before the treatment，the RBC and Hb of all the groups，except the blank group（A group），decreased significantly（P＜0.01），while the IRF increased obviously（P＜0.01）.On the7th day of the treatment，the RBC and Hb of each group weremeasured and compared respectively，and the results were as follows：（a）group Bwas the lowest（P＜0.05）；（b）no statistical differences（P＞0.05）were found among the group C，group D and group F；（c）no statistical differences（P＞0.05）were observed among the group A，group E and group G；（d）The RBC and Hb of the first three groups were obviously higher than those of the latter three groups（P＜0.05）.Besides no significant IRF differences（P＞0.05）were found among all the treatment groups.No statistical differences（P＞0.05）were observed among all the groups on the 14th and 21th day of treatments.Conclusion：There exists no essential relation between the twisting-twirling reinforcing-reducing manipulation and the right or left twisting-twirling direction.Moreover，thumb forward twisting is“reinforcing method”，while thumb backward twisting is“reducing method”，no matter using the right or the left hand.

Twisting-twirling reinforcing-reducing manipulation；Twisting-twirling direction；Blood deficiency syndrome

R-332；R245.31+1

A

10.3969/j.issn.1673-7202.2014.04.026

國家自然基金課題資助項目（編號：81072861）

肖敏佳（1987—），女，2011級針灸專業碩士研究生

王朝陽（1971—），男，副教授，研究方向：針灸作用機制與臨床研究，E-mail：xlywzy＠163.com